Ulusal Bilgi Alt yapısı, Ulusal Bilgi Politikası ve Bilgi Hizmetlerinin

III.1.1 Equipamentos

III.1.1.1 Testes qualitativos preliminares

Todos os ensaios preliminares qualitativos dessa etapa do trabalho foram realizados em um espectrofotômetro UV-VIS HP 8453 com cubeta de quartzo e caminho óptico de 1,0 cm.

III.1.1.2 Sistema de análise em fluxo automático empregando multi- bombas (MPFS) com detecção espectrofotométrica

Para a obtenção dos resultados experimentais utilizando o sistema MPFS, foram utilizadas duas micro-bombas solenóides automáticas de 20 L (120SP1220) e uma de 10L (120SP1210) de capacidade da marca Bio-chem Valve Inc; uma cubeta de fluxo de quartzo com b = 1,0 cm e 18L de volume interno; conectores e tubos de polietileno com 0,8 mm de diâmetro interno e confluência de acrílico em X (quatro vias) para transporte e mistura das soluções. O sistema de detecção consistiu de um espectrofotômetro Ocean Optics UBS 4000 conectado a uma fonte de luz UV-Vis modelo USB-ISS. O registro dos dados foi realizado por um microcomputador tipo IBM-PC Pentium II equipado com o softwate Ocean Optics SpectraSuite. Um outro microcomputador foi utilizado para controlar as microbombas através de uma interface eletrônica (PCL 711 Advantech interface card) e software Quick Basic

4.5. Softwares estatísticos como o Minitab 16, Statistica 7.0 foram utilizados

para o planejamento experimental e Origin 7.0/Excel 2010 para tratamento dos dados.

III.1.1.3 Método de referência

Para a obtenção dos resultados pelos métodos de referência foi utilizado um Cromatrógráfo Líquido de Alta Eficiência SHIMADZU Proeminence – 20AT acoplado a um detector UV de arranjo de fotodiodos (DAD). Foram utilizados

36 dois métodos de referência. Para análise de norfloxacina, ciprofloxacina e enrofloxacina, foi utilizado o método proposto por Cañada et al (2007, p. 1242- 1249). Foi utilizada uma coluna cromatográfica OMNISPHER 5 RP C18 150mm x 4,6mm; 5m Varian e a fase móvel, composta por uma mistura de metanol- acetonitrila-tampão citrato 10 mmol L-1 _{a pH 3,5. Para a análise de}

levofloxacina, foi utilizado o método proposto por Nur et al (2013, p. 633-638) e uma coluna cromatográfica C-18 250mm x 4,6mm; 5m. A fase móvel utilizada no método consistiu de uma mistura acetonitrila-ácido acético 10%

III.1.2 Reagentes e padrões

Todos os reagentes e padrões utilizados nos experimentos são de grau analítico e nas diluições, utilizou-se água deionizada obtida do Deionizador Millipore Milli-Q plus (membrana Millipore 0,22 m, resistividade 18,02 M.cm e temperatura 25º C).

a) N-bromosuccinimida (NBS) - ALDRICH, pureza 99% b) Dodecil sulfato de sódio (SDS) - SIGMA ALDRICH

c) Ácido clorídrico fumegante – MERCK – 37 %, d = 1,19 g cm-3 d) Padrão de norfloxacina – (pureza 99,97 %, Purifarma)

e) Padrão de cloridrato de ciprofloxacina – (pureza 100,0 %, Purifarma) f) Padrão de enrofloxacina –(pureza 99.97%, Sigma Aldrich)

g) Padrão de hemiidrato de levofloxaxina(pureza 99.97%)

h) Excipientes de grau farmacêutico: celulose microcristalina, dióxido de silício, hidroxipropilmetilcelulose, polietilenoglicol (PEG 6000), lactose, dióxido de titânio, amido, talco, polivinilpirrolidona (PVP), estearato de magnésio, manitol, frutose, glicose e cloreto de benzalcônio.

37 III.1.3 Preparo das soluções

III.1.3.1 Soluções padrão

Soluções padrão de norfloxacina e enrofloxacina

Soluções estoque de norfloxacina e enrofloxacina 500 g mL-1 foram preparadas individualmente dissolvendo-se 50 mg do padrão em 9,6 mL de HCl 1,042 mol L-1 (concentração final 0,10 mol L-1) e posteriormente transferidos a um balão volumétrico de 100,00 mL e completado com água ultrapura Milli-Q.

Solução padrão de ciprofloxacina

Solução estoque de ciprofloxacina 500 g mL-1 _{foi preparada dissolvendo-se}

58,3 mg do padrão de cloridrato de ciprofloxacina em 9,6 mL de HCl 1,042 mol L-1 _{(concentração final 0,10 mol L}-1_{) e posteriormente transferidos a um balão}

volumétrico de 100,00 mL e completado com água ultrapura Milli-Q.

Solução padrão de levofloxacina

Solução estoque de levofloxacina 500 g mL-1 foi preparada dissolvendo-se 51,5 mg do padrão de cloridrato de ciprofloxacina em 9,6 mL de HCl 1,042 mol L-1 _{(concentração final 0,10 mol L}-1_{) e posteriormente transferidos a um balão}

volumétrico de 100,00 mL e completado com água ultrapura Milli-Q. III.1.3.2 Soluções estoque do reagente cromogênico

Soluções de n-bromossucinimida (NBS) 0,01 mol L-1 _{e 0,06 mol L}-1 _foram

preparadas dissolvendo-se 89,0 e 267,0 mg, respectivamente, do sólido em água ultrapura Milli-Q e posteriormente transferidos a um balão volumétrico de 25,00 mL e completado com água ultrapura Milli-Q.

38 III.1.3.3 Solução estoque de SDS

Solução estoque do surfactante aniônico dodecil sulfato de sódio (SDS) 0,1 mol L-1 foi preparada dissolvendo-se 2,9 g do sólido em água deionizada e transferida a um balão volumétrico de 100,00 mL.

III.1.4 Preparo das Amostras

Comprimidos

O conteúdo de uma caixa (sete ou dez comprimidos, no caso do medicamento veterinário) da amostra comercial foi pesado em balança analítica, determinado o valor médio das massas e então pulverizados em gral de ágata e homogeneizados. Foi pesada uma massa de medicamento contendo aproximadamente 20 mg do princípio ativo, a qual foi solubilizada em 9,6 mL de solução de HCl 1,042 mol L-1_{; em seguida, a mistura foi transferida para um}

balão volumétrico de 100,00 mL; o volume completado com água deionizada e sonicada por 10 minutos. Em seguida, a mistura foi filtrada em papel de filtro Whatman nº41 e uma alíquota de 2,50 mL do filtrado foi transferida a um balão volumétrico de 25,00 mL contendo 2,50 mL de solução de SDS 0,10 mol L-1 _{e o}

volume completado com água deionizada (concentração final HCl 0,01 mol L-1

e SDS 0,010 mol L-1_{). Para as amostras cujos comprimidos eram revestidos}

com corantes, a solução de trabalho foi filtrada com membrana Miilipore 0,45 m antes de se proceder a análise.

Solução (injetável, oral ou oftálmica)

Uma alíquota de amostra equivalente a 20 mg do princípio ativo foi transferida a um balão volumétrico de 100,00 mL e adicionado 966 mL de HCl 1,042 mol L-

1_{, o menisco foi completado com água deionizada e a mistura sonicada por 10}

minutos. Uma alíquota de 2,50 mL dessa solução foi transferida a um balão volumétrico de 25,00 mL contendo 2,50 mL de solução de SDS 0,10 mol L-1 _{e o}

volume completado com água deionizada (concentração final HCl 0,01 mol L-1

39 III.2 Metodologias

III.2.1 Ensaios qualitativos preliminares

Após uma análise da literatura, foram realizados testes preliminares (qualitativos) em solução onde se estudou a sensibilidade da reação das fluoroquinolonas do presente estudo frente ao cromogênico NBS, para posterior estudo de metodologias aplicadas a análise por injeção em fluxo com detecção espectrofotométrica na região do visível. Com o objetivo de aumentar a sensibilidade foram utilizadas algumas estratégias como o uso de surfactantes (ROCHA, 2004) e aumento na temperatura da reação.

III.2.2 Sistema em fluxo automático empregando multi-bombas (MPFS)

O procedimento de análise em fluxo adotado no presente trabalho consistiu na utilização de três micro-bombas solenóides automáticas (P1, P2 e P3) controladas por um software (microcomputador PC1). A micro-bomba P1 (com capacidade de 10 L por pulso) impulsiona a solução do reagente cromogênico. Já as micro- bombas P3 e P2 (ambas com capacidade de 20 L por pulso) impulsionam as soluções carregadora e de amostra, respectivamente. O software foi configurado de acordo com a estratégia de amostragem binária. Essa estratégia consiste na injeção pulsada intercalada de alíquotas de ambas as soluções criando múltiplas interfaces de reação, onde ocorre dispersão, promovendo uma mistura eficiente. A combinação da amostragem binária com o fluxo pulsado criado pelas micro- bombas solenóides promove uma homogeneização ainda mais rápida e eficiente, favorecendo o desenvolvimento da reação. O sistema MPFS está representado na Figura 08.

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Figura 08: Esquema do sistema MPFS. P1: microbomba do reagente (R); P2: microbomda da amostra (A); P3: microbomba da solução carregadora (CA). D: descarte; X: confluência; RC: bobina reacional; W: fonte de luz (USB-ISS UV-Vis); E: detector (USB4000); C: cubeta de fluxo

(b=1,0cm). [fonte: elaborado pelo próprio autor]