Materyal
Çikolata agara pasajlanmıĢ 24 saatlik taze saf bakteri kültürü Polivalan A, B, C antiserumu
Polivalan X, Y, Z antiserumu Monovalan antiserumlar W135 ve Z antiserumları Temiz lamlar
Steril cam tüpler Steril pipet uçları Steril %0.85 NaCl (SF)
McFarland No 3 bulanıklık standardı
Hazırlık
1 Tüm malzemeler oda ısısına gelmeleri için önceden buzdolabından çıkarılır.
2 Biyogüvenlik kabini en az 5 dk önceden çalıĢtırılır. ÇalıĢılacak tüm malzemeler biyogüvenlik kabinine önceden yerleĢtirilir. Uygun KKD (önlük, eldiven) giyilir.
3 Steril bir cam tüpe 500 µL SF konulur ve taze pasajdan McFarland No 3 yoğunluğunda bakteri süspansiyonları hazırlanır.
4 Lam alkol ile temizlenir ve cam kalemi ile 3 bölmeye ayrılır.
Testin yapılışı
1 Bölmelere 10‟ar µL bakteri süspansiyonu konulur.
2 Ġlk bölmeye herhangi bir antiserum konulmaz.
3 Ġkinci bölmeye polivalan A, B, C antiserumu, üçüncü bölmeye polivalan X, Y, Z antiserumundan 10‟ar µL eklenir.
4 Lam bir dakika süreyle elde sürekli olarak hafif dairesel hareketlerle çevrilir.
Testin değerlendirilmesi
1 Bir dakika sonra aglütinasyon varlığı değerlendirilir.
2 Lamın ilk bölmesinde “otoaglütinasyon” gözlenmemelidir.
3 Aglütinasyon bir antiserumla gerçekleĢmelidir.
4 Polivalan antiserumlardan biriyle aglütinasyon oluĢması durumunda test monovalan antiserumlar ile tekrarlanır.
5 Polivalan antiserumlar ile herhangi bir reaksiyon gözlenmediyse W135 ve Z antiserumları ile iĢlem tekrarlanır.
6 Sonuçlar aĢağıdaki gibi yorumlanır ve kaydedilir:
4+ %100 aglütinasyon (berrak ila hafif bulanık zemin) 3+ %75 aglütinasyon (hafif bulanık zemin)
2+ %50 aglütinasyon (orta derecede bulanık zemin) 1+ %25 aglütinasyon (bulanık zemin)
Aglütinasyon yok
Sayfa 28 / 30 Ulusal Mikrobiyoloji Standartları 01.01.2015 /Sürüm: 1.1 / B-MT-03 / Mikrobiyolojik Tanımlama / Bakteriyoloji
Kalite kontrol
Test edilen izolat ile birlikte daha önceden serogrubu belirlenmiĢ meningokok suĢları da teste alınır ve pozitif kontrol olarak kullanılır. Bu amaçla A, B, C, X, W135, Y, Z ve Z‟
serogrubu N.meningitidis suĢlarından faydalanılır.
Sınırlılıklar
1 Otoaglütinasyon oluĢuyorsa, kültür R tipi ve antijenik değerlendirme için uygun değil demektir.
2 Otoaglütinasyon varlığında ya da kalite kontrol suĢu ile aglütinasyon olmaması halinde test tekrarlanmalıdır.
3 Her iki durumda da yeni pasaj yapılmalı ve aglütinasyon iĢlemi tekrarlanmalıdır.
4 ÇeĢitli antiserumlar ile birden fazla aglütinasyon gözlenmemelidir.
5 Herhangi bir antiserum ile aglütinasyon oluĢmaması suĢun serogruplandırılamayacağı anlamına gelir.
6 Test edilen izolat ve pozitif kontrol suĢu ile +3 değerinde reaksiyon gözlenmelidir.
7 Negatif kontrol aglütinasyon göstermemelidir.
İlgili diğer UMS belgeleri
Bu prosedür belgesi (Neisseria meningitidis Enfeksiyonlarının Mikrobiyolojik Tanısı) aĢağıda verilen UMS belgeleriyle de ilgilidir ve ilave bilgi için bu belgelere de bakılması önerilir:
UMS, B-TP-01 SuĢ saklama prosedürü UMS, B-TP-03 Gram boyama
UMS, B-TP-14 Loeffler‟in metilen mavisi UMS, B-TP-10 Katalaz testi
UMS, B-TP-16 Oksidaz testi
UMS, B-TP-23 X, V ve XV faktör gereksinimi (satellit fenomeni için) UMS, B-MT-04 Haemophilus influenzae invaziv enfeksiyonunun
mikrobiyolojik tanısı
UMS, B-MT-05 Streptococcus pneumoniae invaziv enfeksiyonunun mikrobiyolojik tanısı
UMS, AMD-TP-01 AMD testleri için besiyerlerinin hazırlanması UMS, AMD-TP-04 MIK saptama yöntemleri
UMS, GEN-ÖY-01 Enfeksiyöz maddelerin taĢınması rehberi
Ulusal Mikrobiyoloji Standartları Sayfa 29 / 30 Bakteriyoloji / Mikrobiyolojik Tanımlama / B-MT-03 / Sürüm: 1.1 / 01.01.2015
Kaynaklar
1 Perilla MJ, Ajello G, Bopp C et al. Manual for the laboratory identification and antimicrobial susceptibility testing of bacterial pathogens of public health importance in the developing world.
Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Neisseria gonorrhoeae, Salmonella serotype Typhi, Shigella, and Vibrio cholera. Centers for Disease Control and Prevention (CDC) and World Health Organization (WHO), 2003.
2 Popovic T, Ajello G, Facklam R. Laboratory manual for the diagnosis of meningitis caused by Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae.
WHO/CDS/CSR/EDC/99.7, 1999.
3 BulaĢıcı Hastalıklar Sürveyans ve Kontrol Esasları Yönetmeliğinde DeğiĢiklik Yapılmasına Dair Yönetmelik. Resmi Gazete; 02.04.2011 – 27893.
http://www.resmigazete.gov.tr/eskiler/2011/04/20110402-3.htm (son eriĢim tarihi:
06.01.2014).
4 BulaĢıcı Hastalıkların Ġhbarı ve Bildirim Sistemi, Standart Tanı, Sürveyans ve Laboratuvar Rehberi, Sağlık Bakanlığı Ankara. 2004.
http://www.shsm.gov.tr/public/documents/legislation/bhkp/asi/bhibs/BulHastBilSistStanSurveL abReh.pdf (son eriĢim tarihi: 18.12.2013)
5 Brooks Gf, Carroll KC, Butel J, Morse S, Mietzner T. The Neisseriae. In: Jawetz E, Melnick JL, Adelberg EA (eds). Medical Microbiology. 25th ed. McGraw-Hill Medical, New York. 2010.
6 Apicella MA. Neisseria meningitidis. In: Mandell GL, Bennett JE, Dolin R (ed.). Mandell, Douglas, and Bennett’s Principles and Practice of Infectious Diseases. 7th Edition. Elsevier, Philadelphia.
2010, p. 2737-2752.
7 Harvey RA, Champe PC, Fisher BD. Neisseriae. In: Lippincott's Illustrated Reviews:
Microbiology. 2nd ed., Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia. 2007, p.101-109.
8 Janda W, Gaydos C. Neisseria. In: Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH(eds). Manual of Clinical Microbiology. 9th ed., ASM Press, Washington D.C. 2007, p. 601-620
9 Halperin SA, Bettinger JA, Greenwood B, et al. The changing and dynamic epidemiology of meningococcal disease. Vaccine 2012;30 (Suppl 2):B26-36.
10 Caugant DA, Nicolas P. Molecular surveillance of meningococcal meningitis in Africa. Vaccine 2007; 3: 8-11.
11 Mayer LW, Reeves MW, Al-Hamdan N, et al. Outbreak of W135 meningococcal disease in 2000:
not emergence of a new W135 strain but clonal expansion within the electophoretic type-37 complex. J Infect Dis 2002;185:1596-1605.
12 World Health Organization. Meningococcal disease, serogroup W135 (update). Wkly Epidemiol Rec 2001;76:213-214.
13 Kilic A, Urwin R, Li H, Saracli MA, Stratton CW, Tang YW. Clonal spread of serogroup W135 meningococcal disease in Turkey. J Clin Microbiol 2006; 44: 222-224.
14 Kilic A, Jolley KA, Gul HC, et al. Genetic and antigenic characterization of Neisseria meningitidis strains isolated from Turkish recruits in 2006. Intern Med 2008;47:1949-1950.
15 Ercis S, Köseoğlu Ö, Salmanzadeh-Ahrabi S, Ercis M, Akın L, Hasçelik G. Ankara ili Çankaya ilçesi okullarındaki sağlıklı çocuklarda nazofaringeal Neisseria meningitidis taĢıyıcılık prevalansı, serogrup dağılımı ve antibiyotik direnci. Mikrobiyol Bul 2005;39(4):411-20.
16 Kılıç A, Jolley KA, BeĢirbellioğlu B, Koçak N, Bedir O, Eyigün CP, BaĢustaoğlu AC. Bir askeri hastanede fatal menenjit etkeni olarak izole edilen Neisseria meningitidis serogrup W-135 suĢlarının genotipik özellikleri. Mikrobiyol Bul 2009; 43: 515-517.
17 Punar M, Çağatay AA, Özsüt H, Eraksoy H, Çalangu S, Dilmener M. Ġstanbulda bir ilkokulda asemptomatik Neisseria meningitidis taĢıyıcılığı. Klimik Derg 2001;14(1):17-18.
18 Dinleyici EÇ. Yeni meningokok aĢıları. ANKEM Derg 2012;26(Ek 2):50-60.
Sayfa 30 / 30 Ulusal Mikrobiyoloji Standartları 01.01.2015 /Sürüm: 1.1 / B-MT-03 / Mikrobiyolojik Tanımlama / Bakteriyoloji
19 Kilic A, Bedir O, Basustaoglu AC, et al. Neisseria meningitidis serogroup X sequence type 767 in Turkey. J Clin Microbiol 2010;48(11):4340-1.
20 Elias J, Frosch M, Vogel U. Neisseria. In: Versalovic J, Carroll KC, Funke G, Jorgensen JH, Landry ML, Warnock DW (eds). Manual of Clinical Microbiology. 10th ed., ASM Press, Washington D.C. 2011, p. 559-573
21 Marrazzo JM, Handsfield HH, Sparling PF. Neisseria gonorrhoeae. In: Mandell GL, Bennett JE, Dolin R (ed). Principles and Practice of Infectious Diseases. 7th ed., Elsevier, Philadelphia. 2010, p. 2753-2770
22 Schwam E, Cox J. Fulminant meningococcal supraglottitis: An emerging infectious syndrome?
Emerg Infect Dis 1999;5:464-467.
23 Salet IE, Frasch CE. Seroepidemiologic aspects of Neisseria meningitidis in homosexual men.
Can Med Assoc J 1982;126:38-41.
24 Tunkel AR, Scheld WM. Acute meningitis. In: Mandell GL, Bennett JE, Dolin R (Eds). Principles and Practice of Infectious Diseases. 6th ed. Churchill Livingstone, Chapter 80; 2005
25 York MK. Cerebrospinal Fluid Cultures. In: Garcia LS (ed. in chief). Clinical Microbiology Procedures Handbook. 2nd ed. update, ASM Press, Washington D.C. 2007, p. 3.7.1 - 3.7.7 26 CDC. Chapter 10: PCR for detection and characterization of bacterial meningitis pathogens:
Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, and Streptococcus pneumoniae. Second edition, CDC and WHO. 2011. http://www.cdc.gov/meningitis/lab-manual/chpt10-pcr.html (son eriĢim tarihi 06.01.2014).
27 CDC. Chapter 5. Collection and transport of clinical specimens. In: Laboratory Methods for the Diagnosis of Meningitis. Second ed., CDC ve WHO. 2011. http://www.cdc.gov/meningitis/lab-manual/chpt05-collect-transport-specimens.html (son eriĢim tarihi 03.03.2014).
28 Ajello GW, Feeley JC, Hayes PS et al. Trans-isolate medium: a new medium for primary culturing and transport of Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae. J Clin Microbiol 1984;20(1):55-8
29 Garcia LS. Calibration of microscope with an ocular micrometer. In: Garcia LS, Isenberg HD (eds). Clinical microbiology procedures handbook. 2nd ed. update, ASM Press, Washington D.C.
2007, p. 9.3.2.1-4
30 CDC. Chapter 6. Primary culture and presumptive identification of Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae. In: Laboratory Methods for the Diagnosis of Meningitis. Second ed., CDC and WHO, 2011. http://www.cdc.gov/meningitis/lab-manual/chpt06-culture-id.html (son eriĢim tarihi 06.01.2014)
31 CDC. Chapter 7: Identification and characterization of Neisseria meningitidis. Second edition, CDC and WHO. 2011 http://www.cdc.gov/meningitis/lab-manual/chpt07-id-characterization-nm.html (son eriĢim tarihi 06.01.2014)
32 York MK, Traylor MM, Hardy J, Henry M. Biochemical Tests for the Identification of Aerobic Bacteria. Catalase Test. In: Garcia LS (ed. in chief). Clinical Microbiology Procedures Handbook.
3rd ed. update, ASM Press, Washington D.C. 2010, p. 3.17.11.
33 CDC. Chapter 14: Storage and shipping of Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae. Second ed., CDC and WHO. 2011.
http://www.cdc.gov/meningitis/lab-manual/chpt14-storage-shipping.html (son eriĢim tarihi 06.01.14)
34 Enfeksiyöz madde ile enfeksiyöz tanı ve klinik örneği taĢıma yönetmeliği. Sağlık Bakanlığı, Ankara. Resmi Gazete 25.09.2010 – 27710.