Türkiye ve Avrupa Birliği’nin Jeotermal Enerji Potansiyel

O uso de oocistos esporulados de N. caninum, via oral em cães, não causou infecção patente com produção de oocistos, entretanto a formação de anticorpos parece ter sido dose dependente.

Este foi o primeiro estudo com este objetivo.

Para a obtenção dos oocistos utilizados no estudo, cérebros de búfalos soropositivos para N. caninum serviram como inóculos. Estes búfalos se mostraram bons doadores como observado por Rodrigues et al. (2004).

Dos três cães utilizados para obtenção de oocistos, dois foram imunossuprimidos e destes, um veio à óbito e o outro eliminou oocistos nas fezes por 10 dias. Esses três cães eram animais jovens, com aproximadamente 60 dias de idade nos quais a infecção pelo N. caninum associada à imunossupressão e a presença de infecção concomitante por outros parasitos (Cystoisospora canis, C. ohioensis e Giardia spp), provavelmente foram a causa do óbito de um dos cães.

O cão que não recebeu tratamento imunossupressor não eliminou oocistos durante os 30 dias de observação. Lindsay et al. (1999) utilizaram dois cães em infecção experimental com cistos de N. caninum sendo que um deles foi imunossuprimido. Estes cães receberam cérebro de camundongos e observou-se a eliminação de oocistos nas fezes. O cão que recebeu o tratamento imunossupressor eliminou oocistos por mais tempo, do 5º ao 10º dia pós infecção (dpi) e no 17ºdpi, e em maior quantidade (cerca de 4,5x106 oocistos). O cão que não recebeu tal tratamento, eliminou oocistos em apenas dois momentos, no 6º e no 9ºdpi e, em ambos os momentos, poucos oocistos. Assim, como observado no presente estudo, o tratamento imunossupressor é indicado quando se necessita de uma grande quantidade de oocistos de N. caninum.

O período pré patente de oito dias, observado neste estudo, está em concordância com trabalhos de infecção experimental em cães (GONDIM et al., 2002; McALLISTER et al., 1998; LINDSAY et al., 1999; RODRIGUES et al., 2004). A quantidade de oocistos eliminada pelo cão durante os 10 dias foi de aproximadamente 80.000 oocistos. Rodrigues et al. (2004) também infectaram cães com cérebro de búfalos e estes eliminaram oocistos em quantidade que variou de 20.000 a 800.000 oocistos. Os cães eram jovens, porém não imunossuprimidos.

53

A utilização de cães jovens em infecções experimentais com N. caninum para a obtenção de oocistos já foi relatada por Gondim et al. (2005), mostrando que estes eliminam mais oocistos que os animais adultos sendo também importante o uso de cães jovens para tal finalidade.

Os oocistos observados nas fezes dos cães doadores, por serem morfologicamente similares, foram diagnosticados como sendo Neospora-Hammondia (DUBEY, 1999; DUBEY et al., 2002; SCHARES et al., 2001). Assim, amostras foram analisadas, por dia de eliminação, pela PCR-RFLP, método que os identificou como sendo N. caninum. Só então um pool destes oocistos foi realizado para compor o inóculo utilizado no presente estudo.

Gerbilos foram utilizados para testar a viabilidade destes oocistos. Dubey e Lindsay (2000) demonstraram ser essa espécie animal um bom modelo de infecção oral com oocistos e vários outros estudos já os utilizaram com tal finalidade. Ramamoorthy et al. (2005) realizaram um estudo de infecção experimental em gerbilos com diferentes doses de taquizoítos de N. caninum inoculados intraperitonealmente, de 1x106 a 5x106, sendo os gerbilos observados durante 20 dias. Todos tornaram-se menos ativos ao redor do 4º a 5ºdpi e todos os gerbilos do grupo infectado com 5x106 taquizoítos morreram entre o 7º e 10ºdpi. Dubey et al. (2007) inocularam gerbilos com tecido nervoso de cães naturalmente infectados e estes apresentaram soroconversão, porém não foram observados cistos teciduais quando os gerbilos foram eutanasiados três meses após a infecção. Resultado semelhante foi encontrado por Basso et al. (2001) que infectaram três gerbilos com oocistos de N. caninum, via oral, e imunossuprimiram dois deles. Apenas um dos gerbilos imunossuprimidos apresentou cistos no cérebro.

Kang et al. (2009) realizaram um estudo infectando gerbilos com taquizoítos de N.

caninum (de 5x101 a 4x107 taquizoítos), intraperitonealmente, e determinaram a distribuição

tecidual e as lesões histológicas nos gerbilos infectados num período de horas a até nove dias pós infecção. Através dos resultados da PCR observaram que o cérebro foi o último órgão a ser invadido pelo parasito, e que estes inicialmente penetram no fígado, baço e rim e, subsequentemente, espalham-se para órgãos adjacentes. As lesões histológicas foram observadas apenas no fígado e no baço. Assim, a inclusão desses órgãos juntamente com o cérebro, na pesquisa do parasito, é medida recomendada.

A infecção dos cães e dos gerbilos foi feita simultaneamente e com o mesmo inóculo, pois o tempo de observação da infecção nos roedores é de, no mínimo, oito semanas e os oocistos poderiam não estar apresentando a mesma viabilidade após este período. O encontro

54

de anticorpos séricos, seja pela RIFI ou pelo WB e de DNA, pela PCR em tempo real dos tecidos dos gerbilos, confirmaram a viabilidade dos oocistos de N. caninum utilizados como inóculos. Entretanto, cistos de N. caninum não foram observados nos cérebros desses animais semelhante ao observado em outros estudos (DUBEY et al., 2007; BASSO et al., 2001)

Uma explicação para o não encontro de cistos teciduais pode ser a quantidade de tecido examinada, mesmo utilizando três alíquotas para cada gerbilo a amostra ainda é reduzida. Dubey (1988) avalia que deva existir um cisto de T. gondii por 50g de tecido em grandes animais, entretanto para N. caninum este dado não é conhecido, podendo ser ainda menor, visto que cistos desse agente são pouco observados em órgãos que não o sistema nervoso central. Com T. gondii sabe-se que a cepa pode ser mais ou menos formadora de cistos e este fato também pode ocorrer com N. caninum. Mesmo com o resultado negativo no exame direto, recomenda-se que se realize esta pesquisa no tecido nervoso uma vez que em alguns estudos, com esses animais, cistos foram encontrados e auxiliam muito na confirmação do diagnóstico (GONDIM et al., 2001; PENA et al., 2007).

A pesquisa de DNA do N. caninum pela PCR em tempo real mostrou-se sensível na detecção do agente no cérebro dos gerbilos infectados com oocistos, porém não teve o mesmo sucesso em relação ao coração. Dubey et al. (1998) analisaram amostras de tecido (cérebro e músculo) de cães infectados naturalmente e ambos foram positivos pela PCR. De Marez et al. (1999) detectaram DNA no cérebro e medula de bezerros infectados, mas o mesmo tecido analisado em duplicata foi positivo em uma reação e negativo em outra. Trees et al. (2002) realizaram um pool de tecidos (cérebro e coração) das vacas infectadas e detectaram a presença do parasito, também pela PCR.

O uso da IHQ para detecção de DNA nos tecidos dos gerbilos inoculados com oocistos mostrou ser esta técnica de baixa sensibilidade. Como o agente é pesquisado em tecidos e apenas uma pequena quantidade é analisada, os cistos podem não estar presentes nessas amostras. Rosa et al. (2001) demonstraram que caprinos infectados experimentalmente com T. gondii e com diagnóstico da infecção confirmado por provas sorológicas e biológicas e, inclusive, com sintomatologia clínica de toxoplasmose nos animais, não conseguiram encontrar o agente pela técnica de IHQ.

Não há lesões patognomônicas de neosporose. Embora o diagnóstico presuntivo possa ser feito pelo exame de seções de cortes histológicos corados com hematoxilina e eosina (HE), a IHQ é necessária porque há poucos parasitos presentes nos tecidos e muitas vezes não visíveis no HE. Raramente há parasitos de N. caninum em número suficiente em cada corte

55

histológico, portanto, a sensibilidade da técnica para detectar o parasito nos tecidos é baixa (DUBEY, 1999). Cérebro, coração, fígado, placenta e sangue são as melhores amostras para diagnóstico e este aumenta se múltiplos tecidos são examinados em conjunto (DUBEY, 2003).

As técnicas sorológicas (RIFI e WB) mostraram-se úteis com resultados semelhantes, sendo que o WB foi utilizado como confirmatório da RIFI, tanto para os gerbilos como para os cães. Ambas as técnicas foram mais sensíveis que os outros métodos utilizados (PCR, IHQ e exame direto).

Os achados deste estudo com infecção de cães com oocistos de N. caninum não foram similares ao que ocorre com T. gondii. A ingestão de oocistos esporulados de T. gondii, pelos gatos, é capaz de produzir infecção e consequentemente a eliminação de oocistos nas fezes. O período pré patente é maior (18 dias ou mais) e um pequeno número de gatos eliminam esses oocistos e em um número reduzido. Estes achados foram observados por Dubey (2006) que infectou 29 gatos com oocistos, via oral, com doses variando de 101 a 106, e apenas um gato (3,44%), que recebeu a dose de 103, eliminou oocistos nas fezes e o período pré patente foi de 23 dias. Assim, oocistos de T. gondii não são patogênicos para os gatos, mas são para camundongos. Todos os gatos que receberam a maior dose soroconverteram sugerindo que a infectividade dos oocistos de T. gondii foi dose dependente e que o período pré patente depende do estágio e não da dose do parasito.

Assim, para T. gondii e N. caninum como em outros coccídeos formadores de cistos (como Sarcocystis cruzi), a forma mais eficiente de transmissão do agente é pelo carnivorismo quando o hospedeiro definitivo ingere cistos teciduais contendo bradizoítos (DUBEY et al., 2001; 2006).

No presente estudo os cães receberam doses variando de 103 _{a 10}4 _{oocistos e apenas}

os cães que receberam 104 oocistos soroconverteram. Esta dose foi considerada alta, uma vez que cães natural ou experimentalmente infectados eliminam poucos oocistos nas fezes (BASSO et al., 2001, 2008; McGARRY et al., 2003; McINNES et al., 2006; SCHARES et al., 2005; SLAPETA et al., 2002) e, como visto com T. gondii, uma dose de 103 _{oocistos foi}

capaz de produzir infecção em um gato. Sabe-se que em gerbilos uma dose de 103 _{oocistos de} N. caninum foi capaz de causar a infecção e a morte entre seis e 13 dpi (DUBEY e

LINDSAY, 2000). De Marez et al. (1999) infectaram bezerros com oocistos de N. caninum (104 e 105) e todos soroconverteram quatro semanas p.i e DNA foi detectado pela PCR. Trees et al. (2002) infectaram vacas prenhes com 600 oocistos de N. caninum; esta dose foi

56

suficiente para infectar esses animais, confirmado pela PCR e pela soroconversão três semanas p.i., porém não foi capaz de causar aborto e não houve evidência de transmissão transplacentária.

Sabe-se que a ausência de anticorpos não significa que o cão esteja livre da infecção. Cães infectados experimentalmente podem eliminar oocistos sem apresentarem soroconversão (DIJKSTRA et al., 2001; LINDSAY et al., 1999; RODRIGUES et al., 2004; SCHARES et al., 2001) e já foi observada a formação de anticorpo em cães em intervalo superior a sete meses (GONDIM et al., 2002).

Pela predileção do parasito pelo sistema nervoso e sabendo-se ser o gerbilo um modelo biológico útil na pesquisa do N. caninum, optou-se por realizar bioensaio em gerbilo com o cérebro de um cão que soroconverteu e com o cérebro de outro cão soronegativo. Também foi realizada a PCR (Nc5) e a IHQ, tanto do cérebro como de outros tecidos (músculo, linfonodo, fígado, pulmão, coração e medula) desses cães. Mais uma vez os resultados foram negativos, confirmando a não infecção de cães com oocistos esporulados de

57

6 CONCLUSÃO

Oocistos esporulados e viáveis de N. caninum não causaram infecção com produção de oocistos em cães, entretanto foram capazes de promover a formação de anticorpos quando a dose do inóculo foi de 104 oocistos esporulados.

58

REFERÊNCIAS*

ALVES NETO, A. F. Avaliação da viabilidade de oocistos de Neospora caninum a diferentes condições de temperatura e ação de desinfetantes. 2009. 68 f. Dissertação (Mestrado em Ciências – Epidemiologia Experimental Aplicada às Zoonoses) - Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2009.

ANDERSON, M. L.; BLANCHARD, P. C.; BARR, B. C.; DUBEY, J. P.; HOFFMAN, R. L.; CONRAD, P.A. Neospora-like protozoan infection as a major cause of abortion in California dairy cattle. Journal American Veterinary Medical Association, v.198, p. 241-244, 1991.

AUSUBEL, F. M.; BRENT, R.; KINGSTON, R. E.; MOORE, D. D.; SEIDMAN, J. G.; STRUHL, K. Current Protocols in Molecular Biology. New York: John Wiley & Sons, Inc., 1990. v. 2, p. A.1.5.

AUSUBEL, F. M.; BRENT, R.; KINGSTON, R. E.; MOORE, D. D.; SEIDMAN, J. G.; SMITH, J. A.; STRUHL, K. (Ed.). Short protocols in molecular biology. 4th ed. New York: Wiley, 1999. sections 2.3 – 2.7.

BARBER, J. S.; TREES, A. J. Naturally occurring vertical transmission of Neospora

caninum in dogs. International Journal for Parasitology, v. 28, p. 57-64, 1998.

BARR, B. C.; ANDERSON, M. L.; WOODS, L. W.; DUBEY, J. P.; CONRAD, P. A.

Neospora-like protozoal infections associated with abortion in goats. Journal of Veterinary

Diagnostic Investigation, v. 4, p. 365–367, 1992.

BARR, B. C.; CONRAD, P. A.; BREITMEYER, R.; SVERLOW, K.; ANDERSON, M. L.; REYNOLDS, T.; CHAUVET, A. E.; DUBEY, J. P.; ARDANS A. A. Congenital Neospora infection in calves born from cows that had previously aborted Neospora-infected fetuses: four cases (1990-1992). Journal American Veterinary Medical Association, v. 202, n. 1, p. 113-117, 1993.

___________________________________________________________________________ * De acordo com:

ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DE NORMAS TÉCNICAS. NBR 6023: informação e documentação: referências: elaboração. Rio de Janeiro, 2002.

59

BASSO, W.; VENTURINI, L.; VENTURINI, M. C.; HILL, D. E.; KWOK, O. C. H.; SHEN, S. K.; DUBEY, J. P. First isolation of Neospora caninum from the feces of a naturally infected dog. Journal of Parasitology, v. 87, p. 612–618, 2001.

BASSO, W.; HERRMANN, D. C.; CONRATHS, F. J.; PANTCHEV, N.; VRHOVEC, M. G. First isolation of Neospora caninum from the faeces of a dog from Portugal. Veterinary Parasitology, v. 159, n. 2, p. 162-166, 2009.

BJERKÅS, I.; MOHN, S. F.; PRESTHUS, J. Unidentified cyst-forming sporozoon causing encephalomyelitis and myositis in dogs. Zeitschrift für Parasitenkunde, v. 70, p. 271-274, 1984.

BJÖRKMAN, C.; JOHANSSON, O.; STENLUND, S.; HOLMDAHL, O. J.; UGGLA, A.

Neospora species infection in a herd of dairy cattle. Journal American Veterinary Medical

Association, v. 208, p. 1441-1444, 1996.

BJÖRKMAN, C.; UGGLA, A. Serological diagnosis of Neospora caninum infection. International Journal for Parasitology, v. 29, p. 1497-1507, 1999.

BUXTON, D.; MALEY, S. W.; PASTORET, P. P.; BROCHIER, B.; INNES, E. A. Examination of red fox (Vulpes vulpes) from Belgium for antibody to Neospora caninum and

Toxoplasma gondii. The Veterinary Record, v. 141, p. 308-309, 1997.

BUXTON, D.; McALLISTER, M. M.; DUBEY, J. P. The comparative pathogenesis of neosporosis. Trends in Parasitology, v. 18, p. 546-552, 2002.

CAÑON - FRANCO, W. A.; BERGAMASCHI, D. P.; LABRUNA, M. B.; CAMARGO, L. M. A.; SOUZA, S. L. P.; SILVA, J. C. R.; PINTER, A.; DUBEY, J. P.; GENNARI, S. M. Prevalence of antibodies to Neospora caninum in dogs from Amazon, Brazil. Veterinary Parasitology, v. 115, p. 71-74, 2003.

CAÑON - FRANCO, W. A.; YAI, L. E. O.; SOUZA, S. L. P.; SANTOS, L. C.; FARIAS, N. A. R.; RUAS, J.; ROSSI, F. W.; GOMES, A. A. B.; DUBEY, J. P.; GENNARI, S. M. Detection of antibodies to Neospora caninum in two species of wild canids, Lycalopex

gymnocercus and Cerdocyon thous from Brazil. Veterinary Parasitology, v. 123, p. 275-

277, 2004.

CARDOSO, J. M. S.; NISHI, S. M.; VIERO, L. M.; GENNARI, S. M. Detecção de Neospora

caninum em fetos bovinos pela PCR em tempo real. CONGRESSO BRASILEIRO DE

60

CAVALCANTE, G. T.; MONTEIRO, R. M.; SOARES, R. M.; NISHI, S. M.; ALVES NETO, A. F.; GENNARI, S. M. Shedding of oocysts by dogs fed different tissues from naturally Neospora caninum infected bovines. In: ANNUAL MEETING OF THE AMERICAN SOCIETY OF PARASITOLOGISTS, 83. Arlington, Texas. Abstracts… Texas: AAP, 2008. p. 80.

CHEADLE, M. A.; LINDSAY, D. S.; BLAGBURN, B. L. Prevalence of antibodies to

Neospora caninum in dogs. Veterinary Parasitology, v. 85, p. 325-330, 1999.

COLE, R. A.; LINDSAY, D. S.; BLAGBURN, B. L.; SORJONEN, D. C.; DUBEY, J. P. Vertical transmission of Neospora caninum in dogs. The Journal of Parasitology, v. 81, p. 208-211, 1995.

CORBELLINI, L. G.; DRIEMEIER, D.; CRUZ, C.; DIAS, M. M. Aborto bovino por

Neospora caninum no Rio Grande do Sul. Ciência Rural, Santa Maria, v.30, p. 863-868,

2000.

CORBELLINI, L. G.; COLODEL, E. M.; DRIEMEIER, D. Granulomatous encephalitis in a neurologically impaired goat kid associated with degeneration of Neospora caninum tissue cysts. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, v. 13, p. 416-419, 2001.

CORBELLINI, L. G.; PESCADOR, C. A.; FRANTZ, F.; WUNDER, E.; STEFFEN, D.; SMITH, D. R.; DRIEMEIER, D. Diagnostic survey of bovine abortion with special reference to Neospora caninum infection: Importance, repeated abortion and concurrent infection in aborted fetuses in Southern Brazil. The Veterinary Journal, v. 172, n. 1, p. 114-120, 2006.

COSTA, K. S.; SANTOS, S. L.; UZÊDA, R. S.; PINHEIRO, A. M.; ALMEIDA, M. A. O.; ARAÚJO, F. R.; MCALLISTER, M. M.; GONDIM, L. F. P. Chickens (Gallus domesticus) are natural intermediate hosts of Neospora caninum. International Journal for Parasitology, v. 38, p. 157-159, 2008.

CUDDON, P.; LIN, D. S.; BOWMAN, D. D.; LINDSAY, D. S.; MILLER, T. K.; DUNCAN, I. D.; DE LAHUNTA, A.; CUMMINGS, J.; SUTER, M.; COOPER, B.; KING, J. M.; DUBEY, J. P. Neospora caninum infection in English Springer Spaniel littermates: diagnostic evaluation and organism isolation. Journal of Veterinary Internal Medicine, v. 6, p. 325– 332, 1992.

CUNHA FILHO, N. A.; LUCAS, A. S.; PAPPEN, F. G.; RAGOZO, A. M. A.; GENNARI, S. M.; LUCIA JUNIOR, T.; FARIAS, N. A. R. Fatores de risco e prevalência de anticorpos anti-

61

Neospora caninum em cães urbanos e rurais do Rio Grande do Sul, Brasil. Revista Brasileira

de Parasitologia Veterinária, v. 17, p. 301-306, 2008.

DE MAREZ; LIDDELL, S.; DUBEY, J. P.; JENKINS, M. C.; GASBARRE, L. Oral infection of calves with Neospora caninum oocysts from dogs: humoral and cellular immune responses. International Journal for Parasitology, v. 29, p. 1647-1657, 1999.

DIJKSTRA, T.; EYSKER, M.; SCHARES, G.; CONRATHS, F. J.; WOUDA, W.; BARKEMA, H. W. Dogs shed Neospora caninum oocysts after ingestion of naturally infected bovine placenta but not after ingestion of colostrums spiked with Neospora caninum tachyzoites. International Journal for Parasitology, v. 31, p. 747-752, 2001.

DIJKSTRA, T.; BARKEMA, H. W., EYSKER, M.; HESSELINK, J. W.; WOUDA, W. Natural transmission routes of Neospora caninum between farm dogs and cattle. Veterinary Parasitology, v. 105, p. 99-104, 2002.

DUBEY, J. P.; CARPENTER, J. L.; SPEER, C. A.; TOPPER, M. J.; UGGLA, A. Newly recognized fatal protozoan disease of dogs. Journal American Veterinary Medical Association, v. 192, p. 1269–1285, 1988a.

DUBEY, J. P.; HATTEL, A. L.; LINDSAY, D. S.; TOPPER, M. J. Neonatal Neospora

caninum infection in dogs: isolation of the causative agent and experimental transmission.

Journal American Veterinary Medical Association, v. 193, p. 1259-1263, 1988b.

DUBEY, J. P.; LINDSAY, D. S. Transplacental Neospora caninum infection in dogs. American Journal of Veterinary Research, v. 50, p. 1578-1579, 1989.

DUBEY, J.P.; HARTLEY, W.J.; LINDSAY, D.S.; TOPPER, M.J. Fatal congenital Neospora

caninum infection in a lamb. Journal of Parasitology, v. 76, p. 127–130, 1990.

DUBEY, J. P.; LINDSAY, D. S. Neosporosis. Parasitology Today, v. 9, p. 452-458, 1993.

DUBEY, J. P.; LINDSAY, D. S. A review of Neospora caninum and neosporosis. Veterinary Parasitology, v. 67, p. 1–59, 1996.

DUBEY, J. P.; RIGOULET, J.; GEORGE, C.; LAGOURETTE, P.; LONGEART, L.; LENET, J. L. Fatal transplacental neosporosis in a deer (Cervus eldi siamensis). Journal of Parasitology, v. 82, p. 338-339, 1996.

62

DUBEY, J. P.; DOROUGH, K. R.; JENKINS, M. C.; LIDDELL, C. A.; SPEER, C. A.; KWOK, O. C.; SHEN, S. K. Canine neosporosis: clinical signs, diagnosis, treatment and isolation of Neospora caninum in mice and cell culture. International Journal for Parasitology, v. 28, p. 1293-1304, 1998.

DUBEY, J. P.; ROMAND, S.; THULLIEZ, P.; KWOK, O. C.; SHEN, S. K.; GAMBLE, H. R. Prevalence of antibodies to Neospora caninum in horses in North America. Journal of Parasitology, v. 85, p. 968-969, 1999.

DUBEY, J. P.; LINDSAY, D. S. Gerbils (Meriones unguiculatus) are highly susceptible to oral infection with Neospora caninum oocysts. Parasitology Research, v. 86, p. 165-168, 2000.

DUBEY, J. P. Oocysts shedding by cats fed isolated bradyzoites and comparison of infectivity of bradyzoites of the VEG strain Toxoplasma gondii to cats and mice. Journal of Parasitology, v. 87, p. 215-219, 2001.

DUBEY, J. P.; BARR, B. C.; BARTAC, J. R.; BJERKÅS, I.; BJÖRKMAN, C.; BLAGBURN, B. L.; BOWMAN, D. D.; BUXTON, D.; ELLIS, J. T.; GOTTSTEIN, B.; HEMPHILL, A.; HILL, D. E.; HOWE, D. K.; JENKINS, M. C.; KOBAYASHI, Y.; KOUDELAM, B.; MARSHO, A. E.; MATTSSON, J. G.; McALLISTER, M. M.; MODRÝ, D.; OMATA, Y.; SIBLEY, L. D.; SPEER, C. A.; TREES, A. J.; UGGLA, A.; UPTON, S. J.; WILLIAMS, D. J. L.; LINDSAY, D. S. Redescription of Neospora caninum and its differentiation from related coccidian. International Journal for Parasitology, v. 32, p. 929–946, 2002.

DUBEY, J. P. Neosporosis in cattle. Journal of Parasitology, v. 89, p. 42–56, 2003.

DUBEY, J. P. Comparative infectivity of oocysts and bradyzoites of Toxoplasma gondii for intermediate (mice) and definitive (cats) hosts. Veterinary Parasitology, v. 140, p. 69-75, 2006.

DUBEY, J. P.; SCHARES, G.; ORTEGA-MORA, L. M. Epidemiology and control of neosporosis and Neospora caninum. Clinical Microbiology Review, v. 20, p. 323-367, 2007.

FERNANDES, B. C. T. M.; GENNARI, S. M.; SOUZA, S. L. P.; CARVALHO, J. M.; OLIVEIRA, W. G.; CURY, M. C. Prevalence of anti-Neospora caninum antibodies in dogs from urban, periurban and rural areas of the city of Uberlândia, Minas Gerais, Brazil. Veterinary Parasitology, v. 123, p. 33-40, 2004.

63

FRENKEL, J. K.; SMITH, D. D. Determination of the genera of cysts-forming coccidia. Parasitology Research, v. 91, p. 384-389, 2003.

FUJII, T. U.; KASAI, N.; NISHI, S. M.; DUBEY, J. P.; GENNARI, S. M. Seroprevalence of

Neospora caninum in female water buffaloes (Bubalus bubalis) from the southeastern region

of Brazil. Veterinary Parasitology, v. 99, p. 331-334, 2001.

GENNARI, S. M.; YAI, L. E. O.; D’AURIA, S. N. R.; CARDOSO, S. M. S.; KWOK, O. C. H.; JENKINS, M. C.; DUBEY, J. P. Occurrence of Neospora caninum antibodies in sera from dogs of the city São Paulo, Brazil. Veterinary Parasitology, v. 106, p. 177-179, 2002.

GONDIM, L. F. P.; SAEKI, H.; ONAGA, H.; HARITANI, M.; YAMANE, I. Maintenance of

Neospora caninum tachyzoites using Mongolian gerbils (Meriones unguiculatus). New

Zealand Veterinary Journal, v. 47, p. 36, 1999.

GONDIM, L. F. P.; PINHEIRO, A. M.; SANTOS, P. O. M.; JESUS, E. E. V.; RIBEIRO, M. B.; FERNANDES, H. S.; ALMEIDA, M. A. O.; FREIRE, S. M.; MEYER, R.; McALLISTER, M. M. Isolation of Neospora caninum from the brain of a naturally infected dog, and production of encysted bradyzoites in gerbils. Veterinary Parasitology, v. 101, p. 1–7, 2001.

GONDIM, L. F. P.; GAO, L.; McALLISTER, M. M. Improved production of Neospora

caninum oocysts, cyclical oral transmission between dogs and cattle, and in vitro isolation

from oocysts. Journal of Parasitology, v. 88, p. 1159–1163, 2002.

GONDIM, L. F. P.; McALLISTER, M. M.; PITT, W.C.; ZEMLICKA, D.E. Coyotes (Canis

latrans) are definitive hosts of Neospora caninum. International Journal for Parasitology,

v. 34, p. 159–161, 2004.

GONDIM, L. F. P.; McALLISTER, M. M.; GAO, L. Effects of host maturity and prior exposure history on the production of Neospora caninum oocysts by dogs. Veterinary Parasitology, v. 134, p. 33–39, 2005.

GUIMARÃES JUNIOR, J. S.; SOUZA, S. L. P.; BERGAMASCHI, D. P.; GENNARI, S. M. Prevalence of Neospora caninum antibodies and factors associated with their presence in dairy cattle of the north of Paraná state, Brazil. Veterinary Parasitology, v. 124, p. 1-8, 2004.

64

HILALI, M.; ROMAND, S.; THULLIEZ, P.; KWOK, O. C.; DUBEY, J. P. Prevalence of

Neospora caninum and Toxoplasma gondii antibodies in sera from camels from Egypt.

Veterinary Parasitology, v. 28, p. 269-271, 1998.

HILL, D. E.; LIDDELL, S.; JENKINS, M. C.; DUBEY, J. P. Specific detection of Neospora

caninum oocysts in fecal samples from experimentally-infected dogs using the polymerase

chain reaction. Journal of Parasitology, v. 87, p. 395-398, 2001.

KANG, S. W.; PARK, S. S.; CHOE, S. E.; JEAN, Y. H.; JUNG, S. C.; KIM, K.; QUYEN, D. V. Characterization of tissue distribution and histopathological lesions in Neospora caninum experimentally infected gerbils. Parasitology Research, v. 104, p. 1261-1268, 2009.

KOBAYASHI, Y.; YAMADA, M.; OMATA, Y.; KOYAMA, T.; SAITO, A.; MATSUDA, T.; OKUYAMA, K.; FUJIMOTO, S.; FURUOKA, H.; MATSUI, T. Naturally occurring

Neospora caninum infection in an adult sheep and her twin fetuses. Journal Parasitology, v.

87, p. 434–436, 2001.

KOYAMA, T.; KOBAYASHI, Y.; OMATA, Y.; YAMADA, M.; FURUOKA, H.; MAEDA, R.; MATSUI, T.; SAITO, A.; MIKAMI, T. Isolation of Neospora caninum from the brain of pregnant sheep. Journal Parasitology, v. 87, p. 1486-1488, 2001.

LABARCA, C.; PAIGEN, K. A simple, rapid, and sensitive DNA assay procedure. Analytical Biochemistry, v. 102, p. 344-352, 1980.

LINDSAY, D. S.; DUBEY, J. P. Immunohistochemical diagnosis of Neospora caninum in tissue sections. American Journal of Veterinary Research, v. 50, p. 1981-1983, 1989.

LINDSAY, D. S.; DUBEY, J. P.; DUNCAN, R. B. Confirmation that the dog is a definitive host for Neospora caninum. Veterinary Parasitology, v. 82, p. 327–333, 1999.

LOBATO, J.; SILVA, D. A. O.; MINEO, T. W. P.; AMARAL, J. D. H. F; SEGUNDO, G. S.; COSTA-CRUZ, J. M.; FERREIRA, M. S.; BORGES, A. S.; MINEO, J. R. Detection of immunoglobulin G antibodies to Neospora caninum in humans: high seropositivity rates in patients who are infected by human immunodeficiency virus or have neurological disorders. Clinical and Vaccine Immunology, v.13, p. 84–89, 2006.

McALLISTER, M. M.; DUBEY, J. P.; LINDSAY, D. S.; JOLLEY, W. R.; WILLS, R. A.; McGUIRE, A. M. Dogs are definitive hosts of Neospora caninum. International Journal for Parasitology, v. 28, p. 1473–1479, 1998.

65

McCANN, C. M.; VYSE, A. J.; SALMON, R. L.; THOMAS, D.; WILLIAMS, D. J. L.; McGARRY, J. W.; PEBODY, R.; TREES, A. J. Lack of serologic evidence of Neospora

caninum in humans, England. Emerging Infectious Diseases, v. 14, p. 978-980, 2008.

McGARRY, J. W.; STOCKTON, C. M.; WILLIAMS, D. J. L.; TREES, A. J. Protracted shedding of oocysts of Neospora caninum by a naturally infected foxhound. Journal of Parasitology, v. 89, p. 628-630, 2003.

McINNES, L. M.; IRWIN, P.; PALMER, D. G.; RYAN, U. M. In vitro isolation and characterization of the first canine Neospora caninum isolate in Australia. Veterinary Parasitology, v. 137, p. 355-363, 2006.

MINEO, T. W.; SILVA, D. A.; COSTA, G. H.; von ANCKEN, A. C.; KASPER, L. H.; SOUZA, M. A.; CABRAL, D. D.; COSTA, A. J.; MINEO, J. R. Detection of IgG antibodies

Belgede Yenilenebilir enerji kaynakları açısından Türkiye'nin geleceği ve Avrupa Birliği ile karsılastırılması (sayfa 192-195)