Gerilim dengesi (olmak/yapmak, ben/diğerleri)

Alors qu’un rôle essentiel de la caspase-8 avait été montré dans l’apoptose induite par l’engagement de Fas (Juo et al., 1998), nos travaux démontrent que dans des cellules déficientes en caspase-8, la caspase-10 active la voie mitochondriale via le clivage de Bid et active la cascade des caspases conduisant à l’apoptose (Milhas et al., 2005) (Figure 33, 1). Il est à noter que notre étude a été réalisée avec du FasL, contrairement aux travaux du groupe de Blenis reposant sur l’utilisation d’un anticorps anti-Fas agoniste. Ces résultats contradictoires pourraient s’expliquer par le fait que les voies pro-apoptotiques activées par un anti-Fas agoniste et par FasL ne soient pas strictement identiques (Legembre et al., 2003).

Plusieurs études suggèrent l’existence de voies de signalisation cytotoxique indépendantes des caspases, c'est-à-dire non inhibable par le z-VAD, dans les lymphocytes T en réponse à la stimulation de Fas (Davidson et al., 2002; Holler et al., 2000; Matsumura et al., 2000; Vonarbourg et al., 2002). Nos résultats confirment l’induction d’une mort en réponse à de fortes concentrations de FasL, dans les cellules Jurkat et dans les PBL incubés en présence de z-VAD. Cette signalisation semble impliquer la kinase RIP et des évènements mitochondriaux comme le relargage d’AIF, qui restent à confirmer. Cependant, malgré la classification des types de morts non apoptotiques, il semble que la définition du type de mort caspase-indépendante et dépendante de RIP ne soit pas encore clairement établie (Jaattela and Tschopp, 2003; Kroemer and Martin, 2005; Leist and Jaattela, 2001). En effet, nos résultats mettent en évidence une mort de type apoptose-like caractérisée par une forte condensation nucléaire et cellulaire et une externalisation des PS (Milhas et al., 2005). D’autres travaux décrivent une mort de type nécrose-like caractérisée par une altération de la perméabilité membranaire détectée par un marquage à l’iodure de propidium et un gonflement des organites intracellulaires et du cytoplasme des cellules, observé par microscopie électronique (Holler et al., 2000; Matsumura et al., 2000). Une autre étude indique une mort de type autophagique caractérisée par la présence de vacuoles autophagiques dans le cytoplasme des

cellules (Yu et al., 2004). Enfin, cette mort a aussi été qualifiée de nécroptose ayant à la fois des caractéristiques de nécrose et de mort autophagique (Degterev et al., 2005).

Les cellules Jurkat déficitaires en caspase-8 et -10 sont complètement résistantes à FasL, suggérant que ces caspases initiatrices sont indispensables pour l’induction de la mort apoptotique et nécrotique (Figure 33, 1 et 2). De plus, notre étude suggère qu’une partie de la signalisation activée par les caspases-8 et -10 est indépendante de leur activité catalytique. En accord avec cette hypothèse, la surexpression de la caspase-8 ou -10 sauvage en présence de z-VAD ou de la caspase-8 ou -10 catalytiquement inactive est toxique et restaure la sensibilité des cellules I9-2e à la mort par FasL. Ces résultats remettent en cause l’existence d’une mort « caspase-indépendante » dans la signalisation de Fas et indiquent un rôle des caspases-8 et -10 dans l’induction d’une mort « nécrotique » indépendamment de leur activité catalytique. Il est à noter que les cathepsines peuvent également sensibiliser des cellules cancéreuses à la mort induite par des agents antitumoraux, indépendamment de leur activité catalytique (Beaujouin et al., 2006).

Comme montré pour l’activation de NF-κB en réponse à la stimulation de Fas, les caspases-8 et -10, par l’intermédiaire de leur domaine DED, pourraient s’associer à RIP et à FADD pour former un complexe qui permettrait l’activation de RIP (Figure 33, 2). Il semblerait donc que les mêmes protéines participent à l’induction de trois types de signalisation distinctes : voie de survie NF-κB-dépendante, voie apoptotique caspase dépendante et voie nécrotique indépendante de l’activité catalytique des caspases. Des inter- relations entre ces voies semblent exister pour permettre leur activation respective. La synthèse protéique étant indispensable dans les voies de prolifération et de survie, son inhibition pourrait favoriser l’activation des voies apoptotiques ou nécrotiques. Ainsi, l’induction d’une mort dans des cellules Jurkat par le TNFα, TRAIL ou FasL est potentialisée en présence de cycloheximide, un inhibiteur de la synthèse protéique (Holler et al., 2000). De plus, il semble que la voie apoptotique inhibe les deux autres voies grâce à l’activité des caspases. En réponse au TNFα ou à un agoniste de Fas, la caspase-8 clive RIP permettant de séparer le domaine kinase (en N-terminal) du reste de la protéine comprenant le domaine intermédiaire et le domaine de mort (en C-terminal). Le fragment C-terminal de

caspases sensibilise des fibroblastes L929 à la mort nécrotique induite par le TNFα (Vercammen et al., 1998a). De plus, une étude récente montre l’induction d’une mort autophagique RIP dépendante des cellules L929 incubées en présence de z-VAD ou de siRNA dirigés contre la caspase-8 (Yu et al., 2004). En outre, comme l’activité kinase de RIP n’est pas indispensable à l’activation de NF-κB (Ting et al., 1996), l’augmentation de son activité pourrait induire préférentiellement la voie nécrotique plutôt que la voie de survie. De plus, il semblerait que la compartimentation subcellulaire du récepteur Fas conditionne l’activation des voies de mort ou de survie. Des travaux récents indiquent que l’internalisation du récepteur est nécessaire à la formation du DISC et à la signalisation apoptotique du récepteur Fas, tandis qu’une absence d’internalisation de Fas dans les lysosomes conduirait à l’induction de voie de survie (Lee et al., 2006a). Enfin, dans un contexte infectieux, la voie nécrotique pourrait être favorisée. Par exemple, lors de l’infection de cellules endothéliales par Chlamydia pneumoniae, la mort apoptotique induite par les LDL oxydées est inhibée tandis que la nécrose est potentialisée, notamment par la production de ROS. L’agent infectieux pourrait exercer le même effet que le z-VAD en inhibant les caspases (Nazzal et al., 2006). Il est à noter qu’une partie de la signalisation cytotoxique des LDL oxydées implique le système Fas/FasL (Alcouffe et al., 2004).

Finalement, les mutations de la caspase-8 ou de la caspase-10 responsables d’ALPS affectent l’activité catalytique des caspases mais ne sont pas localisées au niveau du site catalytique. Ainsi, comme les caspases mutées sont recrutées au niveau du récepteur Fas, il a été suggéré un effet dominant négatif des caspases mutées qui empêcheraient le recrutement des caspases sauvages (Wang et al., 1999a). En outre, il est possible que ces mutations perturbent la formation du complexe hypothétique entre RIP, FADD et les caspases-8 et -10, responsable de l’activation de la voie de signalisation indépendante de l’activité catalytique des caspases, et participent ainsi au développement des ALPS. De même, chez des patients atteints d’ALPS de type I, qui possèdent des mutations au niveau du récepteur Fas responsables de la résistance des lymphocytes à la mort induite par l’engagement de Fas, l’activation de NF-κB pourrait favoriser la survie et la prolifération (Legembre et al., 2004). Il est envisageable que ces mutations, en affectant à la fois l’induction de la voie apoptotique et nécrotique, favorisent l’activation des voies de survie.

II- L’inhibition de l’activité de la SMS pourrait participer à la génération de céramide dans la