1.6. BAĞIMSIZ DENETĠM SÜRECĠ
1.6.4. Denetim ÇalıĢmasının Tamamlanması ve Raporlama
Para o desenvolvimento do procedimento de análise por injeção em fluxo foi utilizado o sistema de análise modular ASIA da Ismatec (Zurique, Suíça) (Figura 24)
equipado com: bomba peristáltica de quatro canais, Ismatec modelo IS 7610 com rotação variável (1 - 50 rpm) para a propulsão das soluções e uma válvula de injeção (6 canais, IS 7630, Rheodyne 5041, EUA) para a injeção das soluções de sulfonamidas e amostras na qual foi inserida a alça de amostragem.
Para o sistema FIA acoplado ao procedimento de extração em fase sólida (EFS) um injetor comutador confeccionado em acrílico foi utilizado para a etapa de EFS (retenção dos analitos, limpeza e eluição).
A detecção foi realizada pelo acoplamento, através de uma interface RS232, a um espectrofotômetro de arranjo de diodos UV-Vis HP 8453A (Hewlett Packard, EUA). As medidas de absorbância foram efetuadas em cubeta de fluxo, com caminho ótico de 1,00 cm e volume interno de 80µl, Hewlett Packard (Hewlett Packard, EUA).
IX.1.2.3. Cromatografia líquida de alta eficiência
Para a execução das análises quantitativas das amostras previamente analisadas no sistema de screening utilizou-se o método de cromatografia líquida de alta eficiência com detecção em 263 nm, descrito na literatura14. O sistema utilizado consiste de um cromatógrafo líquido Shimadzu SPD-10A (Shimadzu Seisakusko Kyoto, Japan) equipado com uma bomba LC-10AS Shimadzu, com detector UV– visível (SDR-10A, Shimadzu), e um injetor automático de 20 µL Rheodyne. Foi utilizada uma coluna analítica de C-18 Microsorb-MVTM 100 Å (250 x 4,6 mm i.d.; Varian, EUA) e pré-coluna C-18 com tamanho de partícula de 5 µm (2,0 x 4,6 mm i.d.).
A fase móvel utilizada no método CLAE foi uma mistura de metanol:solução aquosa de tampão acetato 0,05 mol L-1 (pH = 3,6) na proporção de 20:80 (v/v) contendo 1% de ácido acético (v/v), bombeada a uma vazão de 0,6 mL min-1. A área dos picos foi medida em um integrador Shimadzu C-R6A Chromatopac.
IX.1.3. Reagentes e soluções
Para a preparação das soluções foi utilizada água destilada e purificada em sistema Milli-Q Gradiente (Millipore, Bedford, EUA) (18,2 m cm-1). Todos os
reagentes utilizados no desenvolvimento deste trabalho foram de grau analítico e encontram-se listados abaixo.
¾ p-Dimetilaminocinamaldeído (p-DAC) (98%, p.a., Aldrich, Milwaukee, EUA); ¾ HCl 37%(Mallinckrodt, Xalostoc, México);
¾ Dodecil sulfato de sódio (SDS) (99,9%, Sigma, St. Louis, EUA), ¾ Ácido acético glacial 99% (Mallinckrodt, Xalostoc, México); ¾ Acetato de sódio (99,9%, Fisher, New Jersey, EUA);
¾ NaOH (98%, Synth, São Paulo, Brasil); ¾ KCl (99,0 %, Synth, São Paulo, Brasil);
¾ Metanol, Acetonitrila e Acetato de etila (grau cromatográfico, Mallinckrodt, Xalostoc, México).
As sulfonamidas utilizadas neste trabalho foram adquiridas da Henrifarma, São Paulo, Brasil todas com teor de pureza igual ou superior a 99,5%: Sulfatiazol; Sulfanilamida; Sulfametoxipiridazina; Sulfametoxazol; Sulfametazina sódica; Sulfamezarina e Sulfacetamida sódica. As estruturas químicas destas sulfonamidas estão mostradas na Figura 35.
SO2NH H2N N N CH3 CH3 Sulfametazina SO2NH H2N N N OCH3 Sulfametoxipiridazina SO2NH H2N N N CH3 Sulfamezarina SO2NH H2N S N SO2NHCOCH3 H2N Sulfatiazol Sulfacetamida SO2NH H2N N O CH3 Sulfametoxazol SO2NH2 H2N Sulfanilamida
Figura 35. Estrutura química das sulfonamidas estudadas neste trabalho.
As soluções utilizadas neste trabalho foram:
a) Soluções de sulfonamidas de trabalho: Foram preparadas
semanalmente soluções estoque 50,0 Pg mL-1, pela dissolução de 12,5 mg de cada
sulfonamida com 15 mL de HCl 1,20 x 10-1 mol L-1 e quantitativamente transferidas para balão volumétrico de 250 mL e o volume completado com água deionizada até a marca. Estas soluções foram acondicionadas em vidros de cor âmbar na geladeira. Soluções padrão foram preparadas a partir de diluições adequadas das soluções estoque com água deionizada e utilizadas na construção das curvas analíticas (0,050 a 5,00 Pg mL-1 para o sistema de screening e 0,010 a 0,170 Pg mL-1 para o
Soluções contendo misturas das sulfonamidas em cinco níveis de concentração final (50; 75; 100; 150 e 200 ng mL-1) foram preparadas através de
adequada diluição das soluções estoques de modo a obter as concentrações mostradas nas Tabelas 1-5 (Anexo 4). Estas soluções foram utilizadas no estudo da aplicabilidade do método de “screening” desenvolvido.
b) Solução estoque de HCl 2,0 mol L-1: foi preparada através da
conveniente diluição do HCl concentrado (37,0% m/v) com água deionizada e adequadamente padronizada242. Soluções de trabalho foram preparadas por diluição com água deionizada.
c) Solução de p-dimetilaminocinamaldeído (p-DAC) 0,013 % (m/v): foi
preparada pela dissolução de 13,3 mg de p-DAC em HCl 3,70 x 10-2 mol L-1 em balão volumétrico de 100 mL.
d) Solução estoque de dodecil sulfato de sódio (SDS) 0,10 mol L-1: foi
preparada semanalmente através da dissolução de 7,12 g de SDS em aproximadamente 100 mL de água deionizada. Esta solução foi quantitativamente transferida para balão volumétrico de 250 mL e o volume completado com água deionizada até a marca. Soluções de trabalho foram convenientemente preparadas através de diluição com água deionizada.
e) Solução de NaOH 1,05 x 10-1 mol L-1: foi preparada pela dissolução de
2,15 g do sólido (pastilhas) em aproximadamente 200 mL de água deionizada. A solução resultante foi quantitativamente transferida para balão volumétrico de 500 mL e o volume completado com água deionizada até a marca. A solução foi padronizada com a solução padrão de HCl 1,20 x 10-1 mol L-1. Soluções de trabalho foram preparadas através de diluição adequada com água deionizada.
f) Solução de KCl 2,0 x 10-1 mol L-1: foi preparada pela dissolução de 7,53 g
do sólido em aproximadamente 200 mL de água deionizada. A solução resultante foi quantitativamente transferida para balão volumétrico de 500 mL e o volume
completado com água deionizada até a marca. Esta solução foi utilizada no preparo da solução contendo a mistura de 50 mL KCl (2,0 x 10-1 mol L-1) com 7,8 mL de HCl
(2,00 x 10-1 mol L-1) em balão volumétrico de 200 mL e o volume completado até a
marca com água deionizada. O pH final desta solução foi determinado em pHmetro como sendo de 2,2. Esta mistura foi utilizada para o ajuste do pH das soluções de amostras empregando o sistema FIA acoplado a etapa de EFS no modo on-line.
g) Fase móvel utilizada no método CLAE para análise quantitativa das amostras positivas ou negativas indicadas pelo procedimento screening: A
fase móvel utilizada foi a solução aquosa de acetato de sódio 0,05 mol L-1 (pH = 3,6) Metanol (80:20 v/v) e 1% de ácido acético. A fase móvel foi filtrada em membrana de 0,45 µm de nylon (Millipore) sob vácuo e degaseificada pelo borbulhamento de nitrogênio durante 30 minutos em ultra-som.