Antibiyogram Testleri Broth Makrodilüsyon Yöntemi
•Bu yöntem deney tüplerinde gerçekleştirilir ve seri dilüsyona ihtiyaç duyar. Mikrodilüsyon testinden farkı denenen
antibiyotiklerin büyük hacimde gerçekleştirilmesidir.
•İki kat seri sulandırım sonucunda antibiyotiklerin belirli mikroorganizmalara karşı MİK değerleri belirlenebildiğinden
kantitatif sonuç alınabilir.
•Disk difüzyon testine göre daha hassas bir test olmasına karşın
daha çok iş gücü gerektiren bir yöntemdir.
Antibiyogram Testleri
Broth Makrodilüsyon Yönteminin Uygulanışı
•Antibiyotik duyarlılığı incelenecek mikroorganizma için uygun sıvı besiyeri (Mueller Hinton Agar-MHB) hazırlanarak deney tüplerine konulur.
•18-24 saatlik sıvı mikroorganizma kültürünün bulanıklığı 0,5 McFarland olacak şekilde ayarlanır.
•Mikropipetlerle antibiyotik deney tüplerine en yüksek dozdan
başlanacak şekilde yerleştirilir. Daha sonra diğer kuyucuklara
aynı antibiyotiğin seri sulandırımı yapılır.
Antibiyogram Testleri
•Broth Makrodilüsyon Yönteminin Uygulanışı
•Mikroorganizmalar mikropipetler ile deney tüplerine ekilir.
•Deney tüpleri 37 ºC’de 18-24 saat boyunca inkübe edilir.
•İnkübasyon sonrasında, deney tüplerindeki gelişim gözle
ölçülür. Ölçülen değer CLSI yada EUCAST gibi kurumların
bildirmiş olduğu standart değerlere göre karşılaştırılarak
mikroorganizmanın o antibiyotiğe karşı duyarlı ya da dirençli
olduğu belirlenir.
Antibiyogram Testleri
•Broth Makrodilüsyon Yönteminin Uygulanışı
•Bu deneyde hiç antibiyotik içermeyen fakat mikroorganizma ve besiyeri içeren tüpler pozitif kontrol olarak kullanılır.
•Benzer şekilde antibiyotik ve besiyeri içeren fakat mikroorganizma içermeyen tüpler negatif kontrol olarak
kullanılır.
•Pozitif kontrolde üreme olmaması ya da negatif kontrolde
üreme olması durumunda deney tekrar edilir.
Antibiyogram Testleri E-test
E-testi, disk difüzyon ve mikrodilüsyon testlerinin özelliklerini tek bir araya toplayan ticari bir testtir.
Bu metotta belirli konsantrasyonlarda antibiyotik emdirilmiş şeritler kullanılır.
Şeritlerdeki antibiyotiklerin yoğunluğu iki kat artacak şekilde ayarlandığından kantitatif sonuç almak ve MİK değerini
saptamak mümkündür.
Yöntemin uygulanışı disk difüzyon yöntemi ile benzerdir.
Antibiyogram Testleri E-testnin uygulanışı
•Antibiyotik duyarlılığı incelenecek mikroorganizma için uygun katı besiyeri (Mueller Hinton Agar-MHA) hazırlanarak petrilere dökülür.
•18-24 saatlik sıvı mikroorganizma kültürünün bulanıklığı 0,5 McFarland olacak şekilde ayarlanır.
•Sıvı kültüre eküvyon çubuk daldırılıp iyice eminceye kadar bekletilir ve eküvyon çubuktaki kültür petri yüzeyine 120 derecelik açıyla sürülerek mikroorganizma ekimi gerçekleştirilir.
Mikroorganizmaların tüm petriye yayılması için işlem en az 6 kez
tekrar edilir.
Antibiyogram Testleri E-testnin uygulanışı
•Etkisi belirlenecek E-testi şeritleri, ekim yapılmış petri yüzeyine, petri boyutuna göre değişecek şekilde yerleştirilir ve hafifçe pens yardımıyla üstüne bastırılır.
•Petri kapları, mikroorganizmanın gelişeceği sıcaklık ve sürede (37 ºC, 18-24 saat) inkübe edilir.
•İnkübasyon sonrasında, petri yüzeyinde, şerit etrafında oluşan
şeffaf inhibisyon zonları kontrol edilir. Üremenin olmadığı en
düşük konsantrasyon MİK olarak belirlenir.
Antibiyogram Testleri
Uygulama kolaylığı İş yükü Hassasiyet
Disk Difüzyon Kolay Az Düşük
Mikrodilüsyon Orta zorlukta Orta Yüksek
E-testi Kolay Az Orta-yüksek
