INVESTIGATION OF SOME GENES RELATED WITH IMMUNE MECHANISM BY REAL-TIME EXPRESSION ANALY- SIS METHOD IN PERIPHERAL BLOOD MONONUCLEAR CELLS (PBMC) Esma Gamze AKSEL Erciyes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü Veteriner Zootekni Anabilim Dalı Doktora Tezi, Temmuz 2019 Danışman: Prof. Dr. Bilal AKYÜZ Erciyes University, Graduate School of Health Sciences, Department of Animal Breeding and Husbandary PhD Thesis, July, 2019 Supervisor: Prof. Dr. Bilal AKYÜZ ÖZ
Gelecekte doğal kaynaklarda azalma ve küresel ısınma sebebiyle entansif hayvan yetiştiriciliğinden ekstansif hayvan yetiştiriciliğine doğru yönelim olacağı düşünül- mektedir. Dolayısıyla ekstansif hayvancılığın sürdürülmesi için yaşadığı bölgelere adapte, olumsuz çevre koşullarına dayanıklı ve hastalıklara dirençli yerli hayvan ırklarının önemi giderek artacaktır. Bu çalışmada Akkaraman ırkı kuzulara bağışıklık sistemini uyaran Lipoteikoik asit (LTA, 50 μg/kg), Lipopolisakkarit (LPS, 20 μg/kg) ile LTA-LPS karışımı (50 μg/kg + 20 μg/kg) ve PBS (kontrol, 250 μl) intranazal yolla uygulanmıştır. Aynı bakım ve besleme şartlarında bulunan toplam 28 baş Akkaraman ırkı (üç aylık) kuzu LTA (n=7), LPS (n=7), LTA+LPS (n=7) ve kont- rol grubu (n=7) olacak şekilde dört gruba ayrılmış- tır. Uygulama sonrası 24. saat ve 7. günde izole edilen periferal tek çekirdekli kan hücrelerinde (Peripheral blood mononuclear cells, PBMC) immun yanıtın oluşumunda görev alan TLR/, TLR4, MyD88, TRAF6, TNF-α, IL-1ß, IL-6, IL-10, NF-κß, IFNγ genlerinin ve house-keeping genlerden GAPDH ve ß-actin’e göre ekspresyon farklılıklarının incelen- mesi hede%lenmiştir. Yapılan qRT-PCR analizi sonucunda; 24. saatte izole edilen PBMC hücrelerine ait mRNA eksp- resyon analizinde tüm gruplarda TLR/ [LPS (P<0.05) ve LTA+LPS (P<0.01)] TLR0 [LTA+LPS (P<0.05)], TNF-α, IL- 10 [LTA+LPS (P<0.05)] ve IFNγ genlerine ait ekspresyon verilerinde artış belirlenirken bu genlerin 7. gün ekspres- yon seviyelerinde azalış gözlenmiştir. Elde edilen sonuçla- ra göre Akkaraman ırkı kuzularda intranazal yolla uygula- nan LTA ve LPS dozlarının ayrı ayrı ve bir arada uygulan- masının özellikle TLR/ ve TLR0 gen ekspresyonunda 24. saatte artış sağladığı dolayısıyla planlanan in vivo deneysel uygulamanın koyun PBMC’lerini başarılı bir şekilde etkin- leştirdiği belirlenmiştir. Koyun ırkları arasında hastalıkla- ra dirençliliğin belirlenmesi için farklı ırkların çalışıldığı daha fazla çalışmaya ihtiyaç duyulmaktadır. Yapılan de- neysel uygulama dozları farmakoloji ve mikrobiyoloji alan- larında planlanacak in vivo ve in vitro ilaç ve aşı geliştiril- mesi çalışmalarına yardımcı olabilecektir. Ayrıca elde edi- len sonuçlara göre hem çiftlik hayvanlarında görülen solu- num sistemi enfeksiyöz hastalıkları yönünden hem de koyunun biyomodel hayvan olması bakımından insan ile ilgili planlanacak çalışmalara da katkı sağlayabileceği so- nucuna varılmıştır.
ABSTRACT
It is expected that there will be a shift from intensive animal husbandry to extensive animal husbandry due to the decrease in natural resources and global war- ming in the future. Therefore, in order to maintanence of extensive animal husbandry will be achieved with indigenous breeds that are resistant to disease, adapted to their region and adapted adverse conditions. In this study, a mixture of Lipoteichoic acid (LTA, 50 μg/kg), Lipopolysaccharide (LPS, 20 μg/kg), LTA+LPS mix (50 μg/kg 20 μg/kg) and PBS (control, 250 μl) was intrana- sally administered to Akkaraman breed lambs. A total of 28 domestic Akkaraman breed lambs (three month years) with the same feeding and raising conditions were divided into four groups as LTA (n=7), LPS (n=7), LTA+LPS (n=7) and control group (n=7). The aim of this study was to investigate the expression levels of
TLR2, TLR4, MyD88, TRAF6, TNF-α, IL-1ß, IL-6, IL-10, NF-κß, IFNγ genes, which were detected on the immune
mechanism pathway in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) isolated at 24th hour and 7th day after the administration of the mixture, compared to GAPDH and ß-Actin house-keeping genes. As a result of qRT- PCR analysis, in mRNA expression analysis of PBMC cells isolated at 24th hour, there was an increase in
TLR2 (LPS (p¬4.49) ve LTA∙ LPS (p¬4.45), TLR4
(LTA+LPS (p<0.05), TNF-α, IL-10 (LTA+LPS (p<0.05) and IFNγ genes in all groups. Also expression values decreased 7th day in this genes. According to the re- sults, intranasal administration of LTA and LPS in Ak- karaman lambs were effective especially in TLR2 and TLR4 genes and therefore it was determined that in vivo experimental study activated sheep immune sys- tem. More studies with different breeds are needed to determine disease resistance among sheep breeds. Experimental application doses may help in the deve- lopment of in vivo and in vitro drug and vaccine studies in the %ields of pharmacology and microbiology. In ad- dition, according to the results obtained, it was conclu- ded that both the respiratory system diseases seen in farm animals and the sheep being a biomodel animal could contribute to planned human studies. Anahtar kelimeler: Akkaraman kuzu; lipopolisakkarit; lipote- ikoik asit; bağışıklık, periferal tek çekirdekli kan hücresi.
Keywords: Akkaraman lambs; lipopolysaccaride; lipoteichoic
Sağlık Bilimleri Dergisi (Journal of Health Sciences) 2019 ; 28 (2) DENEYSEL ETİLEN GLİKOL ZEHİRLENMESİ OLUŞTURULAN RATLARDA KALP KASI HASARININ ARAŞTIRILMASI INVESTIGATION OF HEART FAILURE IN THE RATS THAT HAVE EXPERIMENTAL ETHYLENE GLYCOL TOXICITY Burak DOĞAN Erciyes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü Veteriner İç Hastalıkları Anabilim Dalı Yüksek Lisans Tezi, Haziran 2019 Danışman: Prof. Dr. Vehbi GÜNEŞ Erciyes University, Graduate School of Health Sciences Department of Veterinary Internal Diseases M.Sc. Thesis, June 2019 Supervisor: Prof.Dr. Vehbi GÜNEŞ ÖZ
Bu çalışmanın amacı, deneysel etilen glikol (EG) toksi- kasyonu oluşturulan ratlarda kalp kası oluşabilecek yaptığı tahribatın boyutunu araştırmaktır. Bu amaçla, Erciyes UDniversitesi Deneysel Araştırmalar Uygulama ve Araştırma Merkezinde (DEKAM) bulunan Sprague Dawley cinsi 30 adet erkek ve dişi rat çalışma materya- lini oluşturmuştur. Tüm ratlar rastgele üç gruba ayrıla- rak gastrik gavajla EG verilerek toksikasyon oluşturul- du. Birinci gruba 6000 mg/kg EG serum %izyolojikle (SF) sulandırılarak verilirken, ikinci gruba 3000 mg/kg EG verildi. Kontrol amacıyla SF üçüncü gruptaki ratlara verildi. Kan örnekleri 0 ve 72. saatte kuyruk venasın- dan 96. saatte alınan örnekler ise doğrudan kardiyak punksiyonla alındı. Toksikasyon sonucu genel durumu bozulan hayvanlarda EKG ölçümleri yapılmıştır. Etilen glikol verildikten yaklaşık 5 saat sonra idrar örnekleri alınarak sedimentasyon analizleri gerçekleştirildi. Ayrı- ca 96. Saatte nekropsi yapılarak ratların kalpleri kardi- yak histopatolojik analizler için alındı. Yapılan biyokim- yasal analizlerde bazı parametrelerin toksikasyon oluş- turulan ratlarda saatler ilerledikçe anlamlı şekillerde arttığı (üre, Laktat Dehidrogenaz, glikoz, kreatinin), kalsiyum düzeylerinin ise azaldığı görülmüştür. Kalp biyomarkırlarından cTn-T ve CK-MB seviyeleri toksi- kasyon oluşturulan gruplarda kontrol grubuna göre farklı seyrettiği görülmüştür. Ancak cTn-I seviyelerinde ise bir farklılık görülmemiştir. Ayrıca idrar analizlerin- de Ca-oksalat kristalleri tespit edilmiştir. Verilen doza bağlı olarak parametrelerdeki değişimler ve mortalite düzeylerinin daha önce yapılan çalışmalarla benzerlik gösterdiği görülmüştür. Bu çalışmada hede%lendiği şe- kilde ve elde edilen bulgular ışığında EKG ve histopato- loji bulguları alınan miktarlara göre değişmekle birlikte EG zehirlenmesinde orta dereceli bir miyokard hasarı- nın oluştuğu sonucuna varılmıştır.
ABSTRACT
The aim of this study was to investigate the extent of the destruction due to toxicity in heart muscle and blood biomarkers in rats with experimentally induced ethylene glycol (EG) toxication. For this purpose, 30 male and female rats of Sprague Dawley type which were found in Erciyes University Experimental Rese- arch Application and Research Center (DEKAM) formed the study material. All rats were randomly divided into three groups and given toxicity with gastric gavage. The %irst group was given 6000 mg/kg EG dilute with saline (SF), the second group was given 3000 mg/kg EG and the only saline was given at same volume with EG as control group. Blood samples were taken from the tail vein at the 0 (before EG) and 72 th hours at the 96th hour and taken directly cardiac puncture. ECG measu- rements were performed at the speci%ic time in ani- mals. This ECG %indings deteriorated as a result of toxi- cology. Urine samples were taken and sedimentation analyzes were performed approximately 5 hours after EG was given. In addition, necropsy was performed at 96 hours and the hearts of rats were taken for cardiac histopathological analysis. In biochemical analyzes, it was observed that some parameters increased signi%i- cantly in rats (urea, LDH, glucose, creatinine) and cal- cium levels decreased. cTn-T and CK-MB levels of heart biomarkers were found to be different in groups that formed toxicity compared to control group. However, there was no difference in cTn-I levels. In addition, Ca- oxalate crystals were detected in urine analysis. The changes in parameters and mortality levels were simi- lar to those of previous studies. In the light of the %in- dings obtained in this study, ECG and histopathology %indings showed that a moderate myocardial injury occurred in EG poisoning.
Anahtar kelimeler: Rat, etilen glikol, toksikasyon, gavaj, mi-
yokard, Ca-oksalat
Keywords: Rat, ethylene glycol, toxication, gavage, myo-
AKUT GASTROENTERİTLİ ÇOCUKLARDA ROTAVİRÜSÜN ÇEŞİTLİ YÖNTEMLERLE ARAŞTIRILMASI