Karar Verme Modeller

A expressão gênica deP3 no fluido gengival de pacientes não diabéticos com periodontite crônica (PC) foi significantemente maior (p<0,05) que o Controle (Figura 5.4).

Em pacientes diabéticos com periodontite crônica (DPC), a expressão gênica de P3 no fluido gengival foi significativamente maior (p<0,05) que diabéticos sem periodontite crônica (Diabetes), e significativamente menor (p<0,05) que não diabéticos com periodontite crônica (PC) (Figura 5.4).

O tratamento periodontal levou a diminuição significativa (p<0,05) de P3 no fluido gengival de diabéticos e não diabéticos com periodontite crônica (DPC e PC) (Figura 5.4)

Figura 5.4 - Expressão gênica de P3 em células do FG, antes e após tratamento periodontal não cirúrgico. *Diferença estatística em relação ao grupo Controle (não diabéticos com saúde periodontal) (p<0.05) °Diferença estatística em relação ao grupo Diabetes (diabéticos com saúde periodontal) (p<0.05) ●Diferença estatística em relação ao Baseline (p<0.05), ▪ Diferença estatística em relação ao baseline de não diabéticos com periodontite crônica (p<0.05)

6 DISCUSSÃO

Este estudo foi conduzido para avaliar a influência do diabetes mellitus do tipo 2 na expressão gênica dos receptores PAR1 e PAR2 no fluido gengival de

pacientes com periodontite crônica. Nós demonstramos que pacientes diabéticos

apresentam uma maior expressão de PAR1 no fluido gengival e que na presença da

periodontite crônica a expressão de PAR2 encontra-se diminuída nesses pacientes.

A maior expressão de PAR1 nos indivíduos diabéticos do presente estudo está de

acordo com estudos prévios, que demonstraram que o estado hiperglicêmico característico desses indivíduos pode levar ao aumento da expressão de PAR1, por

levar ao aumento da produção de trombina, seu principal ativador (Ferroni et al., 2004; Coughlin, 2005).

Na presença da periodontite crônica, diabéticos e não diabéticos

apresentaram uma menor expressão do PAR1 no fluido gengival, sendo que após o

tratamento periodontal essa expressão aumentou. Bueno da Silva et al. (2014) também encontraram os mesmos resultados em um estudo com pacientes sistemicamente saudáveis com periodontite crônica. Os pesquisadores demonstraram a diminuição da expressão de PAR1 na presença de inflamação, e

aumento da expressão desse receptor no fluido gengival após o tratamento periodontal, e sugerem que esse receptor apresenta um papel protetor durante o reparo tecidual periodontal. Sabe-se também que a ativação de PAR1 em células do

ligamento periodontal, pela trombina, induz a síntese de OPG, uma proteina que pode inibir a diferenciação e função de osteoclastos. (Arayatrakoollikit et al., 2008). A trombina via PAR1, também pode induzir a proliferação de fibroblastos gengivais de

ratos (Ohuchi et al., 2010), e regular a atividade da ciclooxigenase (COX2) imediatamente após injuria, induzindo a liberação de diversos fatores de crescimento, tais como VEGF, FGF-1 e -2, CTGF e, TGFβ-1 (Pagel et al., 2009).

Pacientes sistemicamente saudáveis com periodontite crônica apresentaram maior expressão de PAR2, e relacionamos esse resultado com a presença

exacerbada das proteases ativadoras gingipaina e P3 no fluido gengival. Após o tratamento periodontal, houve uma redução significativa das expressões da gingipaina e da P3, que consequentemente levou a diminuição da expressão do

PAR2 no fluido gengival. Resultados similares foram demonstrados in vivo e em

humanos por Holzhausen et al. (2005a); Holzhausen et al. (2010); Fagundes et al. (2011) e Euzebio Alves et al. (2014), que demonstraram que a ativação de PAR2

leva à inflamação dos tecidos periodontais, e que células epiteliais e leucócitos presentes no fluido gengival, influenciam a expressão desse receptor na presença das proteases gingipaina e P3.

Pacientes diabéticos com periodontite crônica apresentaram menor expressão de PAR2 e de P3 no fluido gengival. Após o tratamento periodontal, a

expressão gênica de PAR2 aumentou e a expressão gênica de P3 diminuiu no fluido

gengival. Sabe-se que neutrófilos são células que expressam o PAR2 no fluido

gengival de pacientes com periodontite crônica (Euzebio Alves et al., 2014), e que em diabéticos, essas células apresentam a atividade quimiotática e a liberação de enzimas comprometidas (Iacono et al., 1995). Desta maneira, acreditamos que pelo fato de neutrófilos serem hipo funcionais (Mealey; Ocampo, 2007) e se apresentarem em número reduzido na bolsa periodontal em diabéticos (Engebretson et al., 2006), possa ocorrer uma menor liberação da P3 neste ambiente e, consequentemente, menor ativação e expressão de PAR2. Segundo Ossovskaya;

Bunnett (2004), para que uma protease clive e ative o receptor, ela precisa ser produzida e liberada em concentração suficiente para ativar o receptor.

Nosso estudo também demonstrou uma melhora significativa em todos os parâmetros clínicos periodontais estudados, tanto em diabéticos quanto não diabéticos, após o tratamento periodontal não cirúrgico. Ainda, houve redução, apesar de não significativa, dos níveis da hemoglobina glicada nos diabéticos com periodontite crônica após o tratamento periodontal. Sabe-se que a resposta inflamatória significativa na periodontite crônica pode contribuir para a exacerbação do diabetes, uma vez que contribui para a resistência à insulina e para desregulação da glicemia. A hipótese de que o tratamento da periodontite crônica resulte em melhora do controle glicêmico parece ser biologicamente plausível uma vez que o tratamento periodontal não cirúrgico pode estabilizar a condição periodontal, e desta maneira contribuir para a melhora do controle glicêmico no paciente diabético (Lalla e Papapanou, 2011). A revisão sistemática conduzida por Engebretson et al. (2013) concluiu que uma modesta redução da HbA1c é observada como resultado do

Sgolastra et al. (2013) concluiu que o tratamento periodontal é efetivo na melhora do controle glicêmico, mas que estudos futuros são necessários para confirmar esse resultado.

A melhora observada no presente estudo pode não ter sido significativa do ponto de vista estatístico, mas clinicamente é bem importante porque os dados sugerem que uma redução de 0.20% no nível da HbA1c está associada com uma

7 CONCLUSÃO

Acreditamos que nosso trabalho é um dos primeiros a demonstrar a expressão gênica dos receptores ativados por protease do tipo 1 e do tipo 2 em pacientes diabéticos com periodontite crônica.

Dentro dos limites do presente estudo concluímos que:

1 - O diabetes levou ao aumento da expressão gênica do PAR1 no fluido

gengival de pacientes sem periodontite crônica quando comparados com pacientes sistemicamente saudáveis sem periodontite crônica. Na presença da periodontite crônica, o diabetes levou à diminuição da expressão de ambos os receptores (PAR1 e PAR2).

2 - O tratamento periodontal não cirúrgico levou ao aumento da expressão gênica do PAR1 e do PAR2 no fluido gengival de pacientes diabéticos.

3 - O diabetes não teve nenhum efeito sobre a expressão da gingipaina, mas, na presença de periodontite crônica, levou a uma diminuição significativa da P3. Ainda, o tratamento periodontal não cirúrgico, levou a uma diminuição significativa de ambas as proteases.

Nossos dados sugerem a importância dos receptores PAR1e PAR2 na

periodontite crônica de pacientes com diabetes. Contudo, futuros estudos são necessários para elucidar os exatos mecanismos que medeiam os efeitos dos PARs durante a inflamação e o reparo dos tecidos periodontais em diabéticos.

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ANEXO A - Termo de consentimento livre e esclarecido (TCLE) Termo de Consentimento Livre e Esclarecido

“A influência do diabete mellitus do tipo 2 na expressão dos receptores ativados por proteases do tipo 1 (PAR1) e do tipo 2 (PAR2) em células do fluido gengival de pacientes com periodontite crônica.

PESQUISADOR RESPONSÁVEL: Profa. Dra. Marinella Holzhausen Caldeira

LOCAL QUE SERÁ REALIZADO O ESTUDO: Clínica de pós-graduação da Faculdade de Odontologia da USP, localizada na Av. Prof. Lineu Prestes, 2227, Cidade Universitária

A doença periodontal deixa a gengiva inchada, vermelha, sangrando e pode levar ao amolecimento e perda dos dentes. Essa é uma doença muito comum e é causada por bactérias (germes) da boca que vivem ao redor dos dentes e gengiva. As células da gengiva apresentam entre outras coisas, duas proteínas diferentes: a proteina PAR1 e a proteina PAR2, que podem estar associadas com a doença da gengiva. O objetivo desta pesquisa é avaliar se o diabetes mellitus do tipo 2 altera o funcionamento dessas proteínas.

Serão realizados: exame gengival, que visa saber a condição de sua gengiva; orientação de higiene bucal e o tratamento periodontal, que é a raspagem dos

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