Sarı Kantaron İçermeyen Boş Jelin Hazırlanması

İçinde viskozite arttırıcı madde olarak %2 hidroksi propil selüloz (HPMC) bulunan pH 5 asetat tamponu hazırlanmıştır.Saklama koşullarının uygunsuzluğunu ortadan kaldırmak için düzenli aralıklarla hazırlanarak saklama kaplarına alındı.

Jel

Jeller küçük katı madde veya çözünmeyen parçacıklarının sıvı ortamda dağılması ile oluşmuşlardır. Jeller küçük inorganik partiküllerin süspansiyonu veya aralarına su molekülü girmiş büyük moleküllerin oluşturduğu yarı katı sistemler olarak tanımlanmaktadır. Kolloidal anorganik partiküller jel yapısı içinde üç boyutlu ağ oluştururlar. Doğal ya da sentetik polimerler olan büyük moleküller ise birbirlerinin zincirleriyle temasta olarak jel yapısını oluştururlar. Jeller sıvağlarına göre veya tek fazlı ya da iki fazlı olmalarına göre sınıflandırılabilmektedir. Jel oluşturan ve jel hazırlanmasında kullanılan doğal, sentetik ve yarı sentetik maddeler vardır. Proteinler (kollojen, jelatin), polisakkaritler (aljinatlar, agar, karragen, kitosan), yarı sentetik polimerler (sodyum karboksimetilselüioz (Na-CMC), metil selüloz (MC), hidroksipropilselüloz (HPC) ve hidroksipropilmetilselüloz (HPMC) ve sentetik polimerler (polivinil alkol (PVA), poliakrilik asit kopolimerleri (Carbopol karbomer), poliakrilamitler, poloksamerler) kullanılarak jel oluşturulabilir. Jellerin tedavide kullanılış amaçları; jellerde bulunan suyun buharlaşması ile ciltte serinletici bir etki oluşması, cilde iyi yapışan ve koruyucu etkisi olan film tabakası meydana gelmesi, kolay uygulanırlar ve tedavi tamamlandığı zaman kolayca yıkanarak ciltten uzaklaştırılması ve etkin maddelerin daha hızlı serbeştleşmesini sağlamasıdır [127-129].

3.1.2. Deneklerin Gruplandırılması ve Deneysel Yöntem

Deneklerin Gruplandırılması

Deneylerlerde, 200-300 gr. ağırlığında sağlıklı, dişi-erkek Wistar albino sıçanlar kullanıldı. Deney hayvanları, normal gece gündüz siklusunda, yaşadığı ortama adaptasyonu için en az enerji harcayarak uyum sağladığı optimal sıcaklıkta (20-22 °C), hayvanların fizyolojik faaliyetlerinin bozulmamaları için gürültüden uzak, temiz bir ortamda kafeslerde gözetim altında tutuldu. Deney hayvanları deney sürecinde, gelişimleri için ihtiyaç duydukları iyonları alabilmesi için çeşme suyu ve standart (ticari) yapay fare yemi ile ad libitum beslendi (Şekil 21).

Şekil 21: Deney hayvanlarının kafes görünümleri

Çalışma 6 grup olarak tasarlanmıştır;

Tablo 7: Çalışma grupları

Grup 1 İntakt kontrol grubu Herhangi bir işlem

uygulanmadı

n=7

Grup 2 Yanık-kontrol grubu %5 NaOH/0.2 ml

uygulanarak koroziv yanık oluşturuldu ancak herhangi bir tedavi uygulanmadı

Grup 3 Yanık-Kantaron grubu 50 mg/kg/gün H.perforatum oral formulasyonu uygulandı

n=7

Grup 4 Yanık-Jel grubu Koroziv yanık

oluşturulduktan sonra 50 mg/kg/gün dozunda boş jel uygulandı

n=7

Grup 5 Kontrol-Kantaron grubu Koroziv yanık

oluşturulmayan gruba 50 mg/kg/gün dozunda H.perforatum oral formulasyonu uygulandı n=7

Grup 6 Kontrol-Jel grubu Koroziv yanık

oluşturulmayan gruba 50 mg/kg/gün dozunda boş jel oral olarak uygulandı

n=7

Toplam n=42

Alkali (%5 NaOH/0.2 cc) koroziv olarak kullanılacak kimyasallar hazırlandı. Hazırlanacak kimyasal madde içeriği ve uygulama yönteminde daha önce yapılan bir başka çalışma esas alındı [130].

Deneysel Yöntem

Bu projede acil kliniğe kaza veya suicidal amaçlı alımlarda başvurular, ağızdan alım sebebiyle oldugu için yanık modeli ağız yoluyla yapıldı. Sıçan ağzından girilip servikal özofagus seviyesinde sonlandırılan feeding tüp ile koroziv maddeler ve diğer ajanlar verildi (Şekil 22).

Analjezileri için işlemden önce Wistar albino cinsi, ortalama 200-300 gr ağırlıkta, erişkin her iki eşeyden sıçanlarda periton içine 0,8-1,3 ml/kg [130] i.p. dozda Ketamin verilerek yutkunma fonksiyonlarını kaybetmeyecek şekilde hafif-orta sedoanaljezi sağlandı ve

5 dakika sonra deneysel aşamaya geçildi. Daha sonra gruplarda planlanan işlemler her bir gruba ayrı ayrı sırası ile gerçekleştirildi.

Şekil 22: İnfant feeding sonda görünümü

Bu kimyasal maddeler (%5 NaOH/0.2 ml) feeding sonda ile servikal özofagus hizası itibariyle verilerek 1.yanık modeli oluşturuldu. Acil servise başvuru süresi göz önüne alınarak ortalama 20 dk sonra deney grublarına 50 mg/kg/gün dozunda, H. Perforatum’un oral süspansiyon formu verildi [14, 131, 132]. Oral süspansiyon miktarının ve bioyararlanımının etkin olması için Feeding sonda kullanıldı, sonda içindeki ölü boşluk hesaba katıldı. Özofagus ve mide yanığı oluşturulan deney hayvanlarına günde 1 defa olmak üzere 14 gün boyunca bu işlem uygulandı (Şekil 23).

Ayrıca analjezi amacıyla hayvanların içme suyunun içine 2 mg/ml olacak şekilde parasetamol eklendi [126].

Acile başvuru süresi açısından akut dönemde (ilk 3-4 gün) gerçekleşen nekroz ve perforasyonu engellemek, subakut dönemde (ilk 2 hafta) oluşacak nekrotik dokuların neovaskülarizasyon fazına geçişine yardımcı olmak ve bu sayede kronik dönemde oluşacak ülserasyon, fibrozis, striktürün önüne geçmek için H.perforatum’un koroziv yanıklarda etkisini araştırdık [133, 134].

15.gün hayvanlar diseksiyon için hazırlandı. Çalışma sonunda tüm deney hayvanlarının sakrifikasyonları sonrasında, median laparotomi insizyon yerinden girilerek, ulaşılan özofagogastrik bileşkenin 3 cm proksimalinden, mideden ve karaciğerden, biyokimyasal ve histopatolojik değerlendirme için doku örnekleri alındı (Şekil 24). Yanık oluşturulup 14.günden hemen sonra yani 15.gün de alınan doku örneklerinden biyokimyasal ve histopatolojik değerlendirme yapıldı (Şekil 25). Hypericum perforatum’un etkinliği

histopatolojik ve biyokimyasal testlerle değerlendirildi, sitotoksisitesi ise in vitro sitotoksisite testleri kullanılarak ölçüldü.

Şekil 24: Diseksiyon aşamalarının sıralı görünümü

Biyokimyasal parametrelerin incelenmesi için özofagus ve mideden alınan doku örnekleri homojenizasyon tampon içerisinde (50 mM fosfat tampon, pH:7.4) mekanik homojenizatör (Heidolph Silent Chrusher M) yardımı ile buz üzerinde homojenize edildi (Şekil 25,26).

Şekil 25: Diseksiyon sonrası organların görünümü

Histopatolojik değerlendirme için alınan biyopsi materyali %4 formaldehit ile fikse edildikten sonra, histolojik rutin takip sonrasında bloklardan alınan 5 µm lik kesitler hemotoksilen-eozin(H&E) boyasının yanısıra bağ dokusu değişikliklerini değerlendirmek amacıyla Mallory Azan Boyama ile boyandı. Histopatolojik değerlendirme bir histolog tarafından grupların içerikleri bilinmeden ışık mikroskobu altında X10, X20, X40 lük büyütmelerde değerlendirildi [135]. Özofagus duvar kalınlığı ve lümen çapı belirlenerek stenoz indeksi hesaplandı [136]. Özofagus ve mide incelemeleri sonucunda histopatolojik skor verildi.