Başlık: İNSAN VE SIGffi oRİJİNLİ STAFİLOKOK SUŞLARININ LATEX AGLUTİNASYON TESTİ İLE ÇABUK İDENTİFİKASYONLARI ÜZERİNDE BİR ARAŞTIRMAYazar(lar):AKAY, Ömer;USLANOĞLU, Banu;İZGÜR, Müjgan;ESENDAL, M. ÖmerCilt: 34 Sayı: 2 DOI: 10.1501/Vetfak_0000001080 Yayın Ta

A. O. Vet. Hek. Fak. Derg.

34 (2) :251-267, 1987

İNSAN VE SIGffi oRİJİNLİ STAFİLOKOK SUŞLARININ LATEX AGLUTİNAS-YON TESTİ İLE ÇABUK İDENTİFİKASAGLUTİNAS-YONLARI ÜZERİNDE BİR ARAŞTIRMA

Ömer Akay!

Banur Uslanoğlu.<

Müjgan İzgür2

M. Ömer Esenda14

Investigation on rapid identification of StaphyIococcus aureus strains from

human and bovine origin by us ing Iate", aggIutination test.

Summary: A latex agglutination test detecting dumping factor and

protein A simultaneously is recommended for rapid and reliaMe nıtine identifi-cation ~f Staph)'lococcus aurel/s.

In this stl/dj', the Iate;.;agglutination test lDas compm'ed to the conventional tube coagulase test, slide cııagulase test, DNase, TNase and protein All)' using 250 isolates of staph)'lococci strains .from human and bovine origin. Of these, both human (100 strains) and bovine (100 strains) strains were identified as Staph]lococClls aureus and the rest of them were identified as roagıılasf negative staphylococci (from human materia!r 2.'1 strail/s andfrom cows' milk 25 straiııs). Positive latex agglutination tests occured in 100 % of Staph. azmus strains from hl/man and 97

%

ı!f Staph. aurms strains from bODineorigin respectil'e(Y,

whereas 88

%

of coagulas{ negative strains from human and 96 % coagıılase negatiue strains from bOl'ine origin gave negativ{ latex tests.

Latex agglutination tests were fo/md to be JGti.ifactol)'for determining the coagulase and protein A status of Staph)'lococClls aureus strains isolated from human and boı'ine specimens and also it is cond/uled that in most instances the latex slide agglutination test is a reliaMe method for identij)in,!!, Staph. aureus in the laboratm)'.

Özet: Staph)'lococcus aureus suşlarının dUIllIJing factor re protein

A'-larının ortak tanımlanması için son )'ıllarda Iate;.; aglutina.l)'on testi kullanıl-maktadır.

! Doç Dr., A.Ü.Veterilıer Fakiilu'si, Bakteriyoloji Bilim Dal" Ankara. 2 Yrd. Doç. Dr., 1\.0. Veteriner Fakültesi, Bakteriyoloji Bilim Dalı, Ankara. 3 1\raş. Gör., Yüzüncü Yıl Üni"ersitesi, Veteriner Fakültesi, Bakteriyoloji Bilim Dalı, Van.

252 Ö. Akay-M. iı,~Cır-B. Uslanoğlu-M.Ö. [sendal

Bu (alışmada, latex aglııtinasyon ile Sla/JIz. alMIIS SlIşiarının identi[ikas-.Jonunda kullanılan tüp-lam koagııla.~, D.Nase, TNase i'e protein A test

sonuç-lan k'arşı!aştııılmzştır. insan orijinli i00 Staph. aureus sıışundan iOO'ii

(%

100), inek sütlerinden izole edilen 100 Staph. aureus'taıı 97'si (% 97) latex pozit?/, buna karşl1l 25 insan ka)'nak/ı koagula<. negatif sııştan 22'si (O~ 88)

ıe sığır orijinli 25 koagula;: negatıf sııştan ise 24'ii (% 96) negatif bulun-muştur.

Alınan bu sonıı(lara gıire latex aglııtinasym testinin Sta/Jh. aureıı.\ sUŞ-larınııı dumpiııi!, laetor ,;e protein Il'lanIIIII tanımlanması için u):£;ıın bir test

ve ~ynı suşlarıız kesin identıfikas.J0I11I için la!Joratuvar/arda kııllamlabileeek çabuk bir ]iintem oldıı,~u orta)'a komılmuşlur.

Giriş

,')'taph. aurelıs'ların diğer stafilokoklardan ayırımı ıçın koagulaz testi öncelikle uygıdanan \T ge~:erli olan bir testtir (3, II, 19). Ancak,

Staph. intemıedius ve Staph. I!yieııs SiışIarının

%

50 oranında koagulaz pozitif sonuç vermelerine (I G, 23), testtc yalancı pozitif vc negatif sonııçlar elde edilmesine rağmen (18, 37, 41) klasifikasyonunda kul-lanılan en fazla koaglu:ız testidir. Bu test yanısıra, patojenik olanları belirlemek için DNasc (24., 30), termonüklcaz (6, 8), protein A (36, 42), clumping factor (13, 31) gibi testler de kullanılmaktadır.

Patojenik ve apatojenik stafilokok suşlarının ayırımı için önce-likle koagulaz ve ı):\iase testinden yararlanılmaktadır (24, 30). Weck-man ve Catlin (-14), klinik materyaldm izole dtikleri 87 mikrokok suşundan 34 tanesinin DNase ve koagulaz pozitif, buna karşın koagu-laz negatif suşların sadece birisinin DNase pozitif, DiSalvo (10), 204.

Staph. aureııs suşundan 199'nun D:'\ase ve koagulaz pozitif, 100 J'.1ie-roeoeCllsp)'ogenes uar. albus suşundan sadece birisinin hem DNase ve hem de koagulaz pozitif, Victor ve ark. (43), koagulaz pozitif Staph aureZls

suşlarının % 95'ini, ayrıca 41 koagulaz negatif suştan ise

ıo

tanesini D~ase pozitif bulduklarını bildirmişlerdir.

J

acobs ve ark. (17) insan orijinli 1467 koagulaz pozitif stafilokok suşundan tamamını, 227 koagu-laz negatif suştan ise 5'nin D~ase pozitif bulduklarm! ve bu nedenle de testin teşhis laboratuvarlarınca güvenle kullanılabileceğini açık-lamışlardır. Raymond ve Traub (38), izole ettikleri 350 starilokok suşundan 241 tanesini Staph. aııreZlSve i09'nıı ise Staph. epidermidis ola-rak identifiye etmişler, 241 Staph. aııreZls'tan i i'nin D:'\ase ve 34'nün koagulaz negatif: 109 Staph. epidermidis suşundan 26'sının DN ase

po-LATEX AGLlJTJNASYON TESTi ÜZERiNE ARAŞTJRMA... 253

zitif, hepsinin koagulaz testinde negatif, Jungkind ve ark. (20), 219

Staph. aureus suşunun

%

94.4'nün 4'ncü,

%

99. 5'nin ise 24'üncü saat-lerde tüp koagulaz testinde pozitif, 103 koagulaz negatif stafilokok'un

is(~ bu testte negatif bulunduğunu saptamışlardır. Akay (I), insan

orijinli Staph]lococcus epidermidis suşlarından 247 tanesinden birinin

koagulaz pozitif (% 0.4), 246 insan ve 48 sığır kaynaklı suşun hepsinin

negatif, insan orijiı:ıli 189Staph. aureus'tan 18Tsinin pozitif (% 98.9),

2 suşun negatif, sığu orijinli 102 suştan 101'inin pozitif (% 99),

biri-sinin negatif olduğunu bildirmiştir.

Clumping factor koaglulaz pozitif stafilokokların tanımlanması

için uygun, yapılması kolay, kısa sürede sonuç veren ve tüp testine

oranla daha ekonomik bir testtir (28, 34). Essers ve Radebold (13),

denemelerinde kulandıkları 2i8 koagulaz pozitif stafilokok suşunun

insan plazması ile yapılan CF testinde, 208'ini pozitif, iO'unu negatif,

koagulaz negatif 150 suştan 18'ni pozitif, i32'sini negatif, Doern (I I),

insan orijinli 158 Staph. aureus suşunun 132'sinin CF pozitif (% 83.5),

ve 264 koagulaz negatif suşu n CF negatif, M yrick ve Ellner (31),

la-tex aglutinasyon testi ile pozitif sonuç veren 357 stafilokok suşundan

311 'ni CF pozitif ve latex aglutinasyon negatif bulunan 449 suştan

tamamını aynı testtc negatif bulmuşlardır. Baker ve ark. (5), 380

stafilokok suşundan 239'nu Staph. aureıısolarak identifiye etmişler ve

bu suşların CF testinde 2iO tanesini pozitif, 25'ni negatif, 4'nü

şüp-heli, Berke ve Tilton (7), 118Staph. aureus'tan i15'ni pozitif, 3'nü

ne-gatif ve 50 Staph. epidermidis'den tamamını lam koagulaz testinde

negatif bulduklarını açıklamışlardır.

A1icrococcaceae familyasında bulunan diğer organizmalardan

Staph. aureus suşlarının kesin identifikasyonu için TNase testi de önemli

bir kriter olarak kullanılmış ve bu amaçla bir çok araştırma

yapılmış-tır (4, 8, 26, 27, 38, 40, 41). Yapılan bu çalışmalarda toplam 2992

koagulaz pozitif ve 2396 koagulaz negatif stafilokok suşu TNase

yö-nünden incelenmiş, koagulaz pozitifsuşların % 99'unun ve negatiflerin

ise % 2'sinin Tl\ase oluşturdukları belirlenmiştir. Park ve ark. (33),

224 koagulaz pozitif suştan 22i'nin (% 98.7) ve 148 koagulaz

nega-tif suştan 26 sının (% 17.6) TNase pozitif, Shanhotzer ve Peterson

(39), klinik materyalden izole ettikleri 189 Gram pozitif koku CF,

koagulaz, D~ase ve termonukleaz yönünden incelediklerinde;

bun-ların 72'sinin 4 testte pozitif, 88'nin ise negatif sonuç verdiklerini,

ge-riye kalan 29 suş arasında ise koagulaz ve termonukleazın % 90

254 Ö. Akay-M. iıgür-B. Uslanoğlu-M,Ö. Esendal

olmayan ve çabuk sonuç veren yöntem olduğunu, Derke ve Tilton (7), insan orijinli 118 Staph. aureııs su~undan 117'sini T~ase pozitif bul-duklarını bildirmişlerdir. Menzies (29), izole ettiği 1035 stafilokok-tan koagulaz pozitif 728 suşun TNase pozitif: koagulaz negatif 307 suştan 306'sının negatif, bir suşun ise pozitif, Zarzour \'C Belle (46), çalışmalarında kullandıkları 520 stafilokok'tan 150 Staph. aureus su-şunun Tl\ase pozitif, GO'nın negatif ,Sperber ve Tatini (11), 508 sta-filokok suşundan 439 Staph. aııreus'un pozitif, 69 koagulaz negatif suşun ise Tl'\ase testinde negatif sonuç verdiğini açıklamışlardır.

Protein-A antijenik spesifitcye sahip ve bazı Staph. aıırcus su~la-rının hücre duvarında bulıınan bir proteindir. tnsan ve değişik lıayvan orijinli stafilokok suşlarının Protein-A oluşturmaları üzerinde çalışma-lar yapılmıştır (22, 35, 36, 42). Poutrcl ve Lefort (:lG), insan 589 ve sığır orijinli 245 stafilokok suşunu iHA ilc Protein-A yönünden ince-lediklerinde; koagluaz pozi til' suşlardan insan orijinli i39'unclan 133 'ün ve sığır orijinli 200 su~tan i i2'sinin pozitif~ buna karşın koagulaz negatif suşlardan 450 insan ve 45 sığır orijinli suşun Protein-A testinde negatif, Kronvall ve ark. (21), insan orijinli 215, akut mastitisli 30 ve. kronik mastitisli ineklerden izole ettikleri 97 Staph. aureus su~undan insan orijinlilerden

%

9 i .2'sinin ve akut mastitislilerclen

%

iOO'nün, kronik vakalardan ayırclıkları <)7 suştan

%

59. 8'nin ve 77 Staph. epi-dermidis'ten sadece bir tanesinin Protein-A sentezlediğ'ini bildirmişler-dir. Forsgren (15), insan orijinli 800 patojenik ve apat(~jcnik stafilo-kok suşlarını Protein-A yönünden incelendiğinde; 700 koagulaz pozitif suştan 692 ve i00 negatif su~tan 2'sinin ckstrascIüler Protein-A oluşturduğunu, Windbold ve Ericson (45), insanlardan izole ettikleri 341 izolattan 301'nin tüptc yapılan HA ilc pozitif bulunduğunu, Flandrois ve ark. (I 4) ile Kronvalc ve ark. (22) tarafından yapılan çalışmalarda ise; insan ve hayvan orijinli koagulaz negatif suşların Protein-A oluşturmadıkları açıklanmı~tlr. Akay ve ark. (2), insan ori-jinli i 89, sığır orijinli 97 suşunun sırasıyla i i 8 ve 44'nü pozitif 248 insan ve 43 sığır orijinli Staph. epidermidis suşunun ise testte negatif bulunduğunu bildiımi~lerdir.

Son yıllarda Essers ve Radebold (13), Staph. aureus suşlarının dumping factor ve Protein-A larının ortak tanımlanması için çabuk lamaglutinasyonu (Latex aglutinasyon testi) ortaya koymuşlardır. Bu testte kullanılan latex partikülleri plazma ilc bağlanmış (I 2, 31) ve bu partiküllerin Staph. aıaeus ilc karşı kaqıya gelmesinde

organiz-LATEX AGLUTlNASYON TESTi ÜZERiNE ARAŞTIRMA... 255

mayı aglutine ettiği ortaya konulmuştur. Aglutinasyon reaksiyonu,

stafilokok'ların hücre duvarı yüzeyinde bulunan Protein-A ile latex

partiküllerine adsorbe olmuş immunglobulin (IgG) arasında meydana

gelen bağlantı ve yine hücre duvarına bağlı clumping factor ile latex

partiküllerine adsorbe edilen pıhtılaşma faktörünün birleşmesi sonucu

oluşmaktadır (I 2, 20, 28, :-3ı). Latex aglutinasyon testi ile Staph. aureus

suşlarının Micrococcaceae familyasında bulunan diğer etkenlerden

ayı-rımı için çalışmalar yapılmış (3, 5, 7, IL, i9) ve olumlu sonuçlar

alın-mıştır. Staph. aureu, suşlarının latex aglutinasyon testi ile

identifikas-yonunda ilk çalışma Essers ve Radebold (I 3) tarafından

gerçekleştiI-miştir. Bu çalışmada araştırıcıların hazırlamış oldukları reagent'le

insan orijinli 2 18 koagulaz pozitif suştan i28'nin pozitif 150 koagulaz

negatif suştan 149'nun negatif, bir suşun domuz plazması ile pozitif

sonuç verdiği ve testin Staph. aureus suşlarının idetifikasyonunda teşhis

laboratuvarlarınca güvenle kullanılabileceği açıklanmıştır. Berke

ve Tilton (7) insan orijinli 118 Staph. aureus ve 50 Staph. epidermidis

suşunu Staph. Aurex, Veri-Staph. , Bacto Staph. ticari isimli latex

reagent'-leri ile inceledikreagent'-lerinde

ı

18 Staph. aureus'tan Staph. Aurex ile I,

Veri-Staph.'ta i ve Bacto Staph. ta II suşun negatif, 50 Staph. epidermidis su-şunun ise her üç kit'le negatif, Baker ve ark. (5), insan orijinli 380

sta-filokok suşundan 239 nu Staph. arueusve 14'iinün koagulaz negatif suş

olarak ayırmışlar ve ticari .riero STA T Staph. kiti ile Staph. aureu,

suş-larından 238 (% 99.6) nin pozitif: koagulaz negatif 111 suştan

ta-ınamının latex aglutinasyon testinde negatif sonuç verdiğini

belirt-mişlerdir. Myrick ve Ellner (31) denemelerinde kullandıkları 806

stafilokok suşundan 357'sinin latex pozitif ve 339'nun bu testte negatif

bulunduğunu, pozitif 357 suştan 351 'nin koagulaz pozitif, 6'sının

koa-gulaz negatif: 449 latex negatifsuştan 2 sinin koagulaz pozitif ve 447'

sinin koagulaz negatif:

.J

ungikind ve ark. (20), 2i9 insan orijinli Staph. aureus ve 103 koaglııaz negatif suş üzerinde yaptıkları çalışmada, Se-roSTAT Staph. kiti ile 219 Staph. aureus tan 209 nun (% 95.4) pozitif,

103 koagulaz negatif suştan tamamının negatif sonuç verdiğini

bil-dirmişlerdir.

Bu çalışmanın amacı, ticari latex aglutinasyon kiti ile stafilokok

suşlarının identifikasyonunda rutin olarak kullanılan tüp koagulaz,

elumping factor, T:'Iase, D~ase, ve Protein-A test sonuçlarının

256 Ö. Akay-M. İzgür-B. Uslanoglu-M.Ö. Esendal

~ateryaı ve ~etot

Suşlar: Bu çalışmada aşağıda bildirilen stafilokok suşlarından yararlanılmıştır.

a- Test suşları: Denemede, i25 insan ve i25 sığır orijinli toplam

250 stafilokok suşu kullanılmıştır. Test edilen i25 insan suşundan

iOO'üStaph. aureus, 25'i koagulaz negatif stafilokok, sığır orijinli

suş-lardan lOO'ü Staph. aureus, 25'i koagulaz negatif stafilokok'dur.

İnsan kaynaklı suşlar, Gülhane Askeri Tıp Akademisi Tıp

Fa-kültesi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, SSK Ankara Hastahanesi

Ço-cuk Kliniği, G.Ü. Tıp Fakültesi ~ikrobiyoloji Anabilim Dalı, sığır

orijinli suşlar ise, Etlik V deriner Kontrol Araştırma Enstitüsü ve

A. Ü. Veteriner Fakültesi !'vlikrobiyolqji Anabilim Dalına getirilen süt

örneklerinden izole ve identifiye edilmiştir.

b- Standart suşlar: Denemede, A. Ü. Veteriner Fakültesi

Bakteri-yoloji Bilim Dalı kültür kolleksiyonundan sağlanan Staph. aureus

Cowan suşu, Protein-A pozitif kontrol, aynı kaynaktan sağlanan

Staph. epidermidis-33 suşu, Protein-A negatif kontrol, ayrıca Staph. aureus ATCC 25923 ve Staph. epidermidis ATCC 12228 suşları latex

aglutinasyon testinde kontrololarak kullanılmışlardır.

Besi yerleri: Denemede kullanılan suşların çeşitli karakterlerinin

saptanması ve metisilin'e karşı duyarlılıklarının belirlenmesinde;

Muller Hinton (Oxoid), Brain Heart Infusion agar (Difco), Brain

Heart Infusion broth (Difco), kanlı agar, triptikaz soy buyyon ve

TSA agar (Difco), DNase agar (Oxoid), Toluidine blue

deoxyribo-nucleic acid agar (TDA) gibi besi yerlerinden yararlanılmıştır.

Tavşan plazması: Çalışmada, insan ve sığır orijinli stafilokok

suş-larının koagulaz ve clumping factor aktivitelerinin saptanması

ama-cıyla ticari liyofilize tavşan plazması (Sigma) kullanılmıştır.

Latex aglutinasyon seti: Test edilen suşların clumping factor ve

Protein-A özellikleini ortaya koymak için, Bacto Staph. Latex

(Difco-3850-32-7)'den yararlanılmıştır.

Metisilin diski: Stafilokok suşlarının metisilin'e duyarlılıklarının

saptanması için Oxoid-5 meg lik diskler kullanılmıştır.

Sensibilize koyun eritrositlerinin hazırlanması: Sensibilize koyun

hazır-LATEX AGLUTINASYON TESTI ÜZERINE ARAŞTIRMA... 257

lanmıştır. Koyun kanı Alsever solusyonuna alınarak yıkanmış, titresi

i/5000 olan hemolitik serumdan (Behring-Germany) ilave edilmiş

ve buna glutrcaldehit katılarak iO saat süreyle 40 oC lik su

banyo-sunda inku basyondan sonra 3 kez yıkanmış ve % i oranında sığır

albumini içeren PBS ile süspanse edilerek,

%

3 lük kan solüsyonu

ha-zırlanmıştır. Ayrıca, üç kez yıkanmış

%

3 lük koyun eritrositlerinden

denemede sensibilize edilmemiş kan olarak yararlanılmıştır.

Clumping faetor: Bu test için temiz bir lam üzerine bir damla

su-landırılmamış plazma konulmuş, test edilecek stafiIokok suşlarının

MuHer Hinton ve BHIA da üreyen kolonilerinden öze ile alınarak

plazma ile karıştırılmış, 45 saniye içinde meydana gelen kümeleşme

pozitif kabul edilmiştir (20).

Tüp koagula<. testi: Tüp koagulaz testi PenneH ve ark. (34) .na

göre yapılmıştır. Steril tavşan plazması i/5 oranında sulandırılarak

0.5 ml miktarında tüplere konmuş ve üzerine teste tabi tutulacak

suşların BHIB'daki taze kültürlerinden O.i ml ilave edilmiş, sonuçlar

koagulasyonun olup olmamasına göre 2, 4, 6 ve 24'ncü saatlerde

değer-lendirilmiştir.

TNase testi: Bu test, Lachica ve ark. (25)'larına göre TB-DNA

agar besi yerinde gerçekleştirilmiştir. Hazırlanan DNA agar

ortamı-na O.i M toluidin blue'dan 0.3 ml katılmış, 95 mm çapındaki petri

kutularına 20 ml miktarında dökülmüş ve agar katıl aştık tan sonra

besi yeri üzerine 3 mm çapında çukurlar açılmıştır. Bu çukurların

her birine denenecek suşların 100 °C'de i5 dakika kaynatılmış olan

BHIB'nundaki i8-24 saatlik kültürlerinden mikropipet ile 25 [LI

kon-muş ve 37 °C'de inkube edilmiştir. Petri kutuları I, 2, 4 ve 24'ncü

saatlerde incelenmiş ve çukurlar etrafındaki 1-3 cm çapında açık

pem-be renkli zonun oluşumu pozitif kabul edilmiştir (41).

DNase testi: Bu test, Zierdt ve Golde (47)'nin tanımladıkları

metoda göre yapılmıştır. Teste tabi tutulacak suşların triptikaz soy

buyyondaki kültürlerinden D:\"ase agar üzerine nokta inokulasyonu

yapılmış ve 37 °C'de 24 saatlik bir inkubasyonu takiben koloniler

üze-rine iN HC i'den konulmuş ve koyu zemin üzerinde incelenerek

kolo-niler etrafındaki açılmalar pozitif olarak değerlendirilmiştir.

Latex testi: Bu test için ticari Staph Latex test setinden

(Difco-3850-32-7) yararlanılmıştır. İncelenecek stafilokok'ların BHIA'daki

Ö. Akay-M. tzgür-B. l!slanolllu-M.Ö. Esendal

edilmiş ve üzerine Staph Latex süspansiyonundan bir damla

damla-tılıp karıştırılarak 1-2 dak içinde oluşan aglutinasyon pozitif olarak

değerlendirilmiştir (9). Ayrıca, pozitif kontrol Staph. aııreııs ATCC

25923 ve negatif kontrol Staph. epidermidis ATCC i2228 suşları ilc de

aynı işlemler yapılmıştır.

Protein-A testi: İnsan ve hayvan orijinli stafilokok su~larının

Pro-tein-A oluşturma özelliklerini saptamak için bu su~ların MH ve BI-HA

daki kolonilerinden yararlanılmıştır. Bu kolonilerin temiz bir lam

üzerine konulan 20 [.LI duyarlılaştırılmış kan ile emülisyonları

yapı-larak 2 dak içinde aglutinasyonun görülmesi pozitif kabul edilmiştir

(36). Aynı işlemler sensibilize edilmemiş % 3 lük kanla da

tekrarlan-mıştır. Ayrıca, kontrololarak Protein-A pozitif Staph. aııreus eowalZ

ve negatif Staph. epidermidis-33 suşları sensilıilizc ve sensibilizc

olma-yan kanlarla da denenmiştir.

i\1etisilin duyarlılık testleri: İzole H identifiye edilen

stafilokok-ların metisilin duyarlılık testleri Oxoid'e (32) görc lVlueller Hinton

agarında yapılmış ve sonuçlar Oxoid standartlarına göre

değerlendi-rilmiştir.

Bulgular

Clumping faetor sonuçları: Bu test, ~ıH ve BHIA'da olmak üzere

iki ayrı besi ycrinde yapılmıştır. Bu iki besi yerinde gerçekleştirilen

CF testinde, insan orijinli i00 Staph. aııreus suşundan tamamı pozitif,

koagulaz ncgatif 25 suşu n ise hepsi negatif ('rablo - i), MB ortamında sığır orijinli ı 00Staph. aureus suşundan 98'i

cr

pozitif: 2 tanesi negatif,

koagulaz negatif suşların ise tümü aynı testte negatif bulunmuştur

(Tablo - 2).

Tüp koagııla;:: test sonuçları: İnsan ve sığır orijinli 100Stap/ı. aureus

suşu pozitif, aynı kaynaklı koagulaz negatif stafilokok suşları (25'er

adet) ise negatif bulunmuştur Crablo - 3).

TNase test sonuçları: T;\Tasc testi TB-DN/\ agar ortamında

yapıl-mış ve insan orijinli 100Staph. aureus suşundan 93'ü pozitif~ 7'si negatif

sığır orijinli aynı sayıdaki Staph. aıırflls'tan 8 ı'i pozitif, ı g'u negatif,

25 koagulaz negatif stafilokok suşundan ise insan ve sığır kaynaklı

olanların tamamı negatif sonuç vcrmiştir ('l'ablo - ı vc - 2).

DNase test sonuçları: Denemede kullanılan insan orijinli ı 00 Staph. aureus suşundan iOO'ü, sığır orijinli ı 00 Stap/ı. aureus suşundan 95'İ

LATEX AGLUTINASYON TESTi ÜZERiNE ARAŞTIRMA... 259

Tablo i. Kougalaz (tüp) testi ile stafilokok'ların idcntifikasyonunda kullanılan diğ~r test-ler arasındaki korelasyon (i nsan suşları)

Test

Clurrıping faeıor (MH) Pozitif

Negatif

Ciıımping Facıor (BHIA) Pozitif Negatif TNa-'e Pozitif Negatif ])Nase Pozitif :'\iegatif Late" Pozitif Negatif Protein-A (MH) Pozitif Negatif Protein-A (BHlA) Pozitif :'\iegatif * Tavşan plazmast

Koagulaz pozitif'

i

Koagulaz negatif' (n ~ 100) (n - 2:» .._--- ._-_._---_.- .. _---100 O O 2.1 100 O O 25 93 O 93 O 100 O O 2'i 100 3 O 22 90 O LO 25 94 O 6 2!>

Tablo 2. Koagulaz (tüp) testi ilc stafilokok'ların identifikasyonunda kullanıian diğer test-ler arasındaki korelasyon (Sığır suşları)

Test Koaglllaz pozitif'

i

Koagulaz negatif' (rı = 100) (n - 25) ..-.---_._ ..•. ---_.--_. __.

---Clllmping factor (MH)

Pozitif 98 O

:"Iegatif 2 25

Clumping factor (BHlA)

Pozitif 94 O :'\iegatif 6 25 TNase Pozitif 81 O Negatif 19 25 1):\ase Pozitif 95 O Negatif 5 25 Latex Pozitif 97 i Negatif 3 24 Prolcin-A (MH) Pozitif 58 2 :'\iegatif 42 23 Protein-A (BHlA) Pozitif 64 O 1\egatif 36 25 * Tavşan plazması

260 _{Ö. Akay-M. İzgür-B. Uslano~lu-M.Ö. Esendal}

Tablo 3. İnsan ve sığırlardan izole edilen toplam 250 stafilokok suşunun koagulaz testİ ile latex aglutinasyon sonuçlarının karşılaştırılması.

Latcx aglutinasyon testi

Pozitif o _{pozitif Negatif ~,;)negatif} " -_._- ---.- _.. .._---_.- -- -- --- .---" 100 100 100 O :3 12 22 88 ---- ._---_...- ._---__._.__.__ 0_--97 97 :3 3 i 4 2.j. 9(j i Tüp koagulaz testi

---1--- ---,--._--

Pm:itif suşlar (100) Negatif suşlar (25 ) Pozitif suçlar (100) !\ egatil' suşlar (25 ) Sığır İnsan

pozitif, aynı kaynaklı koagulaz negatif stafilokok suşlarının hepsi testte

negatif bulunmuştur (Tablo - i ve - 2).

Latex test sonuçları: İnsan kaynaklı 100Staph. aureus suşunun hepsi

(% 100), sığır orijinli 100 Staph. aureus suşundan 97'si (% 97) latex

aglutinasyon testinde pozitif (Tablo - 3), insan kaynaklı 25 koagulaz

negatif stafilokok suşundan 3'ü pozitif (% 3), 22'si negatif (% 88),

hayvan orijinli aynı sayıdaki suştan l'i pozitif (% 4), 24'ü negatif

(%

96) bulunmuştur (Tablo - 1, 2 ve - 3). Tablo 3'ün

değerlendiril-mesinde, insan suşlarının latex aglu tinasyon testine göre tüp

koagu-laz test spesifitesi

%

100, sensitivitesi

%

97, pozitif prediktif değeri

(py+)

%

100 olmasına rağmen, negatif prediktif değeri (PY-)

%

88

dir. Yine aynı tabloda sığır suşlarının latex aglutinasyon testine göre

tüp koagulaz test spesifitesi

%

88, sensitivitesi

%

98.9, PV- değeri

%

97 ve negatif prediktif değeri

%

96 dır.

Protein-A test sonuçları: Bu çalışmada kullanılan toplam 250

sta-filokok suşundan, insan orijinli Staph. aureus'ların MH besi yerinde

90'1 pozitif, 1O'u negatif, BHIA'da 94'ü pozitif, 6'sl negatif sığırlardan

izole edilen 100 Staph. aureus suşundan :ı\'IH besi yerinde 58'i pozitif,

42 si negatif, BHIA'da 64'ü pozitif, 36'sl negatif bulunmuştur. Ayrıca,

insan ve sığır kaynaklı koagulaz negatif stafilokok suşlarının her iki

ortamda da Protein-A oluşturmadıkları saptanmıştır (Tablo - 1 ve" 2).

Metisilin duyarlılık test sonuçları: İnsan orijinli 100 Staph.

aureus'-tan 96'sl metisilin'e duyarlı, 4'ü dirençli, koagulaz negatif suşlardan

22'si duyarlı, 3'ü dirençli, hayvan orijinli 100 Staph. aureus'tan 98'i

duyarlı, 2'si dirençli, koagulaz negatif 25 suştan hepsi metisilin'e

LATEX AGLlJTINASYON TEST! ÜZERINE ARAŞTIRMA... 261

Tablo 4a. Stafilokok su~larının ıneıi,ilin'e duyarlılık ve dirençliliklerine güre testlerin karşılaştırılması (insan suşları).

ı

i Laıex aglutinasyon

ı

Tür Suş sayısı Clumping' Tüp' T:\"ase' D:\asc' testi Protein'

factor i koagulaz : - A (I)

---_..-'. --- ..--"---._- ----,. __ ..-_{--_.0_-- ---} --_._-_.. ._"-._-- ----Staph. aureus Mctisilin duyarlı 96 96 9G 89 96 96 O 89 Mctisilin dir~nçli 1 4 .1 4 4 4 O O --- --- .

_-

--- .... .'--- - ._---.--- -_._.0_--- - ----Koagulaz negatif Stafilokok suşları Mctisilin duyarlı 22 O O O O :-1 19 O Mctilsiin dircnçli 3 O O O O _i O 3 O

X. Pozitif suş sayısı I. Mullcr Hinton

Tablo 4b. İnsan orijinli Staph. aUITUS suşlarının değişik testlere göre sensitivite ve sp..,;i-fitderİ i~<)Scnsİtİvİıc Tcst Toplam

i

j\"lcıisilin-S

cıı;:~;;;---

----1--.

factor 100' 100 Tüp koagulaz 100 100 T:"iase 93 92.7 D~a~ 100 100 Latcx 100 100 Protein-A 90 92 . 7 ı !"I"tisilin-R (;1' spcsifite PV~ Pv-(~'()) (%) ---._" -.-___ o i 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 9'1.7 100 100 100 100 100 100 100 100 100 25 25 9G.7 12.5

Tablo ja. Stafilokok suşlarının metisilin'e duyarlılık ye dirençliliklerine göre testlerin karşılaştırılması (sığır suşları)

i

Latcx aglutinasyon

Clumping' Tüp' testi Protein

Tür Suş sayısı factor (I) koagulaz TNasc' DNasc' ; - A' (I)

---

--- ----_0 -.- --.- .--_.--,_._- __ o - _.0_- _{- _._---} ----Staph. aurcııs Metisilin duyarlı 98 96 79 93 93 95 3 57 Metisilin diren~,li 2 i 2 2 2 2 2 O 1 ı ----"---_.- - --- --_..•--- ---_._" --"---- _._--- --- -._--- ----Koagulaz negatif stafilokok suşları Metisilin duyarlı 2.1 O O O 2 1 :24 2 Metisilin dirençli O O O O

_i

O O O O X. Pozitif suş

ı.

MuJ1er Hinton

Ö. Akay-M. izgür-B. Uslanoğlu-M.Ö. Esendal

Tablo ;-,b. Sığır orijiııli Sıaplı. alllTUS SlIşlarılıılı dı'ğişik (esıiere göre seıısiıivile ve spesifi(('icri

___ ._1

":0 Sctlsitİvitc Test Toplam i\lcıisilin-S

i

Metisiliıı-R rı rı spcsii'iıc 1,\' . PV-ClulIlping i

---.--1

facıor ım 97.<) i 100 100 97.9 100

Tiip

i

koagııla/. 100 100 100 100 100 ıon

T!\aSt. !ll 80.li 100 100 97.Ei 100

DN"as(' 91 9+.LL 100 100 97.9 100

Laı"" 97 %.9 100 ıoo 97.9 100

Prolcin- __\ i8 ;,8.i ',o .',0 98.2 2.3

duyarlılık ve dirençlilik durumuna göre diğer testlerle kar~ıla~tırıldığı Tablo - 4a'nın incdenmesinde, Tablo - 4b'de görüldüğü gibi

cr,

tiip koagulaz, n~ase ve latex testinin sensitivite, spesifite, pozitif-negatif prediktif değerleri

%

i00, T~ast~ testinin metisilin duyarlılığına göre scnsitivitesi °0 92.7, pozitif' prediktif' değeri ~o 95.7, Protein-A tes-tinin ise sensitivitesi metisilin duyarlılığına göre

%

92.7, metisilin dirençliliğine göre

%

25, spesifitesi

%

2.'), pozitif prediktif' c1eğeri

o~) 96.7 \T negatif' precliktif' değeri

%

12. 5'dur. Tablo - Sa ve 5b'nin incdendi.~inde, sığır suşları için CF, tüp koagulaz, T~ase, D;\'ase ve latex testlerinin mdisilin dirent)ilik sensitivitc, spesifite ve negatif' prediktif değerinin IYn i00, Cı: metisilin duyarlılık sensitivite ve pozitif precliktif' değerlerinin o.{) 97.9, TNase metisilin c1uyarlılık sensitivi-('sinin

%

BO. 6, pozitif prediktif' değerinin

%

97.5, DNase, latex aglu-tinasyon ve Protein-A it)n bu değerlerin sırasıyla °'0 94.9, % 97.9,

% 96.9, \T ~o 97.9, 00 58. i, 0:) 98.2, ayrıca, Protein-A için metisilin

dirençlilik sensiti\'ite \1: spesifitesinin

%

50, negatif prediktif değerinin

%

2.:) olduğu anlaşılmaktadır.

Tartışma ve Sonuç

Bu araştırmada, insan ve sığırlardan izole edilen stafilokok suş-larının latex aglutinasyonu ilc bu mikroorganizmaların kesin identi-fikasyonunda kullanılan tüp koagulaz, Cı:, D:\iase, T:'-iase ve

Pro-tein-A gibi test sonu<;ları arasındaki korelasyon incelenmiştir.

İnsan ve hayvanlarda hastalık meydana getiren stafilokok'larla -(Staplz. al/rel/s), kommensal özellik taşıyan diğTr türlerin birbirinden ayrımı bugün dahi te~his açısından zaman zaman ortaya sorunlar çıkartmaktadır. Tür ayrımında en sık ba~vurulan tüp koagulaz testi olup (10,17,13, '1-4), lam testİ de (11,13,31) kullanılmaktadır. Son

LATEX AGLUTINASYON TESTi ÜZERINE ARAŞTIRMA... 263

yıllarda Essers ve Radebold (I :'l) stafilokokların Proıein-A n:

cr

lerinin ortak belirlenmesi için geliştirdikleri latex aglutinasyon reagen-tini hazırlamışlar, koagulaz pozitif 218 suşun tamamını latex ile, 2 i G' sını Protein-A ve 208'ni Cl" testleriyle pozitif~ koagulaz negatif suştan latex ile i49'nu, Protein-A ve Cl" ile 1:~2 sini negatif bulmuşlardır. DO(Tn (I i) çalışmasında test ettiği 427 stafilokok suşunun iGi 'ni koa-gulaz pozitif ve bunlarında i58'ni latex pozitif~ 2GG koagulaz negatif suşun ise 264'nü latex negatif bulmuştur. Daha sonra çeşitli firmalarca değişik isimler altında latex aglutinasyon kitleri hazırlanmış ve Im kitlerle çalışmalar yapılmıştır (3, 5, 7, i I, 19). Aldridge ve ark.

CL;

92 tüp koagulaz pozitif suşun Sero-STAT Staplı. kiti ik gü sını, Staplı-latex ilc de tamamını pozitif bulduklarını, Pennell ve ark. (34) incele-dikleri 354 stafilokok suşunun tüp koagulaz testi ik i(iS'ni Staplt. aU/'eus, bunların da SeroSTAT Staplı ve Staphlatex kitleri ile 163'nü latex pozitif, 189 koagulaz negatif stafilokok suşunun ise her iki kit'le i88'nin negatif açıklamışlardır. Bu denemede alınan sonuçlara göre, insan orijinli 100 Staph. aurcııs suşunun tamamı tüp koagulaz,

cr

ve latex aglutinasyon testlerinde pozitif, sığır orijinli 100 StajJh. aureus'un tüp koagulaz testinde tamamının, C1" testinde 94'ünün ve Latex ag-lutinasyon testinde ise 87'sinin pozitif sonuç verdiği saptanmıştır. Latex aglutinasyon testinde negatif bulunan sığır orijinli 3 suşlin (E-13, £-114. ve E-125) tüp koagulaz, DNase ve TNase testlerinde pozitif sonuç verıneleri göz önüncle bulundurularak, bu suşlar Sta/JIt. aureus olarak identifiye edilmişlerdir. Koagulaz negatif suşlardan insan orijinli 3 ve sığır orijinli i suş ise Latex aglutinasyonunda pozitif bu-lunmuştur. Alınan bu sonuçlara göre Staph. aureus'ların kesin identi-fikasyonunda kullanılan tüp koagulaz, (:r ve Latex aglutinasyon test-leri arasında uygun bir korelasyon bulunmaktadır. Buna karşın, Jas-per ve ark. (19), inek sütlerinderı izok ettikleri 238 koagulaz pozitif suşun % 49. 2'sini Latex pozitif; 402 koagulaz negatif suşun ise

%)

95'ini Latex negatif bulmuşlar ve sonuçlara dayanarak, Latex testinin stafilokok identifikasyonunda uygun olmayacağını ve bu olumsuz sonucun da bazı Staph. aureııs suşlarında Protein-A'nın bulunmayışına bağlamışlardır. İnsan orijinli stafilokok suşlarının Latex aglutinasyon testine göre tüp koagulaz sensitivite ve PY- değerleri sırası ile % 97 ve % 88'dir. Sığır orijinli stafilokok suşlarının ise aynı testler için de-ğerleri

%

98.9 ve

°0

96'dır. İncelenen suşların spesifitc ve PY-- de-ğerleri insan orijinlilercil'

%

100, % i00, sığır orijinli stafilokoklar için ise

%

88.9 ve

%

9/'dir. Bu sonuçlar, insan orijinli stafilokokların

264 _{Ö. Akay-M. İzgür-B. Uslanoğlu-M.Ö. Esendal}

Protein-A değerierinin sığır orijinIi su~Iara göre yüksek oIması

nede-niyle ortaya çıkmaktadır.

Stafilokokların iclentifikasyonunda kuııanılan DNase testi için

yapılan çalışmalardan (I O, 38, 43, 44) bu testin klasifikasyonda önemli

bir değer taşıdığı anlaşılmaktadır. Denemede insan orijinIi koagulaz

ve Latex pozitif 100 Stap/ı. aureııs'un DXase testinde de % i00 pozitif;

koagulaz

~<)

100, Latex <LO97 pozitif sığır orijinIi 100 Stap/ı. aureus'un

ise bu testte

%

95'inin pozitif ve

%

5'inin de negatif oIduğu

belirIen-miştir. Ancak,

%

5'lik bu negatif bulgu Zarzour ve Beııc (46) nin

de açıkIadıkları gibi Staph. aureus'Iar tarafından az miktarda

sentez-lenen Dl'\ase'ın belirIenmemesine bağlanabilir.

T~ase oIuşumunun Staph. aureus suşlarının identifikasyonunda

önemIi bir kriter olarak kuııanıIabiIeceği yapılan araştırma

sonuç-larından anIaşılmaktadır (7, 29, 33, 39). Denemede insan orijinli

koa-guIaz pozitif stafilokokIarın

%

93'ünüri, sığır orijinIi koagulaz

po-zitif stafiIokokların

%

81 'nin T~ase pozitif, her iki orijinIi koagulaz

negatif suşların ise bu testte

%

i00 negatif olduğu belirlenerek, T::"Jase

testinin Staph. aureus'ların identifikasyonunda diğer testlerle birIikte

güvenle kuııanılabileceği ortaya konuImuştur.

i Protein-A testinin Staph. aureus'ların identifikasyonunda özeııikIe

insan suşlarında oIumIu sonuç verdiği yapılan araştırmaIarda

belirtil-mektedir (22, 35, :->6,42). Denemede bu amaçla kuııanılan iki ayrı

besi yerinde koaguIaz ve Latex

%

100 pozitif insan suşları MuIIer

Hinton'da

%

90, Brain Heart Infusion Agar'da

%

94 Protein-A

po-zitif buIunarak, bu konudaki araştırma sonuçları ile paraIeIIik

sağ-lanmıştır. Sığır koagulaz pozitif suşIarda bu test MuIIer Hinton'da

%

58, Brain Heart Infusion Agar'da

%

64'lük bir pozitiflik

göster-miştir. Denemede aIınan bu sonuçlar Protein-A testinde besi yerinin

de önemIi oIduğunu göstermektedir.'

Stafilokoklarla yapılan çalışmaIarda metisiIin'e duyarlılık

du-rumunun stafiIokok'ların identifikasyonunda kuııanılan diğer

testler-le, özeIliktestler-le, Protein-A ilc ilişkili olduğu belirtiImektedir (3, 7, 45).

Bu çalışmada metisiIin'e duyarlı 96 insan orijinli Staph. aureııs'un

tü-münün, CF, tüp koagulaz, Dl'\ase, Latex, 89'unun ise TNase ve

Pro-tein-A; sığır orijinli metisiIin'c duyarlı 98 ,')'taph. aıırellS suşunun ise

96'sının CF, 98'inin tüp koaguIaz, 79'unun TNasc, 93'nün D:\ase,

95'inin Latex ve 5/'sinin Protein-A yönünden pozitif olduğu

du-LATEX AGLUTTNASYON TESTi ÜZERiNE ARAŞTIRMA... 265

rumuna göre CF, tüp koagulaz, TNase, D:\iase ve Latex testlerİnin

sensitivİte, spesifite, PV"", ve PV- değerlerİ çok yüksektir. Ancak

Protein-A testi ile sensitivitesi

%

92.7, spesifitesi % 25 ve PV-

%

12.5'tur. (Tablo - 4b). Sığır orijinli suşların ise aynı değerleri yine

yüksek olup, Protein-A testinde sensitivitc

%

58. I, spesifite

%

50 ve

PV- % 2. 3'tür. Bu durum metisilin'e duyarlılığın Protein-A ile olan

ilişkisinden kaynaklanmaktadır (Tablo - ,,)b).

Bu çalışmada stafilokokların tanısında kullanılan CF, tüp

koagu-laz, DNasc, T:\ase, ve Protein-A testi ile Latcx aglutinasyon test

sonuçlarının büyük bir oranda uygunluk gösterdiği, ayrıca, bu testin

basit, uygulanması kolay ve kısa sürede sonuç vermesi nedeniyle

Staph. alireus'ların rutin identifikasyonunda diğer testler gibi güvenle kullanılabileceği anlaşılmıştır.

Kaynaklar

1. Akay, Ö. (19B5). Çqitli kaynaklardaıı izole edilen st~filokok sllılrmmn koagulaz ve DNase aktiviteleri üzerinde bir ara!tırma. Vd. Fak. Derg., 32 (3): 429-437,

2. Akay, Ö.,Ocak,t, İzgür, M., Arda, M., Aydın, N., Sultan, N. ve Aydın, N. (1985),

Insan ve reıilli hayuan kaynaklı stafilokok .ln!lamıln Protein-A olııştıml/aları üzeriilde bir araş-Iırma. Vet. Fak. D"rg., 32 (3): 401-'f12.

3. Aldridge, K.E., Kogos, C.V., Sanders, C.V. and Marier, R.L. (1984). Comparison

of rapid ideııtijicaıioıı assqyfor Staph)%coccııs aureııs.J.elin. ~1icrobio!., 19: 703 -704. 4. Baird-Parker, A.C. (1974). Sla/'Il)'lococClls. Bergey' s mamwl of deternıiııatiı'e bacteriology.

Bth Ed. Williams and \"'ilkins Co. Balıimore.

5. Baker, j.S., Borman, M.A., and Boudreau, D.H. (198.1).Evaluatioıı of various ralıid

agglııtiııation methor/s for the ideııtificatioıı 'ilStaplrylococClls aıırcııs..1. elin. :\o1icrobio!. 2 i: 726-729.

6. Barry, A.L., Lachica, R.V.F. and Atchison, F.W. (1973). Identijication of Staplrylo-coccus aureus by simııltmıeoııs lise of tilbe coagıılase and thermoıınclase tesis. Apı" tl.1icrobio!., 2:1: 496-497.

7. Berke, A. and Tilton, R.C. (1986). Evaluation ofrapid coagnlaJe methodsfor the identifi-cation of Stapylococcus aureus..J. elin. Microbio!., 23 (5): 916-919.

B. Devriese, L.A. and Oeding, P. (1975). Coagulase mul heat resistant nudease prodııcing

StaphylococcıtS epidermidis strains from mıimals ..1. App. Ilac!., 39: 197-207.

9. Difco Laboratories. (I 986). Bacto Staph Latex Test. Techiııical Information. Difco Labo-raıories. Detroiı, USA.

10. DiSalvo, j.N. (1958). Deox)7iboııuclease and coagulase activity of micrococci. Med. Tech. Bul!., 9: 191-196.

2(,1i _{Ü. Akay-M. izgCır-fl. Uslanoğlıı-M.Ö. Fsendal}

II. Doern. G.V. (I<JB2). F,'nlıınıiOlI ql coıııll/ercial Irllf\' alI.!!lıııi1laıioıı lesi .Ii" idenlifi(({lioıı of Sla/,/~r/ococ(llI mlll'IIJ ..i.Uin. :,''1icroiliol., Li: .1Iii-'lı 8.

12. Doern, G.V. and Robbie, L.I. (1~IB2)./)iml idmıilicalioıı ofSıapi~)'IIJ(OCCllS allll'IIJ ili hln-od ({{Ilıııe. Ilııid wiılı n coııııııercinllıılc.\' agglııliııalioıı 11'11..1.eli". ~V!ierobiol., iii: ı0+8 ı05 i.

13. Essers, L. and Radebold, K. (1980). Rapid and reliable id.,ntifieaıion of

Sıaplıvlo-(o((iis allretlS b)' laln agglııliıınlioıı lerl ..J. <:lin. :-vlicrobiol., I'L: G41 li43.

11. Flandrois, J.P., Fleurette, J. and Eyraud, F. (1<J7;j~./)flerıioıı de la pmleiııe ilde Slaplı)'lococrlıs aıırmJ /JIlr iu?ll/(/gghllillOlioıı (IJlldiıiollff. :\nn. lIiol. C1iıı., 33: 3(j'j-3GB. li. Forsgren, A. (l'l70). Sigııi/i(mıı:e ııl/noleiıı il/Nodıırlioıı bı' Jln/ilı)'/ococ(i. ını,,,,!. ImlTItıniıy.

2: li72-673.

~r;.Hajek, V. (l'l7G). SI,lPIı)'I",wC/(1 illICl/ııedilı .• a ııew .ı/,eri« isolaln/fruııı aliiiliilis. Inı..l. Sy,. HanerioL., 2G: 401 40R.

17. Jacobs, S.L., Wills, A.E. and Goodburn, G.W. (1963" SignifiCllıinlı deo.\'yrihoıııırlease /nodııcıioıı hv .lla/iI/vlo(o("i. i\alııre (I.ondon;. 200: 709-710.

IR. Jasper, D.E. and Jain, N.C. (ı ,)G'-,). SOIllI' cııIııI/ıı1 clımn(lniJıin 4'sllıpil)'locoai i.wlaıd ./ioll/ıııilk. Can ..J. COIll. :'\led., 29: IFl 12.1.

El. Jasper, D.E., Martinez. F.I. and Dellinger. J.D. (I<JR.l). Ewlııalioıı nj Iııle.\' ngglıııi-uaıioıı ICJIJIOI eslabli.llıiııg congıılnse siniılS oL slajill)'lncocci frOIll milk. (:an ..I. Com. Mcd., 48: 223-224.

20. Jungkind, D.L., Torhan, N.J., Corman, K.F. and Bondi. J.M. (19R't). Com/wıisoıı

,?lıwn f:011l11leJ"rifl(V ai..iable trJI meıhods wı/h um;:eııtiollo! rnogulflSf tesıs .for identijteninn nf

SIIı/,lıyloco«{(J aııre{(.\',.J. Cliıı. lvlic:robio!" i'l: 191-193.

21. Kronval1, G., Dossett, J.H., Quine, P.G. and Williams, R.C. (I 'l71). OmllCllee qf

/'roteiıı iliıı .ıın/)lıylomrcııl ,Imi{(s: Quıı{(ıilıııi,'c 1I.1/,eel 11ןil1(one/ıılio{( lo nuligcııie n{(d luıderio/). Il/lge I)jıe.r. lnl;,c:1. Immııniıııy. 3: IO-I:ı.

22. Kronval1, G., Holmberg, O. and Ripa. T. (1972). /'l'IIleilı A iıı SI"pil),loeoalıs mm/eJ sımiıı iıı iııııılOlI a{(d bo,i{(c oıigiıı. Ac:ta. Paılıol. :'\1icrobiol. Sc.aııd. See. B., 80: 73.1-742. 23. Klods, W.E. and Wolfshohl J.F. (1')32). Ideıılifimlio{( of SllIj,il),loWCCllJ s/iecieJ ıviılı

APı Sın/,Iı-I deul spltlll ..J. elin. MicrobioI., Hi: 509-:iIG.

24. Köhler-Samouilidis, G. (I <JR'!).SigııifiClıııa nl deo~)'ıibnıı{(deııse ,,(livil)' ol ,,((imil.I slalıp)'. lo(ncci. Dcııı. Ti"rarzlI. \Vsc:lır., 'll (4): 1',7 l:-,R.

2',. Lachica, R.W.E., Hoeprich, P.D. and Gerigeorfgis, C. (1971). Melııciııomaıic ilgili

dU!{(siolı lııelllods.li,I' dcıceliııg sllıplıylo,n((((llIIlc!CI!Je odi;;il)'. !\pp. :'\1icrobioI., 21: 'iS,'}.. 'iIl7. 2G. Lachia, R.W.E .. Hoeprich, P.D. and Genigeorgis, C. (1')71) ..N"r1elıse ııııd

l)'Sostnp-ltill .11lJce/,lihilil)' ~l Stlı/AvlocuccllJ Iıl1rellJ ııııd oılıer CIlI"lnse-/,osiıhe eoai. :\pp. Ni icrobio1. , 21 : 823-82G.

27. Lachica, R.V.F., Weiss, K.F. and Deibel, R.H. (1969). He/ıılioIlSlıi/1 nmalig coagıılnse,

nlerolo.riıı nııd lıenl-sl"b1e dl'ox)'lihnl/ıır1ensc prodııelioıı b)' Slo/,i,ylocoCCllS ,,"ıeIH. App. ,,,Iiero-lıioI., 18: 12G-127.

LATEX AGLUTINASYON TESTi ÜZERiNE ARAŞTIRMA... 2(,7

2fl. Lannette, E.D .. Balows, A.. Hausler, W.J. and Shadomy, H.J. (19W,) .. \l"Iı,{(I1 of

Ciiııi((fl Microbiul0.liY' 'Ith Ed. Amcriean Socieıy for Microbiology. Washingıon. USA. 29. Manzies. R.E. (I 977). Cııııılwıismı oj co"gııl"se, deo»'ıihııııııdmse (n.N"se) "ııri he"l-sI,,!JI~

ııw!e"se ıesısjoı ıhe irieıılificalioıı ofSI"I)!ıl'/lIcocnlS "ıııeııs.J.(:ıin. PathoL., 30: GOfi .. GOB. 30. Morton, H.E. and Cohn, J. (1')72). Co"g"lase "ııri deııx)'libOlwrle".•, "rti,il;es ol

.•ı"ı)/!)'/II-((i(.'i isoı"lerijilılıı cliııical "oUla.,- :\pp. ]"Iicrobiol., 23: 72:',.

3 I. Myrick B.A. and Eııner, P.N. İ i9fl2). E"ı/ııaıio'ı of ıhe lale.ı slide "gglııliııalioıı teıi .OL

irimlijıcalicıı olSla/J!ı)'loco((lı.1 nıııeur:.J. elin. :Vlicrobiol., i'ı:2F,-277.

32. Oxoid Limited. (I 986). .'lıı/ihinıic sıw:epıihili(ı' le.•l. Tcehnical informaıion. O"ioicl Li-mited. Hasingstokc, England.

33. Park C.E •. Serrano. A.D. and Landgraf, M. (I 980). A sıın'cl' ol lııicro-OllZ"lıislıılfoı

Ihemıoııııcle".Ie plOdııeliOlI .Can ..1. Microbiol .. 2(i: :i32,',3',.

34. Pennel, D.R., Rott-Petri, A.R. and Kurzynski, T.A. 19B4\. Fml""/iolı of I/ııce colll-1IleTci,,1"ggllll;'Ullirlıı ıeslıjin ıhe ideıılijıcalioıı ii!SllIj,hylorlı(ws "lIif}/S..1. Cliıı. ı'vlicrnbiol., 20 (4): iiI'! (il 7.

3':;. Poutrel, and Ducelliez. M. (I 979;.' I,'m/ıı"ıiıııı ıif linee ral,id ICltl jOl irieıııi!ic"lirm of SI"ph),ıIıCOCCllsallıeııs isolal,dFoııı Illilk. Ann. Rc"'ı. Veı .. 10: 12',-129.

36. Poutrel, B. et Lefort, B. (I 980). kIise "iil!Dilıl el Iıliimıi"ıı d'ıııı ıe"cli! seıısibi, el .I/"hle

I!DIIIla rielecıioııde In Inol"iıı,,, de SI,,/)/!r/O(ocw.• awnrs. Med. MaL. ını'., LO (I): 38.41. 37. Rayman, M.K., Park C.E., Philpott, J. and Todd, E.C. (197',). R""ISelsıııeHI of

ıhe corıgıılns" "ııd ı"eııııoslablt ııl1dr'".•e 11'11.1 ".i " 1II1'''IISo! ideıııibiııg SI"I,!ıl'loco{cııS "Uleııs.

App. l'vlicrobiol., 29: 4:',1.-4:)4.

38. Raymond, E.A. and Traub, N.H. ( i970). Ideıılifimlioıı ol 1'1"I,h),lıırIlCliisoı"ledFoııı di-Ilical ııı"'eıi,,ı. Apı'. Microlıiol., icı (G): 9 i9-')22.

39. Schanholtzek, C.J. and Peterson. L.R. (I 980\. C/iııirnl I"ho)((ıoı)' emlıınlioıı of ıhc

ıheı-lı{(Iııııde"se lesI. Amcl' ..J. elin. Path"l .. 77: ',1l7 ',91.

40. Sperber, W.H. (ı 97G~. The idf.llli/ıulliOlI of ılaı,/rvl()(ocıiiııcliııienl "ııd jiJod ıııicrubiologı' laboralmies. Criı.Rcl'. eliıı. Lah. Sci., 7, 121 124.

41. Sperber, W.H. and Tatini, S.R. (197',). IlIlfljmlalio'l ofı/ıe ıııbe magıılase Icıı/or idmıifi-((iliaıı ıif Slnl,/!vlocoecııs((ı1ir'1I1. App. :\olierobio! .. 29: '102. :,O:ı.

42. Vitkoy, M. (ı98'1). Prodııcıioıı of Pmleiıı-A /~)' Ilal,/I)'loco((i ıif b"viııe oıigiıı. V

cterinarno-meditsinski i'<aııkıı, 21 (9): 'ı2-',G.

43. Victor, R., Lachica, F.L., Weiessand, W.F. and Dibel, K.H. (1964), i?elalioTLı!ıip

aıııoııg congıılase, fıllemıııxiıı ((Iıd /ıeal-ılable deo.~)'libollllrlease Inodııcıioıı by Slal,/~ylocoalıs ammı. Apı'. ivlicrobio!., 18: 12G-127.

44. Weekman, B.G. and Cadin; B.W. (19:,7). /)eoxyriboıııır/msı' acıivi~), oj ıııimıcocci FaiLi diııical ıoıırces..1, Bacterinl., 73: 742..7:i3.

4'1. Windbold, S. and Ericson, C. (1973), Semiıi::.ed sheep red ce/Is as a ıcar/nnl/or Sıaplıylo-eorms maeııs pıoleiıı A. Ana Patho!. :Vlierobiol. Seand. S~e, B. BI: I:'ıO-I'ıG.

46. Zarzour, J.Y. and Beııe, E.A. (1978), Evalııaıimı ııj ı!ııee ıeslslnoceduresjoı idmlijicaliOlI oj Slaj'/ıylococclıs ((IatllS jrom ciiııical somees ..1. CliIl. Mierobio!., 7: ı33 .. 136.

47. Zierdt, C.H. a~d Golde, D. W. (I 970), /)co"'yriboııııc!mse-/JOsiıh'e Slaph),lorocclıs el,i-damidiı Slıııiııs. Apı', :Vlierobio!" 20 (I): '14-:,,7.