STERİLİZASYON ve CERRAHİ ASEPSİ. Dr.Öğr.Üyesi. Veysi Hakan Yardımcı

STERİLİZASYON ve

CERRAHİ ASEPSİ

Dr.Öğr.Üyesi. Veysi Hakan Yardımcı

 STERİLİZASYON YÖNTEMLERİ

Dr.Öğr.Üyesi Veysi Hakan Yardımcı

Sterilizasyon yöntemleri, sterilizatörlerin etki mekanizmasına ve steril edilecek malzemelerin yapısına göre değişir.

Sterilizasyon yöntemleri;

1- Süzme ile sterilizasyon 2- Işınlarla sterilizasyon 3- Isı ile sterilizasyon

4- Kimyasal maddelerle sterilizasyon

Süzme ile (Filtrasyonla) Sterilizasyon;

Sıvı veya gaz ortamında bulunan mikroorganizmaları süzmek suretiyle süzüntüye geçmelerini önleyerek bu suretle sıvıların veya gazların sterilizasyonudur.

Filtrasyon ile sterilizasyon; ısı ve kimyasal etmenlerle bozulan besiyeri/besiyer maddeleri

ilaçlar serum

vitaminler

mikrobiyolojik analiz maddeleri vb.

maddelerin sterilizasyonunda kullanılır.

Bu amaç için kullanılan aletlere süzgeç (filtre) adı verilir.

Çeşitli tipte süzgeçler vardır.

Bunlar süzme mekanizmalarına göre iki çeşittir:

1- Adsorpsiyon

2- Mekanik tutma

Süzme (Filtrasyon)

Süzme: akıcı bir sistemden, çözünmemiş parçacıkların ayrılması işlemidir.

Filtre: Çözünmemiş parçaları tutan kısım.

Artık (Kalıntı) : Filtre yüzeyinde/içinde tutulan kısım.

Filtre keki : Yüzeydeki artık kitlesi.

Süzüntü (Filtrat) : Parçacıklardan ayrılmış akıcı karışım

Süzme işlemi başlıca;

•

• Berraklaştırma (1-50 μm ) %1’den az katı partiküller için

• Filtre yüzeyinde tutulacak parçacıkların büyük olması süzmeyi kolaylaştırır.

• Süzmeyi hızlandırmak amacı ile basınç ya da vakum uygulaması gereklidir.

•Süzülecek sıvının viskozitesinin artırılması, süzme hızını arttırır.

• Süzme işlemi sırasında filtre yüzeyinde biriken tabaka kalınlığı, süzme hızını azaltır. Bu nedenle filtre yüzey

alanının arttırılması gerekir.

Süzmenin Mekanizması:

1- Yüzeyde tutulum – Yüzeysel süzme 2- Çarpma ve çökme – Impingement 3- Elektrostatik çekim kuvetleri

Süzmenin Mekanizması:

Filtre Çeşitleri:

1- Yüzeysel süzme yapan filtreler

2- Derinlemesine süzme yapan filtreler 3- Membran filtreler

Yüzeysel süzme yapan filtreler:

- Dokuma (woven) ile hazırlananlar pamuk, naylon

- Dokunmadan (nonwoven) hazırlananlar keçe, bonded filtre, filtre kağıdı

Yüzeysel süzme yapan filtreler:

Derinlemesine süzme yapan filtreler:

Cam, metal, seramik toz, bazı polimerlerin basınç altında sıkıştırılmasıyla elde edilir.

Membran filtreler:

• Selüloz esterleri (selüloz asetat/nitrat), poliamit poliester PVC

naylon polikarbonat polipropilen teflon (politetra floroetilen, PTFE)

Membran filtrenin gözenek çapına bağlı

olarak tutabilecekleri parçacık türü:

Ultrafiltre :

• Gözenek çapı; 0.001-0.1 μm arasında olan membran

filtrelere, ultrafiltre denir .

• Filtrenin fiziksel direncini

artıran destek tabakası ile

birlikte üretilirler.

Adsorpsiyon mekanizması ile mikroorganizmaları tutan süzgeçler

Süzme esnasında bakterilerin elektrikliğinin süzgeç elektrikliğine göre daha negatif olması

nedeniyle bakteriler, aralıkların duvarlarına adsorbe olarak tutulur ve süzüntüye geçmez.

Adsorpsiyon mekanizması ile mikroorganizmaları tutan süzgeçler

Bu tür filtrelerde süzüntünün geçtiği açıklıklar düzensiz ve birbirine eşit olmayan büyüklüklerde oldukları gibi

bakteri boyutlarından daha da büyüktür.

Adsorpsiyon mekanizması ile mikroorganizmaları tutan süzgeçler

Berkefeld, Pasteur, Chaberiand ve Seitz filtreleri

mikroorganizmaları adsorpsiyon mekanizması ile tutan filtrelerdir.

Mikroorganizmaları mekanik tutma yolu ile süzebilen süzgeçler

Aralıklarının açıkları (por) çok küçük olan kollodyum, sellüloz esterleri, polivinil ve benzeri maddelerden yapılmış disk

şeklindeki ultra filtreler ve membran filtreler vardır.

• Bu filtrelerin açıklıkları 0,001 ile 0.1 mikrometre arasında olur.

Mikroorganizmaları mekanik tutma yolu ile süzebilen süzgeçler

•Yaklaşık 0.1 mm kalınlığında bir kağıt görünümündeki bu süzgeçler çeşitli çaplarda kesilmiş daire biçimindedir.

•Özel silindir şeklindeki aygıtlara konularak ve otoklavda ya da etilen oksit ile sterillenerek kullanılır.

•Bunlar açıklıklarının büyüklüklerine göre çeşitli büyüklükteki bakteri ve virüsleri tutar.

Mikroorganizmaları mekanik tutma yolu ile süzebilen süzgeçler

• En çok kullanılan türleri selüloz asetat ve sellüloz nitratdan yapılanlardır.

• Günümüzde daha çok bu nitelikteki filtreler kullanılmaktadır.

Membran filtre ile sterilizasyon uygulaması

•Filtreler, takılı bulundukları aparatla birlikte

kullanılmadan önce kâğıtlara sarılarak otoklav veya kuru hava ile sterilize edilmelidir.

•Çatlak ve porları tıkalı filtreler kullanılmamalıdır.

Membran filtre ile sterilizasyon uygulaması

•Çalışma sırasında bunzen beki yakılır.

•Filtre desteği bek alevinden geçirerek steril edilir.

•Huni kapağı alevden geçirilerek kapatılır.

•Filtre hunisinin alt kısmı bek alevinden geçirilerek yerine takılır.

Membran filtre ile sterilizasyon uygulaması

Membran filtre ile sterilizasyon uygulaması

•Steril paketlerdeki membran filtre poşeti el ile temas etmeden açılır.

Membran filtre ile sterilizasyon uygulaması

• Membran filtre steril pensle tutularak filtre destek kısmına konulur. Huni, huni tutucuya yerleştirilir.

• Steril edilecek sıvı huni içine konur. Vakum pompası açılır.

• Filtrasyon işlemi takip edilip işlem tamamlandıktan sonra vakum musluğu kapatılır.

• Vakum pompası durdurulur, çalışma alanı temizlenir.

Membrane Filtration video

Filtrasyonla sterilizasyonda süzme hızını etkileyen faktörler

•Kullanılan filtrenin;

gözenek çapı boşluk oranı

yüzey alanı

Süzülecek maddeye uygulanacak üst ve alt yüz arası basınç farkı Süzülen sıvının viskozitesi (yoğunluğu)

Filtrasyonla sterilizasyon denetlenmesi/kontrolü

• Süzüntünün incelenmesi: Süzüntüden alınan örnekler,

birkaç aerop ve anaerop ortama ekilerek 2-7 gün içinde bir mikroorganizmanın üreyip üremediği incelenir.

• Bu örneklerde bakteri üremesi sterilizasyon olmadığının göstergesidir.

• Süzüntü ikinci bir defa disk şeklindeki bir süzgeçten

süzülür, ilk süzmede süzüntüye bakteri karışmış ise bunlar ikinci süzgeçte tutulur.

• Bu süzgeç steril koşullarda penset ile alınır ve

ortasından ikiye bölünerek yarısı bir aerop, diğer yarısı bir anaerop besiyerine atılır.

• 2-7 günlük inkübasyon sonunda her ikisinde de bakteri ürememelidir.

Köpürme noktasının saptanması:

• Disk şeklindeki belli aralıklı süzgeçlerin denetiminde uygulanır.

• Deneyin süzme işleminden önce ve sonra yapılabilmesi bakımından üstünlüğü vardır.

Köpürme noktasının dayandığı temel şudur:

• Süzgeçten steril saf su süzülür.

• Süzme bittikten sonra süzgecin açıklıklarında bir miktar su takılı kalmıştır.

• Pistonlu bir silindire takılıp üstten hava basıldığında ya da alttan emildiğinde kılcallık özelliği nedeni ile süzgeç aralığına takılmış olan su bir noktaya kadar yerinden atılamaz.

Köpürme noktasının dayandığı temel şudur:

• Basınç arttırılınca su yerinden ayrılırken köpürme görülür.

• Bu köpürme noktası anındaki basınç, süzgeç aralıklarının çapı ile ters orantılıdır.

• Yırtılmış ve bozulmuş süzgeçlerde bu direnç azalır ya da kaybolur.

Işınlarla Sterilizasyon;

• Isı ve diğer yöntemlerle steril edilemeyen ortamların sterilizasyonunda ışınlardan yararlanılır.

• Kullanım alanı sınırlıdır.

• Işınların çevreye de etkili olmaları nedeniyle sınırlı olarak ve önlem alınarak uygulanması gerekir.

Mikroorganizmalar üzerine etkili iki radyasyon türü vardır;

İyonlaştırıcı ve İyonlaştırıcı olmayan.

• Gama ışınları

• Yüksek enerjili elektronlar (e-demeti)

• X-ışınları

iyonlaştırıcı radyasyon grubundadır. (1nm dalga boyu altı)

• UV ışınları iyonlaştırıcı olmayan radyasyon türüdür.

(240-280nm)

 İyonlaştırıcı radyasyon türlerinden sterilizasyon amacıyla yararlanılırken,

 UV ışınlarından (iyonlaştırıcı olmayan) sahip oldukları büyük dalga boyu ve dolayısıyla düşük enerji seviyesi

nedeniyle daha çok dezenfeksiyon amacıyla yararlanılır.

 Özel merkezlerde uygulanmaktadır.

 UV Işınları ile Sterilizasyon

• UV (ultraviole-mor ötesi) ışınların iyonize ışınların aksine radyasyon enerjileri azdır.

• Bu nedenle daha çok havayı ve yüzeyleri dezenfekte etmek için kullanılır.

• Ameliyathaneler, doku kültürü yapılan odalar,

antibiyotiklerin hazırlandığı odalar.UV ışınların kullanılabildiği yerlere örnek olarak gösterilebilir.

• Suların sterilizasyonu için de UV ışınları kullanılabilir.

UV ışınları kullanırken dikkat edilecek noktalar:

• UV kaynağı ile dezenfekte edilecek eşya arasında bir engel olmamalıdır.

•Ultraviyole ışınlarına direkt olarak çıplak gözle

bakılmamalı, bakılması gereken durumlarda ise ultraviyole ışınlarını süzen filtreli gözlüklerle bakılmalıdır.

• Gözde katarakt ve deride iritasyon yapacağından gözlükle veya cam arkasından gözlem yapılmalıdır.

• Ortam sterilizasyonu amacıyla kullanıldığı durumlarda ışın kaynağının yerleştirildiği yerin tüm ortamı gören bir noktada olmasına özen gösterilmelidir.

• Kullanma süresine dikkat edilmeli, kullanılacağı ortamdan insanlar dışarı çıkarılmalıdır.

•Lamba yakılarak kapılar kapatılır ve sterilizasyon süresi bitiminde lambalar söndürülerek bu şekilde gerektiğinde steril odaya girilir.

• Etkisi azaldığında lamba değiştirilmelidir.

• Uzun süreli kullanımlardan sonra ortam havalandırılmalıdır.

Pratikte iki şekilde kullanıldıkları görülmektedir:

1- Kabinli ekipman sterilizatörü

2- Tavana yerleştirilmiş ortam UV sterilizatörleri

Kabin içine uygulanan UV ışınlar ile ekipman sterilizasyonu gerçekleştirir.

UV lambalar ile ortam sterilizasyonu sırasında içeride insan bulunmaması gerekmektedir.

Laboratuvarlarda bu lambalar geceleri çalışma olmayan saatlerde çalıştırılır.

 X Işınları ile sterilizasyon

• Gama ışınları, beta ışınları gibi iyonize olabilen partikül ışınlar da sterilizasyon amacı ile kullanılabilse de

uygulama alanlarının sınırlı ve insan sağlığı yönünden tehlikeli olması nedeniyle çok az kullanılır.

• En büyük kullanım yerleri endüstriyel alanlardır.

 X Işınları ile sterilizasyon

• X ve gama ışınları özel jeneratörler tarafından üretilirler.

•Bu ışınların derinlere ulaşma özellikleri bulunmaktadır.

•Genellikle paketlenmiş hazır gıdaların sterilizasyonunda kullanılırlar.