Mastitisli ineklerden izole edilen S. Aureus ve S. Intermedius suşlarının RAPD-PCR ile akrabalık derecelerinin belirlenmesi

Vet. Bil. Derg, (2005), 21, 1-2 : 65-69

MASTiTisLi iNEKLERDEN iZOLE EDiLEN S. AUREUS VE S. INTERMEDIUS

SUŞLARININ

RAPo-peR iLE AKRABALIK DERECELERiNiN BELiRLENMESi

Emine Arslan

1@

Leyla

Açık2

U. Sait Uçan

3

Determination

by

RAPD-PCR of Relationship Degrees of S.

aureus

and S.

inıermedius

Strains Isolated from Bovine Mastitls

Özet: Buçalışmanın amacı,mastitisli ineklerden izole edilen 23 S.aureusve 7 S.intermediussuşlarının RAPO-PCR (Rast -gele Çoğaitıimış Polimorlik ONA Polimeraz Zincir Reaksiyonu) yöntemi ileakrabalıkderecelerinin belirlenmesidir. RAPO-PCRsonuçlarıile elde edilen dendrogram, 10 rastgele primer ile analizedildiğindebütün izolatlar % 30'tan daha az genetik benzerfikte4 ana kümeoluşturduğunugöstenniştir.En yüksekakrabalıkderecesi %91.30 iken endüşük akrabalıkderecesi %0.44 olarakbulunmuştur.Buçalışma, ratgele primerferileyapılmışolanRAPO-PCR'ın mastitisli ineklerden izoleedilmiş S. aureusve S. intermedius suşlarının genetik akrabalığını belirfernek için başarılı bir şekilde uygulanabileceğini gös -tenniştir.

Anahtar Kelimeler: RAPO-PCR, Stalilokok,mastitis,inek

Abstract:The aim ol thisstudy was to detennine of relationshipdegree with RAPO-PCR (Random Amplilied Polymorphic ONA Polymerase Chain Reaction)method of 23 of S.aureus and 7 ol S.intennedius strains isolated Irom bovine mastitis. Oendrogram obtained by RAPO results showed that all the isolates clustered in to four-main groups at a genetic similarity of less than 30% when analyzed with 10 random primers.While the highest relationship degree was 91.30%,the lowest re-lalionship degree was found as 0.44%.This study shows that RAPO-PCR assayed with random primers can be suc -eesslully applied to assess the genetic relationship ol S.aureusand S.intermediusstrains isolated from bovine mastitis. Key Words: RAPO-PCR,Staphylococ, mastitis, bovine

Giriş

S.

aureus,

dünya çapında çeşitli ekonomik

ka-yıplarasebep olan kronik inek mastitisinin önemli bir patojenidir(Miles ve ark., 1992).

S.

aureus'un

sebep

olduğumastitisin kontrolü için çokçeşitlimetotlara ih-tiyaç duyulmaktadır (Matthews ve ark., 1992). Fe-notipik teknikler (faj tiplendirme, serotiplendirme, bi-yotiplendirme, antibiyogramlar) inek orijinli Stafilokoklar için genellikle düşük tiplendirme

ye-teneğine sahiptirler (Tenover ve ark., 1994; Matt-hews ve ark.. 1992). Son günlerde moleküler epi-demiyolojinin DNA'ya dayalı metotları iyi sonuçlar

vermiştir(Maslow ve ark.,1993; van Belkum ve ark., 1995) Bu tipçalışmalarinsan ve hayvankaynaklı S.

aureus

suşları arasında farklılık olduğunu göstermiştir

( Devriese, 1984; Hajek and Marsalek, 1971; Kapur

ve ark., 1995; Musser ve Kapur, 1992). Rastgele

ço-~altılmış polimorlik DNA polimeraz zincir reakslyonu (RAPD-PCR)

S.

aureus

izolatlarının ayrılmasında

uy-gulanmıştır(Tenover ve ark., 1994; Saulnier ve ark.,

1993; van Belkum ve ark., 1995). Hızlı ve ayıncı bir yöntem olan RAPD-PCR, S.

aureus

suşlarını içeren pekçok bakterial türlerinin genetik parmakizini Çı­

karmak içinbaşarılıbirşekilde uygulanmıştır(Maslow ve ark., 1993; Matthews ve ark., 1994; van Belkum ve ark., 1995).

Türkiye'de de S.

aureus

suşlarınınizolasyonu,

ta-nımlanması ve karakterizasyonu konusunda birçok

çalışmalaryürütülmektedir (Gündüz ve Ok, 2000; Ha-dimli ve ark., 2001; Rişvanlı ve Kalkan, 2002; Berber ve ark., 2003). S.

aureus

suşlarının tanımlanması ve karakterizasyonu endüstriyel ve bilimsel açıdan

git-GelişTarihi :22.03.2005 @:[email protected]

ı. Selç.u~Üniversitesi Fen Edebiyat Fakültesi, Biyoloji Bölümü, KONYA 2.Gazı Üniversitesi Fen Edebiyat Fakültesi,Biyoloji Bölümü, ANKARA 3.Selçuk Üniversitesi Veteriner Fakültesi. Biyoloji AnabilimDalı,KONYA

ARSLAN,AÇiK,UÇAN

tikçe dahafaZıaönem kazanmakta ve sonyıllarda bu amaçla kullanılmaya başlanan ONA'ya dayalı m0-lekuler yöntemler son derece güvenilir,basit vepahalı olmayan yöntemlerolarak deQeı1endirilmektedir. Ge-leneksel

y

önterraere

yapılan çalışmalann yanı sıra moleküler düzeydeyapılanaraştınna sonuçlannın

en-dOstriyeyansıtılmaçabalan da sOnnektedir (Manhews

ve ark.,1994, Tenover ve ark, 1994).

Bu çalışmanın amacı mastilisli ineklerden izole edilen

S

.

aureus

ve

S

.

i

nformedius

suşlan arasındaki genetik uzaklıklann RAPO·PeR yöntemi ile 00-linenmesidir.

Materyal veMetot

Stafilokoksuşları: Çalışmada, dahaönce Konya

Bölgesindenmastitisliinek sOlierinden izole ve iden-tifiyeedilenve -20°C'de saklanan 23 S.

aureus

suşu ve 7 S.

inf

ermed

ius

suşu kullanıklı. Suşlann saflık

kontrolleri

%

7 koyunkanlı agarda (BloOOAgar Base,

Oxoid)yapıklı.

RAPD-PCR Analizi: S.

aureu

s

ve S.

informad

ius

suşlarını n toplam ONA ızolasyonlan Coates ve ark. (1991)'a göreyapılmıştır.Ekje edilenONA'larrastgele primerler (OPERON teknolojiler) kullanılarak RAPO· PCRişlemlerinetabitutulmuştur (Açıkve arx., 1997). Elde edilen PCR ürünlerinin analizleri %2'lik agaroz

jel elektrotcrezl ile gerçekleştirilmiştir (Maniatis ve

atk.,1982).

Genetik Uzaklık Analizi: Elde edilenPCR

ürün-lerine aitjellerüzerinde her birsuşa ail DNA bantlan birbir1eriyle karşılaştınlarak bantlann vanlQı ve

yok-luQuna göre,sırasıyla 1 ve O olaraksayılmıştır.

pop.

GEN bilgisayarprogramı kullanılaraksuşlar arasındaki

genelik uzaklıklar hesaplanmış ve genetik uzaklık dendrogramı yapılmıştır(Nei, 1972)

Bulgular

Bu çalışmada RAPO-PCR, mastitis1i ineklerden

izole edilen 23

S

.

aureus

ve 7

S.

i

nfermedius

i zo-Iatlarının genetikakraballQını belir1emek için bir araç

olarakkullanılmıştır.

30

adet primerdenenmiş ve en iyi M13 primeri polimotnzmgöstermiştir. M13 primeri

ve dioer 9 rastgele primer (LA13, LA12, opi18, sc1023, opb08,

A2.,

B16, 86, B7) ile yapılan RAPO -PeR sonuçlanndan (şekil 1 a,b) elde edilen dend -rograma gOre(Şekil 2) 4 ana küme eldeedilmiştir. Kü -menin biri 6 alt gruptanoluşmuştur. Bu grubun birini S.

imetmeaius

3 ve S.

informed

i

us

13suşlan binikte

oluştururken, S.

infermedius

73 ve S.

i

ntermed

i

us

67

ayn ayrı başka grupları oluşturmuştur. OiQer3 S.

in-termedius

suşu (16, 71 ve 65)ise S.

au

reus

suşlan ile yakın akrabalık göstererek bir grup içinde yer a l-mışlardır. Enyüksekakrabalık derecesi

%

91.30 olur -ken S.

aureus

5 ve S.

aureus

68,S.

aureus

119veS.

aureus

120,S.

i

ntermedius

3 ve S.

i

ntermed

i

us

13,S.

aureus

8 ve S.

aureus

14suşları tamamen birbiri ile

aynı bulunmuştur, Endüşük akrabalıkderecesiise

%

0.44olarak bulunurkenS.

aureu

s

21,S.

aure

us

22 ve S.

aureus

26 dioergruplara en uzaksuşlarolarakbu -lunmuştur. DNA bantlan 200 bp ile 1500 bp ara

-sındaki büyüklüklerde~işmiştir. Özellikle M13 pn -meri ve dioer9 primerin S1afilokok suşlarının ayırımı

MastitisHİneklerde nİzoleEdilenS.Aureus•••

(') (j)

....

(y') _~

_'"

....

N N .2

....

....

....

~ "o "o ~ "o <il 41 41 41 41 "-

il

E E E E ıv "- li 4; li

.!

-'" ::J _C

:6

c c

.

.,

.

..,

.

..,

ii) ii)

Şekilla-b:Rastgele primerler ile RAPO-PCRsonuçları (DNALadder plus:3000,2000, 1500, 1200, 1031,900,800,700, 600,500,400,300,200,100bp) ...- s ..ı.reus21

...-

s

3Utô?us22 ...- saıx~ U324 ...- S.'fIIetm~diu373 ...- S",ıem>€dus67 ...- Saıırros75 ...--- ----i ...- Saııeu"60 .--_ _- "aıxws59 ...-_ _ S l1l.reUs40 Saureus21 Ssıseus12 Saıx"".LO S.eıxeus5 S aureus 69 ,.- S.'lIem"d,us76 L-- - - i . - - - - -S ;,lIermedilJs71 .--_ _S,mermedılS65 S"ı.reus124 S eureus123 Saıxeus121 S.aureos119 S ..ı.reus120 Sffllem>€dL'I53 S'rI/~iusl3 ...-_ _-':i ...u..41 S.aureos64 Saureus 24 Saı.re1J<f17 Saurt'IJs8 SaUtt'IJs14

ARSLAN,AÇiK.UÇAN

Tartışma

Epidemiyolojik çalışmalar

inek

mastitislerindeki

S

.

aUf9US suşJannın far1dıhlda.r

gOsterdiQini

ortaya

koymuştur. Davidson (1961), HoIrroerg (1974) ve

Kapur

ve

aıK. 'nın (1995) yaptı~ı çahşmaJat

sonucu

lazia sayıdafar1d1 bakteriyel tipler varolmasına ra

o-men

çOOU

enfeksiyondansıruru sayıda tıM

SOIUJW

OIdUOU

belirlenmiştir.Birtakıminsan

ve

hayvan

dOQaI

populasyonununyapısı ve genetik çeşitlilik üzerine

çaı'şrna!ar.

çOQU

tu/Ün doQada Idonland,~,"ı

gös.

termektedir.

S

.

aureus'un do{Jal populasyonlan

üze-rine çalışmalarda önemli derecede genetik

he-ıercjeree

old

UCU

saptarvnlştır (Selandar ve Musser,

1990;

Whittam,

1995). Çeşitli çalışmalarda mastitisli

irekerdençok az sayıda

S

.

au

reus

genotipler1 Izole

edilmiştir. Bu genotipikçeşitlili~in az olmasını da şu

üç

muhtemelaçıklamaya ba~lamıştır,

E

n

muhtemel

olanı S,

aureus'u

n

çiftlikdeki hayvanlar arasındaya.

yılması ve patojeninbulaşlClhOI yüzünden oluşu, bir

d~ri mastitise

sebep

olma yeteneQi ve

sonuncusu

ise suş1ann bütünüyle far1d1 olmaması günürTıOzde

mevcut

metotlan kullanarak

yeterli bir şekilde

ay-nlamamasıdır(Matthews

ve

ark.,

1994;

Lam

ve

aıK..

1996:

4Jman

ve

arx.,

1996).

My11ys ve

ar1<.

(1997) masıdisi

...._

izole

edilen

S

.

aureus

suşıarıru RAPD-PCR.

ri-botiplendirme ve biyotip&endirme ile karakterize

et

-ırVşIerdir.

Bu

çalışma,

S

.

aureus

suşları tar1d1

za-manıarda alınan aynı

Iobtan,

erdekte Iobdaki

viraaIls

suşlann devamhhOınl doOn.ıIamak

ve

teşm

me-totlannın ayırma gücünü karşılaştımısk amacıyla. ya.

pılmıştır. Bütün yöntemler kunanılarak (ticari

di

·

agnostik testleri hariç)

S

.

Bureus'

un

suşlan

tanımlanmıştır. Bunun sonucu olarak da

S.

au

reus

enfeksiyonlann ın kronikdo{ıası nedeniyleo~inaJsuş­

lar d~işmeden kaldlQı Için suşların tamamen

bir-birininaynı olduQu gözlenmlştlr, Moleküleryöntemler

deaynı sonuçları vennlştir. Moleküleryöntemler1e40

suş 6 lar1d1 genotipe aynlmışnr. Biyotiplendjrme kıs­

men RAPOve ribotjplendirme ile aynı sonuçlan

ver-miştir (Mytlys ve ark.. 1997). Lipman ve ark'mn

(1996) S.

aureus

mastrosinin epidemiyolojik

ça-Iışmasını yapmak

için

bir sürününineiderinin meme

bezierinden izole edilen

S

.

a

ureus

suş!annın iş-­

kilerini

beUrIemek

amacıyla yapıılda" çalışmada,

_

meme bezinden iz~

edilen

ıocem

71

S.

a

ureus

suşu tanımlanmış ve SlbtipIendirilrriştir. S.

aureus

suştan arasında farkl ıllO I belirlemek için kunanılan

yOnIeıner, çeş;tli primer korrbinasyorlan kullan'larak PCR

lo

çofjaItıid,ktansonra DNApofomorfizm~ ve ıa; tiplendimıesl yap'lmıştır.

SUn:i

çaı,şrna!a"nda~

S.

aureus

salgınına başlıca bir S.

aureus

suşunun

sebep

oId~unubulmJşlardır(upmanve

.r1<..

1996).

Farld,tenotiplergene

ikle,

dol)nJIuOu

vetutaı1,Iı~,

zayıf moı1okljik.kühürelve biyokimyasal teknikleri

kul·

ianarak izoIatlannteşhmn ve akrabah"ının genetik

olarak

daha

azolan izoIaUan lçennektedir (tOOOS ve ScIıIei1er. 1981).

onasanya

ve

.r1<.

(2003)'00"

yap-bldançalışmada S.

aureus

suşIa"nda~ genebk

çe-ŞiUiIi(ıin tanı'"'"' laı1dı

konak

_~ izoiallan"

kökenine ve rrotantıann c:::ıiuşuna dayandırmaldadır.

RADPmar1aı1an,S.

aureus

izo&atlanarasındaki konak

orijini,

rn.ıtasyon ve genetik varyasyon arasındaki

rniıtemel akrabalıOI gOsteımiştir ve aynı zamanda

pannakizl

ve

teşhis potansiyelini de göstermiştir.

RAPOneelde edilenDNAbantlan trp,populasyon

bi-yolojisive epidemiyolojialanlanndapratik biranlama

sahip örneklerdir. Spesifik

D

NA

bantlan konak ori-jlnleri, mutasyon ve virulans genleri ile ilişkili

ol-maktadır(WelshveMCCletland,1990).

Moleküler epidemiyolojik metottannfaydası.

bu

metotlann ayınna

g

OCO

ve

çoOa.ltma yeteneklerine

gOre

deOer1endirilmesidir. RAPD-PCR'lnayırma gCıcO

çok

daha

fazla plimer uygulanarak geliştirilebiljr.

RAPD-PCR'lnbir dezavantajifar1d1 laboratuar

ve

fark

-lı tekrisyenlere göre ço,lattma yeıeneo; scooçanrnn

deOişildikgOsIermesl ve reaksiyon şartla"nda~

de-Qişikliklere duyarlı oluşudur (Aarestrupve

are,

1995;

w~Uams

ve ark.

.

1993).

Bu çalışmada bulunan sonuçlar diğer araş­

tırmacılann bUdı..ıOU

sonuçIar1a uyun

içerisindedir.

Ancak

çol<

daha

lazIa

p

rimer1er1e

çahşdarak sta-filokokıann ayınmı

daha

iyiolacaQı kanısındayız.

Kaynaklar

~ ,F.•Wegener.H.,RosdahI,V.(1995).Evaluation

, , _and _ _ "" _ _ıog;caı

typingof5tBphy1ococcus8lJt8USisolatesfrombovinel'L'\8SO

titisinDenmark.Yel MicrobtoI.45, 139- 150.

Açık, L, Samancı,B.,

Duman..

H., ÜnaL., F. (1997). P

oIy-rnorpIıismanel ptıy10genetic relalions

among

Turkish

epe-cies in the genus Stetro6rgi8 (AmoryI/idac8ae)

as

de-larmnedbyRAPD-PCR,Tr.J.ofBotany.21,265-268.

Berbef,L,Cokmus,C.•

A1aIan.

E.(2003).Characterization

" StBphyIococcus . . - . by SOs-PAGE " _ CeII andextracelkJlarprotens.Microbiol72:1,42-47.

Coates,P.J.,dAtdame.A.J.,Kılan,G.,Kanı1o.H.O.•

s1&-m G.(1991).sin.,ıfied_ _i'"..,.,ıy;ngthe poıy.

merasec:tıaiı reactiontoI'OlAinelyfixedperafiıvaxsedion, J.Cin.Pathol,44:115-118.

~ ı. (1961). The ~ " _

mastitis.Vet.Record.73:1015-1018.

Devriese.

LA (1984). A

_ied

system lo< _

Stsphyb:occus

8Ureus

strarıs isoIaled from clfferenl:

n

mal _ _

J

.

APPI.

Bact

eriol 56

.

215-220

.

Mastitisliİneklerden İzoleEdilen S.Aureus..•

subklinik mastitis vakalarından mikotik etkenlerin i

zo-lasyonu, identifikasyonu ve çeşitli antimikotiklere du-yar1 l lı kların ı ntesbiti.Veterinarium,11:1-2:25-31.

Hadimli, H.H., _Ateş, M., Güler, L., Kav, K., Öncel, T. (2001). Mastitislisütineklerindenizole edilenStafilokokların beta-Iaktamaz aktiviteleri ve antibiyotiklere duyar1llıkları.

Vet.BiL. Derg.,17(4):21-25.

Hajek, V.,Marsalek, E (1971). The differentiation of pat-hogenicstaphylococciand a suggestion for their taxonomic

c1assification.Zentralbl.Bakteriol. Abt.i. Orig.A 217,176 -182.

Holmberg, O.(1974). PhagetypingofStaphylococcus au

-reusstrainsisolated in Sweden from bovine milk.Aeta Vet.

Scan.16:411-412.

Kapur,V.,Sischo,W.M.,Greer,R.S.,Whiltam,T.S.,Mus -ser, J. (1995). Molecular population genetic analysis of Staphylococcusaureus recovered from cows.J.Clin.Mic

-robiol.33:376-380.

Kloos, W.E , Schleifer, KH. (1981). The genus

staph-ylococcusin theprokaryotes:A handbook on habitat,

iso-lationandidentification of baeteria.Vols.1 and 2.

Lam,T.J.G.M., Lipman, L.JA, Schukken, Y.H., Gaastra,

W.,Brand,A.(1996).Epidemiological charaeteristics of bo

-vine clinical mastilis caused by Escherichiacoliand

Staph-ylococcus aureus studied by DNA fingerprinting. Am. J.

Vet. Res., 57:39-42.

Lipman,L.JA, de Nijs,A.,Lam,T.J.G.M., Rost, JA, van Dijk,L.,Schukken,Y.H.,Gaastra,W.(1996).Genotyping

by PCR of Staphylococcus aureus strains isolated from mammary glands of cows.Vet. Microbiol.48: 51-55.

Maniatis, R.; Fritsh, EF.; Sambrook, J. (1982). In

Mo-lecular Cloning:A laboratory Manual,Cold Spring Har

-bos,New York.

Maslow, J.N., Mulligan, M.E , Arbeit, R.D. (1993).

Mo-lecular epidemiology: application of contemporary tech-niquesto the typing of microorganisms.Clin. Infect. Dise.

17:153-164.

Malthews, KR., Kumar, S.J., O'Conner, SA, Harmon, R.J.,Pankey,J.W.,Fox, L.K., Oliver, S.P.(1994).Genomic fingerprints ofStaphylococcus aureus of bovine origin by polymerase chain reaetion- based DNA fingerprinting. Epi-demiol. Infect. 112:1

n

-186.

Malthews, KR., Jayarao,B.M., Oliver, S.P. (1992). Plas-mid paltem Ana/ysis of Stsphylococcus Species isolated from bovine mammary secretions. J Dairy Sci. 75(12): 3318-23.

Miles,H.,Lesser, W.,Sears.P. (1992). The economic imp-Hcations of bioengineered mastitiscontrol. J.Dairy Sci. 75: 596-905.

Musser, J.,Kapur, V., 1992.Clonal analysis of methicillin resistant Stsphylococcus aureus strains from inter-continental sources: association of the mec gene with

di-vergent phylogenetic lineages implies disseminationby

ho-rizontal transfer and recombination.J.Clin.Microbiol.30, 2058-2063.

Myllys, V., Ridell,J., Björkoth, J., Biese, 1., Pyörala, S. (1997). Persistence in bovine mastilis of Stsphylococcus

aureus clones as assessed by randem amplified po

ly-morphic DNA analysis,ribotyping and biotyping.Vet.M

ic-robiol.51:245-251.

Nei,M.(1972).Geneticdistance between population.The

AmericanNaturalist,949,283-292.

Onasanya,A.,Mignouna, H.D.,Tholtappilly, G. (2003). Ge-netic fingerprinting and phylogenetic diversity of Stap

h-ylococcus sureusisolates from Nigeria.AfrieanJ.Biotech.

2:(8), 246-250.

Rişvanlı,A.,Kalkan,C. (2002).Ineklerde Stafilokokkal ma

s-titisler üzerineçalışma.,Vet. BiL.Derg.,3-4:51-56.

Saulnier, P., Boumeix, C., Prevost, G., Andremont, A.

(1993).Random amplified polymorphic DNAassayisless discriminatory than pulsed field gel electrophoresis for

typing strains of methicillin resistant Staphylococcus au

-reus.J.Ciin.Microbiol.31,982-985.

Selander,R. K,Musser,J.M.(1990).Populationgenetics

of bacterialpathogenesis.In:Iglewski,B.H.,Clark,V.L.,

eds.Molecular basis of baeterial pathogenesis.The bac

-teria,Vol.XI San Diego:AeademicPressIne,11-36. Tenover,EC.,Arbeit,R., Archer, G.,Biddle,J.,Byme,S., Goering,R.,Hancock,G.,Herbert,GA,Hill, B.,Hollis, R., Jarvis,W.R.,Kreiswirth,B., Eisner,W.,Maslow,J.,McDo

-ugal,L.K,Miller,J.M., Mulligan,M., Ptaller,MA (1994). Comparison of traditionaland molecular methodsof typing isolates of Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol.

32:407-415.

van Belkum,A.,Kluytamans,van Leeuwen,W., Bax,R.,

Quint,W.,Peters,E.,Ruit,A.,Vandenbroucke-Grauls,C.,

van den Brule,A., Koelman,H. (1995).Multicenter eva

-Iuation of arbitrarily primed PCR for typing of Staph

-ylococcus sureusstrains.J.Clin. Microbiol.33:1537-1547.

Welsh,J.,McClelland,M. (1990). Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary·primers. Nucleic AcidsRes.24:

7213-7218.

Whiltam T. S., (1995). Genetic population structure and pathogenetics of baeteria. In: Baumberg, S., Young,

J.P.w., Wellington, E. M. H., Saunders, J. R., eds. Po

-pulation genetics of baeteria.Cambridge:Cambridge Uni

-versity Press,45-217.

Williams, J.G.,Hanafey, M.K.,Rafaiski,JA,Tingey,S.V.

(1993). Genetic analysis using random amplified poly-morphic DNA markers. Methods Enzymol. 218705-740. Zschöck, M., Sommerhauser, J., Castaneda, H. (2000).

Relatedness of Staphylococcus aureus isolates from bo-vine mammary gland suffering from mastilis in single herd. J. Dair. Rese. 67:429-435.