Esnek Karşılık ve İleri Savunma Stratejisi

Diversos métodos podem ser empregados para se mensurar a angiogênese nos tecidos. Estudos in vivo relatam a utilização de métodos não invasivos como a ressonância magnética com contraste aumentado, a tomografia computadorizada com emissão de pósitrons e a tomografia computadorizada com emissão de fóton único (PERINI et al., 2008). Em pesquisas ex vivo, como nos estudos realizados com materiais biológicos provenientes de biópsias, a atividade angiogênica de um tecido pode ser mensurada pela determinação de um índice angiogênico obtido por meio da contagem dos microvasos presentes no espécime (EL- GAZZAR; MACLUSKEY; OGDEN, 2005; FREITAS et al., 2005). Neste caso, as técnicas existentes se baseiam na avaliação microscópica dos tecidos com o auxílio de anticorpos capazes de reconhecer epítopos expressos por células endoteliais como o FvW, o CD31, o CD34 e o CD105 (VERMEULEN et al., 2002; SOUZA; FREITAS; MIRANDA, 2007).

Em relação às técnicas de mensuração da angiogênese empregadas na avaliação dos tecidos submetidos ao processamento imunoistoquímico, a análise dos trabalhos existentes na literatura revela que as mais frequentemente utilizadas são a da densidade microvascular (MVD), do volume microvascular (MVV) e da contagem microvascular (MVC) (HANNEN; RIEDIGER, 2004; EL-GAZZAR; MACLUSKEY; OGDEN, 2005; FREITAS et al., 2005; SOUZA; FREITAS; MIRANDA, 2007; DAVEY et al., 2008).

A técnica da MVD foi descrita por Weidner et al. (1991) em um estudo com carcinoma de mama. Sob microscopia de luz, com aumentos de 40x e 100x, são identificadas cinco áreas de maior vascularização no espécime. Em sequência, sob aumento de 200x, são quantificados os microvasos presentes em cada uma dessas áreas. O resultado, designado de MVD alta, consiste no maior número de microvasos em uma dessas áreas. Dessa forma não é estabelecido um valor médio, sendo o resultado apresentado sob a forma de microvasos/mm2.

Além de estabelecerem a técnica da MVD, Weidner et al., (1991) explicitaram parâmetros para nortear o processo de quantificação dos microvasos. De acordo com os

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autores, deveriam ser considerados como um único microvaso as células endoteliais isoladas ou grupos de células endoteliais claramente separadas de microvasos adjacentes ou de outros tipos celulares do tecido conjuntivo. Além disso, grupos de células endoteliais isoladas que poderiam constituir secções distintas de um mesmo microvaso deveriam ser consideradas como microvasos distintos. Lúmens vasculares, embora geralmente identificáveis, não seriam necessários para definir uma estrutura como um microvaso.

Posteriormente, com base na metodologia descrita por Weidner et al., (1991), foi proposta uma avaliação da MVD alta, designada de MVD média (SCHOR et al., 1998a; SCHOR et al., 1998b). Nesta técnica, sob aumento de 200x, são quantificados os microvasos em 10 – 15 campos microscópicos aleatórios. Com os valores obtidos em cada um destes campos é estabelecido o número médio de microvasos do espécime. Na análise MVD média, os resultados são apresentados sob forma de média de microvasos ± desvio padrão.

O MVV consiste em uma técnica estereológica para a determinação do volume dos microvasos. Neste processo, sob microscopia de luz (aumento de 200x), com o auxílio de uma ocular contendo um retículo com 100 pontos marcados, são avaliados 15 campos microscópicos aleatórios, perfazendo um total de 1.500 pontos. Em cada um destes campos são quantificados os vasos que coincidem com os pontos do retículo. Ao final, o resultado é expresso em porcentagem de volume (PAZOUKI et al., 1997; SCHOR et al., 1998a).

A técnica da MVC foi descrita por Maeda et al., (1995) em um estudo com carcinomas gástricos. Sob microscopia de luz, com aumento de 40x, são identificadas cinco áreas de maior vascularização no espécime. Em sequência, sob aumento de 200x, são quantificados os microvasos presentes em cada uma dessas áreas. Nesta análise, o resultado obtido é apresentado como um número médio de microvasos em cada secção histológica. Além de constituir uma técnica de fácil execução (FREITAS et al., 2005), a MVC se destaca por apresentar relevância prognóstica em diversos tumores (NANASHIMA et al., 2008; NANASHIMA et al., 2009).

A MVD em tumores tem sido avaliada pela imunomarcação dos tecidos por anticorpos pan-endoteliais contra antígenos como o CD34, CD31 e fator de Willebrand. Entretanto, sabendo-se que as células endoteliais são altamente heterogêneas, surge um questionamento sobre se um marcador pan-endotelial é um reagente ideal para avaliar a MVD de um tumor. Tomando isso como base, muitos autores relatam que os anticorpos anti-CD105, ao contrário dos marcadores pan-endoteliais, ligam-se preferencialmente às células endoteliais ativadas in

vitro e em tecidos participando da angiogênese (WANG et al., 1993; WESTPHAL et al.,

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tipos histológicos de tumores humanos, o CD105 foi que esteve mais fortemente expresso nas células endoteliais dos vasos sanguíneos tumorais, todavia foi indetectável ou esteve fracamente presente em vasos sanguíneos de tecidos normais (WANG et al., 1993; WANG et al., 1995; DERBYSHIRE; THORPE, 1997). Por outro lado, evidências sugerem que a expressão do CD105 pode refletir a atividade metabólica dos tecidos, não estando necessariamente relacionado à formação de novos vasos sanguíneos (DAVEY et al., 2008).

O grau de vascularização (medido quantitativamente pela MDV) tem potencial para ser usado como fator de prognóstico (FIDLER; ELLIS, 1994; FOX; GATTER; HARRIS, 1996). A extensa neovascularização em carcinomas de mama invasivos é um fator preditor de metástase independente tanto para linfonodos axilares quanto para sítios distantes ou ambos (WEIDNER, 1993; GASPARINI; POZZA; HARRIS, 1996; FOX; GATTER; HARRIS, 1996). Subsequentemente, muitos pesquisadores têm demonstrado que a alta microdensidade vascular (MDV) é um fator de prognóstico independente em muitos outros tipos histológicos de tumores humanos, enquanto outros autores têm falhado em encontrar tal relação (KUMAR et al., 1999).

2.3.3 O Processo Angiogênico nas Lesões Crônicas Inflamatórias (Líquen Plano Oral e