Tayland

Os testes comportamentais foram utilizados para avaliar a ontogenia dos reflexos neonatais, fornecendo informações sobre o desenvolvimento físico e psicomotor, bem como a função e/ou processamento sensorial. Os testes foram conduzidos em sala silenciosa e preparada para esta finalidade. Os protocolos utilizados foram: correção da posição (surface righting), recuo do abismo (cliff

avoidance), comportamentos de nado, incluindo direção do nado (swimming

direction) e ângulo da cabeça (head angle), e imobilidade dorsal (dorsal immobility). Os testes foram aplicados nos dias 6, 8, 10, 12 e 14. A tabela abaixo resume os protocolos aplicados e os escores comportamentais. Cada método foi realizado de acordo com Fox (1965) e explicado com mais detalhes a seguir.

Tabela 1. Testes de avaliação da ontogenia dos reflexos, seus objetivos, e escores utilizados em camundongos C57BL/6J selvagens submetidos à desnutrição por separação materna prolongada.

TESTE OBJETIVO ESCORE

Correção da posição Movimento coordenado Maturação subcortical

Tempo demandado para retorno à estação Recuo do abismo Percepção exteroceptiva

Resposta locomotora

Tempo de recuo da borda do precipício Comportamentos de nado Desenvolvimento de navegação Desenvolvimento locomotor

Habilidade para nadar, direção, ângulo da cabeça e movimento dos

membros Imobilidade dorsal Influência do sistema

dopaminérgico (aprendizagem e

sensibilização)

Tempo de reação após ser suspenso da

plataforma

4.4.1. Correção da posição (surface righting)

No teste de correção da posição o animal é colocado em decúbito dorsal sobre uma superfície plana e lisa, e contido com auxílio de uma pinça de dissecção adaptada (com material não traumatizante na ponta). Em seguida a contenção é removida e faz-se a avaliação do tempo gasto para retorno à estação, com os quatro membros apoiados na superfície (FOX, 1965). Com auxílio de um cronômetro digital (Mark1®, EUA), foram utilizados os seguintes escores: β = para retorno ≤ 1 s; 1 = retorno > 1 s e ≤β s; 0 = retorno >2 s (Figura 09).

Figura 9. Sequência de desempenho no teste comportamental de correção da posição em camundongo C57BL/6J selvagem submetido ao estresse nutricional por separação materna prolongada.

(A) animal é colocado em decúbito dorsal sobre uma superfície plana e lisa, contido com auxílio de uma pinça de dissecção adaptada (com material não traumatizante na ponta). (B) contenção removida para avaliação do tempo gasto para retorno à estação. (C) animal em estação com os quatro membros apoiados na superfície.

4.4.2. Recuo do abismo (Cliff avoidance)

Neste procedimento o animal é colocado sobre uma plataforma elevada de 10 cm acima de uma superfície plana. Os membros anteriores e focinho do animal são posicionados para fora da borda, de modo que a linha da borda da plataforma fique imediatamente atrás da linha imaginária traçada entre as órbitas oculares. O teste avalia a latência do reflexo em duas fases, ou seja, o tempo que o animal leva para

recuar do precipício e o tempo que ele se estabiliza, girando o corpo até que seu eixo longitudinal fique paralelo à borda da plataforma elevada (FOX, 1965). A pontuação para este teste foi conferida da seguinte maneira: 0 = sem resposta, latência > 60 s; 1 = resposta < 15 s; 2 = resposta <10 s; 3 = resposta < 5 s (Figura 10).

Figura 10. Sequência de desempenho no teste comportamental do recuo do abismo em camundongo C57BL/6J selvagem submetido ao estresse nutricional por separação materna prolongada.

(A) e (B) animal colocado sobre plataforma elevada de 10 cm com membros anteriores e focinho posicionado para fora da borda, de modo que a linha da borda da plataforma fique imediatamente atrás da linha imaginária traçada entre as órbitas oculares. A avaliação da latência do reflexo em duas fases, ou seja, o tempo que o animal leva para recuar do precipício (C) e o tempo que ele se estabiliza, girando o corpo até que seu eixo longitudinal fique paralelo à borda da plataforma elevada (D).

4.4.3. Comportamentos de nado (Swimming behaviors)

Neste teste, o animal é colocado em um tanque com a temperatura da água mantida em 27 ± 1 ºC. O comportamento durante o nado é avaliado de acordo com a direção e tipo de movimento, sendo classificado em: 3= reto; 2 = em círculo; e 1 = flutuando. O ângulo de cabeça (head angle) é avaliado da seguinte maneira: 4 = orelhas fora da água; 3 = orelhas parcialmente fora da água; 2 = nariz e parte superior da cabeça fora da água; e 1 = incapaz de sustentar a cabeça fora da água. Os movimentos dos membros são classificados em: 1 = todos os quatro membros utilizados; ou 2 = apenas os membros posteriores utilizados (Figuras 11, 12 e 13). Após os testes, os animais foram gentilmente secados com papel toalha e devolvidos às gaiolas (FOX, 1965).

Figura 11. Sequência de desempenho no teste de comportamento de nado em camundongo C57BL/6J selvagens submetido a estresse nutricional por separação materna prolongada mostrando comportamento de nado em círculo.

(A) animal colocado em tanque com temperatura da água mantida em 27 ± 1 ºC. (B) Observar o movimento de rotação do eixo corporal em 90º em comparação com a posição inicial. (C) e (D) animal repete a rotação do eixo corporal sempre para a mesma direção (esquerda), configurando o movimento circular.

Figura 12. Sequência de desempenho no teste de comportamento de nado em camundongo C57BL/6J selvagens submetido ao estresse nutricional por separação materna prolongada mostrando comportamento de nado reto.

(A) animal colocado em tanque com temperatura da água mantida em 27 ± 1 ºC. (B) e (C) observar o movimento exploratório configurando o comportamento de nado reto.

Figura 13. Sequência de desempenho no teste do ângulo da cabeça (head angle) no comportamento de nado em camundongo C57BL/6J selvagens submetido ao estresse nutricional por separação materna prolongada.

(A) animal colocado em tanque com temperatura da água mantida em 27 ± 1 ºC. (B) início do movimento natatório com dificuldade de sustentar a cabeça fora da água e utilização dos quatro membros para execução do movimento de nado.

4.4.4. Imobilidade dorsal (Dorsal immobility)

Para avaliar este comportamento, o animal é suspenso pelo dorso até aproximadamente 10 cm acima de uma superfície plana. O procedimento é realizado com auxílio de uma pinça adaptada (com material não traumatizante na ponta) de maneira que não machuque ou cause lesões no animal. A avaliação é feita cronometrando o tempo de latência até o início da movimentação de saída, que é manifestada através do movimento utilizando os quatro membros (Figura 14) (FOX, 1965).

Figura 14. Sequência de desempenho no teste comportamental de imobilidade dorsal (dorsal immobility) em camundongo C57BL/6J selvagens submetido a estresse nutricional por separação materna prolongada.

(A) animal suspenso pelo dorso 10 cm acima de uma superfície plana. (B) avaliação do tempo de latência da sensibilidade manifestada através do movimento dos 4 membros.