Aristoteles’te İlk Hareket Ettirici ve Fârâbî’de Varlığı Zorunlu Varlık

Nesta etapa do experimento foram estudados os hidrolisados hemicelulósico original, e hidrolisado hemicelulósico original sintético, cujas características foram apresentadas na Tabela 5 e no item 3.7.

A concentração de glicose nos dois meios encontrava-se baixa, e foi consumida totalmente pelas leveduras nas primeiras 6 hs (Figuras 5 e 6), quando empregou-se como mosto o hidrolisado hemicelulósico; enquanto foi consumida mais lentamente quando empregou-se mosto sintético. Considerando-se que as concentrações de glicose nos dois meios eram iguais, provavelmente algum componente presente no hidrolisado, como por exemplo algum íon, pode ter favorecido esse consumo. Esse rápido consumo de glicose também já foi observado em hidrolisados de bagaço de cana (CHENG et al., 2008), palha de trigo CANILHA et al. (2005) e cevada MORAES (2008).

Figura 5: Consumo de glicose durante o período de 12 hs, em mosto sintético e

hidrolisado de bagaço de cana.

Figura 6: Consumo de glicose pelas estirpes CG, J10 e J19.1, durante o período de

Verificou-se maior concentração de xilose nos meios, quando comparado à glicose. Isto deve-se ao fato de que as condições utilizadas para hidrolisar a fração de hemicelulose não foram fortes o suficiente para quebrar as ligações da celulose e liberar glicose no meio, assim as quantidades de glicose presentes no hidrolisado corresponde às quantidades originais do meio (Tabela 6 e 7).

Tabela 6: Resultado da análise de variância (teste de F) e comparação de médias pelo

teste de Tukey (5% de probabilidade) para as concentrações de xilose, ácido acético e etanol, empregando-se como mosto o hidrolisado hemicelulósico original.

Causas de

variação Xilose (g/L) Ácido Acético (g/L) Etanol (g/L)

A - leveduras CG 5,53A 1,36B 1,19ª J10 5,56A 2,10A 1,10ª J19.1 5,59A 2,16A 1,12ª F 0,46ns 21,25** 0,55ns DMS 0,15 0,33 0,24 B - períodos 0 17,5A 0,00B 0,00B 6 1,57B 2,47A 1,46ª 9 1,56B 2,47A 1,67ª 12 1,60B 2,55A 1,43ª F 23707,80** 124,75** 92,23** DMS 0,20 0,43 0,30 INTERAÇÃO A X B 0,40ns 2,41* 1,93ns CV 3,22 20,69 24,29

Letras iguais não diferem entre si pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. ns = não significativo

* = significativo ao nível de 5% ** = significativo ao nível de 1%

Tabela 7: Resultado da análise de variância (teste de F) e comparação de médias pelo

teste de Tukey (5% de probabilidade) para as concentrações de glicose, xilose, ácido acético e etanol, empregando-se o mosto sintético original.

Causas de

variação Glicose (g/L) Xilose (g/L)

Ácido Acético

(g/L) Etanol (g/L)

A - leveduras

CG 1,82A 5,42A 0,07A 1,34ª

J10 1,93A 5,47A 0,05A 1,11ª

J19.1 1,75A 5,45A 0,04A 1,32ª

F 0,24ns 0,28ns 1,80ns 1,84ns DMS 0,64 0,15 0,03 0,33 B - períodos 0 3,50A 17,50A 0,00C 0,00B 6 2,90A 1,41B 0,00C 1,56ª 9 0,92B 1,47B 0,16A 1,88ª 12 0,00C 1,41B 0,06B 1,59ª F 59,05** 24327,88** 58,80** 59,94** DMS 0,81 0,20 0,04 0,30 INTERAÇÃO A X B 0,29ns 1,76ns 1,88ns 0,93ns CV 40,41 3,27 62,60 30,29

Letras iguais não diferem entre si pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. ns = não significativo

* = significativo ao nível de 5% ** = significativo ao nível de 1%

Para consumo de xilose pelas leveduras observa-se que apresentaram comportamento semelhante tanto no meio sintético quanto no hidrolisado, sendo que as leveduras não diferiram entre si com relação ao consumo desse açúcar, que foi metabolizado em sua grande maioria nas primeiras 6 hs de fermentação (Figuras 7 e 8).

Figura 7: Consumo de xilose durante o período de 12 hs, em mosto sintético e

hidrolisado de bagaço de cana.

Figura 8: Consumo de xilose pelas estirpes CG, J10 e J19.1, durante o período de

12hs.

Houve maior produção de etanol no meio sintético, tendo seu pico de produção no tempo 9 hs (Tabelas 6 e 7 e Figuras 9 e 10). Observa-se porem, que após o pico de produção, ocorre uma redução da concentração de etanol. Alguns pesquisadores

relatam que essa redução deve-se à dois fatores: ao consumo pelas leveduras, utilizando-o como fonte de carbono após o esgotamento do meio ou pela evaporação de etanol KIPPER, (2009); CANILHA et al. (2010). SILVA et al. (2004) atribuem essa redução às condições de anaerobiose ou limitação de oxigênio, que causam um desbalanço redox, o qual interfere com a produção de xilitol e dos subprodutos (etanol e/ou glicerol). Nesse ensaio, provavelmente houve consumo de etanol como fonte de carbono pelas leveduras, e não perda significativa por evaporação, uma vez que os frascos eram devidamente fechados, mantendo apenas um pequeno orifício para eliminação do CO2.

Figura 9: Produção de etanol pelas leveduras CG, J10 e J19.1, durante o período de

12 hs, em mosto sintético e hidrolisado de bagaço de cana.

KIPPER (2009), em seus experimentos empregando P. tannophilus, observou que o ápice da produção de etanol ocorreu após 24 hs de fermentação, sendo que a redução na concentração foi observada com 48 hs. Comportamento semelhante foi observado no presente estudo, quando trabalhou com concentrações menores e respectivamente tempos reduzidos.

Figura 10: Produção de etanol durante o período de 12 hs, em mosto sintético e

hidrolisado de bagaço de cana.

A concentração de etanol obtida no presente ensaio foi baixa, com teores entre 1 e 2g/L, próximos aos obtidos por KIPPER (2009), que apresentou produção de 0,205% de etanol. Esses valores são resultantes da baixa concentração de açúcares disponibilizada no mosto, assim, considerando-se que as leveduras desdobram os açúcares através do processo de fermentação, verifica-se que os teores de etanol quantificados foram baixos, na faixa de 1,42g/L a 1,88g/L.

Observou-se também produção de ácido acético ao decorrer da fermentação, sendo que no meio sintético este aumento foi insignificante (Tabela 7), porém no meio hidrolisado original o aumento foi progressivo (Tabela 6 e Figuras 11 e 12). O aumento da concentração desse ácido pode ter ocorrido por ocasião da utilização do etanol como substrato pelas leveduras WALKER (1998). Nesse processo, o etanol é convertido em acetaldeído e este em acetato; ou ainda diretamente em ácido acético por processos de oxidação.

Figura 11: Concentração de ácido acético nas fermentações com os meios hidrolisado

e sintético, durante o período de 12 hs.

Figura 12: Viabilidade celular das estirpes CG, J10 e J19.1, durante o período de 12hs.

Segundo FELIPE et al. (1995) concentrações abaixo de 3,0g/L não foram prejudiciais à bioconversão de xilose em xilitol durante fermentação de meio de cultivado por C. guilliermondii, sendo assim os resultados obtidos favoráveis, já que o pico de ácido acético não foi superior a 2,55g/L.

ALVES et al. (1998), trabalhando com produção de xilitol a partir de hidrolisados de bagaço de cana, observou a assimilação de ácido acético pela cepa C. guilliermondii

FTI 20037, porém não houve relatos da síntese desse composto, que geralmente é produzido através da conversão de etanol a ácido acético pela bactéria acetobacter, contaminante presente nas fermentações etanólicas.

A viabilidade celular de leveduras encontrava-se acima de 94%, com mais de 92% de brotos viáveis (Tabelas 8 e 9 e Figura 13). Verificou-se uma pequena redução da viabilidade das células a partir de 6 hs de fermentação, o que pode ter ocorrido em função do esgotamento do meio. Entretanto, essa redução não prejudicou o processo, uma vez que durante toda a fermentação manteve-se acima de 92%. Resultados similares foram verificados para viabilidade de brotos de leveduras (Tabelas 8 e 9 e Figura 14).

Tabela 8: Resultado da análise de variância (teste de F) e comparação de médias pelo

teste de Tukey (5% de probabilidade) para as análises microbiológicas, empregando-se como mosto o hidrolisado hemicelulósico original.

Causas de

Variação Celular (%)Viabilidade Brotamentos (%) Viabilidade de Brotos (%) A - leveduras CG 94,53A 41,10A 96,88ª J10 95,84A 40,50A 94,62ª J19.1 94,99A 38,07A 95,14ª F 0,44ns 0,44ns 0,89ns DMS 3,48 8,37 4,35 B - períodos 0 98,20A 42,03A 92,76B 6 92,34B 39,38A 93,61B

9 94,47AB 39,11A 95,82AB

12 95,48AB 39,04A 100,00A

F 4,38* 0,26ns 4,94**

DMS 4,43 10,65 5,54

INTERAÇÃO

A X B 0,11ns _0,41ns _1,19ns

CV 4,24 24,29 5,27

Letras iguais não diferem entre si pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. ns = não significativo

* = significativo ao nível de 5% ** = significativo ao nível de 1%

Tabela 9: Resultado da análise de variância (teste de F) e comparação de médias pelo

teste de Tukey (5% de probabilidade) para as análises microbiológicas, empregando-se o mosto sintético original.

Causas de

Variação Viabilidade Celular (%) Brotamentos (%) Viabilidade de Brotos (%)

A -leveduras CG 95,73A 38,56A 97,50ª J10 96,29A 38,54A 98,46ª J19.1 96,43A 36,74A 97,27ª F 0,76ns 1,30ns 1,18ns DMS 1,46 3,17 2,00 B - períodos 0 95,79AB 43,19A 98,35ª 6 97,53A 36,71B 97,93ª 9 95,60B 36,57B 96,92ª 12 95,68AB 35,31B 97,78ª F 3,59* 11,24** 0,80ns DMS 1,86 4,04 2,55 INTERAÇÃO A X B 0,50ns 2,85* 1,63ns CV 1,76 9,68 2,37

Letras iguais não diferem entre si pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. ns = não significativo

* = significativo ao nível de 5% ** = significativo ao nível de 1%

Figura 13: Índice de brotamentos das estirpes CG, J10 e J19.1, durante o período de

Figura 14: Viabilidade de brotos das estirpes CG, J10 e J19.1, durante o período de

12hs.

O índice de brotamento das leveduras permaneceu elevado durante todo o processo (Figura 15). AMORIM et al. (1996) relatam que a porcentagem ideal de brotamentos em um processo fermentativo deve variar entre 5 a 15%. A alta porcentagem de brotamentos após 6 hs de fermentação pode ser justificada pela baixa concentração de açúcares no meio fermentativo. Segundo WALKER (1998), devido ao Efeito Crabtree que algumas leveduras desenvolvem, em condições de baixa concentração de açúcares, ocorrendo favorecimento do processo de respiração e assim multiplicando-se em maiores taxas.

Figura 15. Crescimento de massa celular. 15A. Crescimento de massa celular das

cepas J10, J19.1 e CG em mosto sintético e hidrolisado de bagaço de cana. 15B. Crescimento de massa celular em mosto sintético e hidrolisado de bagaço de cana durante o período de 12 hs.

4.3.Segunda Etapa do Experimento _{– Hidrolisado Hemicelulósico Concentrado e}