H.influenzae izolatlarının ß-laktamaz aktivitelerinin araĢtırılması için kullanılan ayırt edici bir agar plak metodudur. Penisilin ve fenol kırmızısı besleyici özelliği olmayan bir agar plakta birleĢtirilir. ß-laktam halkasının penisilinden ayrılması sonucu oluĢan penisiloik asit ile ortamın asiditesi artar. Bu değiĢiklik pH
indikatörünce saptanır ve agarda renk değiĢimi gözlenir (4).
Testin yapılıĢı:
1 ß-laktamaz agar plağının farklı noktalarına H.influenzae kolonileri konur. Bir plakta aynı anda çok sayıda koloni test edilebilir. Kolonilerin doğru bir Ģekilde iĢaretlenmiĢ olmasına özen gösterilir.
2 ß-laktamaz pozitif ve ß-laktamaz negatif olduğu bilinen kontrol suĢları da teste alınır.
3 Agar plaklar, 35°C‟de 15 dakika inkübe edilir.
4 Agar plakları, koloniler etrafında renk değiĢimi olup olmaması açısından değerlendirilir.
5 Pozitif kontrol suĢuna ait kolonilerin etrafındaki agar sarı renkte iken negatif kontrol suĢu kolonilerini çevreleyen agarda herhangi bir renk değiĢimi
gözlenmez.
Ulusal Mikrobiyoloji Standartları Sayfa 25 / 26 Bakteriyoloji / Mikrobiyolojik Tanımlama / B-MT-04 / Sürüm: 1.1 / 01.01.2015
İlgili diğer UMS belgeleri
Bu prosedür belgesi (Haemophilus influenza Ġnvaziv Enfeksiyonlarının
Mikrobiyolojik Tanısı) aĢağıda verilen UMS belgeleriyle de ilgilidir ve ilave bilgi için bu belgelere de bakılması önerilir:
UMS, B-TP-01 SuĢ saklama prosedürü UMS, B-TP-03 Gram boyama
UMS, B-TP-14 Loefflerin metilen mavisi UMS, B-TP-16 Oksidaz testi
UMS, B-TP-23 X, V ve XV faktör gereksinimi (satellit fenomeni için) UMS, AMD-TP-01 AMD testleri için besiyerlerinin hazırlanması
UMS, AMD-TP-04 MIK saptama yöntemleri
UMS, B-MT-03 Neisseria meningitidis enfeksiyonlarının mikrobiyolojik tanısı (üreme destekleyici eklenmiĢ T-I besiyerinin hazırlanması için) UMS, B-MT-05 Streptococcus pneumoniae invaziv enfeksiyonlarının
mikrobiyolojik tanısı
UMS, GEN-ÖY-01 Enfeksiyöz maddelerin taĢınması rehberi
Kaynaklar
1 Kilian M. Haemophilus. In: Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH, Landry ML, Pfaller MA (ed.).
Manual of Clinical Microbiology, 9th ed. ASM Press, Washington D.C. 2007, p. 636–648.
2 Budak F. Yayılmacı Haemophilus influenzae hastalıklarının mekanizması. Flora. 2013;18(1):4-10.
3 Perilla MJ, Ajello G, Bopp C et al. Manual for the laboratory identification and antimicrobial susceptibility testing of bacterial pathogens of public health importance in the developing world.
Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Neisseria gonorrhoeae, Salmonella serotype Typhi, Shigella, and Vibrio cholera. Centers for Disease Control and Prevention (CDC) and World Health Organization (WHO), 2003.
4 Popovic T, Ajello G, Facklam R. Laboratory manual for the diagnosis of meningitis caused by Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae.
WHO/CDS/CSR/EDC/99.7; 1999
5 Ödek ve ark. Haemophilus influenzae tip b AĢılaması Yapılan Ġki Çocukta Ġnvaziv Haemophilus influenzae Enfeksiyonları. Çocuk Enf Derg 2010; 4: 76-8.
6 BulaĢıcı Hastalıklar Sürveyans ve Kontrol Esasları Yönetmeliğinde DeğiĢiklik Yapılmasına Dair Yönetmelik. Resmi Gazete; 02.04.2011 – 27893.
http://www.resmigazete.gov.tr/eskiler/2011/04/20110402-3.htm (son eriĢim tarihi:
06.01.2014).
7 BulaĢıcı Hastalıkların Ġhbarı ve Bildirim Sistemi, Standart Tanı, Sürveyans ve Laboratuvar Rehberi, Sağlık Bakanlığı, Ankara. 2004.
http://www.shsm.gov.tr/public/documents/legislation/bhkp/asi/bhibs/BulHastBilSistStanSurveL abReh.pdf(son eriĢim tarihi: 18.12.2013)
8 CDC. Laboratory Methods for the Diagnosis of Meningitis Caused by Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae. 2nd edition. CDC and WHO, 2011.
http://www.cdc.gov/meningitis/lab-manual/ (son eriĢim tarihi 25.12.2013).
9 Peltola H. Worldwide Haemophilus influenzae type b disease at the beginning of the 21st century: global analysis of the disease burden 25 years after the use of the polysaccaride vaccine and a decade after the advent of conjugates. Clin Microbiol Rev 2000;13;302-317 10 http://asicalismagrubu.org/d13.asp (son eriĢim tarihi 25.12.2013).
Sayfa 26 / 26 Ulusal Mikrobiyoloji Standartları 01.01.2015 / Sürüm: 1.1 / B-MT-04 / Mikrobiyolojik Tanımlama / Bakteriyoloji
11 http://www.thsk.saglik.gov.tr/duyurular/etkinlikler/579-1-dunya-asi-haftasi.html 12 Haemophilus influenzae diseases including Hib vaccine.
http://www.cdc.gov/hi-disease/about/prevention.html (son eriĢim tarihi 25.12.2013).
13 Ledeboer NA, Doern GV. Haemophilus. In: Versalovic J, Carrol KC, Funke G, Jorgensen JH, Landry ML, Warnock DW (eds). Manual of Clinical Microbiology. 10th ed. ASM Press, Washington D.C. 2011, p. 588-602.
14 CDC. Chapter 5. Collection and transport of clinical specimens. In: Laboratory Methods for the Diagnosis of Meningitis. Second ed., CDC ve WHO, 2011. http://www.cdc.gov/meningitis/lab-manual/chpt05-collect-transport-specimens.html (son eriĢim tarihi 03.03.2014).
15 Klinik Örnekten Sonuç Raporuna Uygulama Rehberleri: Steril Vücut Sıvıları Örnekleri. KLĠMUD, Ankara, 2013.
16 BaĢustaoğlu A. Kan kültürü Uygulama Kılavuzu. Ankara 2013.
17 Ajello GW, Feeley JC, Hayes PS et al. Trans-isolate medium: a new medium for primary culturing and transport of Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae. J Clin Microbiol 1984;20(1):55-8
18 Garcia LS. Calibration of microscope with an ocular micrometer. In: Garcia LS, Isenberg HD (eds). Clinical microbiology procedures handbook. 2nd ed. update, ASM Press, Washington D.C.
2007, p. 9.3.2.1-4
19 York MK. Cerebrospinal fluid cultures. In: Garcia LS (ed. in chief). Clinical Microbiology Procedures Handbook. 2nd ed. update, ASM Press, Washington D.C. 2007; p. 3.7.1 - 3.7.7 20 CDC. Chapter 6. Primary culture and presumptive identification of Neisseria meningitidis,
Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae. In: Laboratory Methods for the Diagnosis of Meningitis. Second ed., CDC and WHO, 2011. http://www.cdc.gov/meningitis/lab-manual/chpt06-culture-id.html (son eriĢim tarihi 06.01.2014)
21 Koneman EW, Allen SD, Janda WM, Schreckenberger PC, Winn WC, Jr. (eds). Introduction to microbiology Part I: guidelines to practice and management: Microscopic examination. In: Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. 4th ed., J.B. Lippincott Company, Philadelphia.
1992, p. 15-26.
22 Tunkel AR, Scheld WM. Acute meningitis. Chapter 80 In: Mandell GL, Bennett JE, Dolin R (eds).
Principles and Practice of Infectious Diseases. 6th ed., Churchill Livingstone. 2005.
23 CDC. Chapter 9: Identification and characterization of Haemophilus influenza. In: Laboratory Methods for the Diagnosis of Meningitis. Second ed., CDC and WHO 2011.
http://www.cdc.gov/meningitis/lab-manual/chpt09-id-characterization-hi.html (son eriĢim tarihi 06.01.2014)
24 Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standards for Antimicrobial Susceptiblity Testing; Twenty-Third Informational Supplement. M100-S23. CLSI 2013.
25 European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. Breakpoint tables for interpretation of MICs and zone diameters. Version 3.1. EUCAST 2013.
http://www.eucast.org/fileadmin/src/media/PDFs/EUCAST_files/Breakpoint_tables/Breakpoint_t able_v_3.1.pdf (son eriĢim tarihi 06.01.14)
26 CDC. Chapter 14: Storage and shipping of Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae. Second ed., CDC and WHO. 2011.
http://www.cdc.gov/meningitis/lab-manual/chpt14-storage-shipping.html (son eriĢim tarihi 06.01.14)
27 Enfeksiyöz madde ile enfeksiyöz tanı ve klinik örneği taĢıma yönetmeliği. Sağlık Bakanlığı, Ankara. Resmi Gazete 25.09.2010 – 27710.