09-ornitobakteriyoz

ORT İnfeksiyonları

• mortalite

•

ıskarta oranları

• yumurta üretimi

•

yumurta kabuğu

kalitesi

• kuluçka verimi

•

tedavi masrafları

büyük

ekonomik

kayıplar

 Hindi ve tavuklar

Ornithobacterium rhinotracheale



Gram negatif, pleomorfik,

sporsuz, hareketsiz, çomak



In vitro üremesi yavaş

Pseudomonas türleri gibi hızlı üreyen bakteri türleri

tarafından üreme maskelenebilmekte bu nedenle de rutin incelemelerde etkenin izolasyonu gözden kaçabilmekte)

O.rhinotracheale ‘nin optimal üremesi • 37°C de,

•

• %5-10 koyun kanlı agarda, • • %5-10 CO₂’ li ortamda, • • 48 saatlik inkübasyonla

18 serotip

Serotip A-R

Serotip A, B, D, E en yaygın

• Tavuk ve hindiler duyarlı (beç tavuğu, ördek, devekuşu, kaz, sülün, keklik ve ekin kargalarında)

• Mortalite %2-11 • Genç – Ergin

• İnfeksiyon genellikle erkeklerde dişilerden daha şiddetli seyretmekte, aynı cinsiyet içinde ise besili hayvanlar daha fazla etkilenmektedir

**İnfeksiyonun

yayılmasında

en

önemli

yol

horizantal bulaşmadır

solunum yolu

**yumurtalık ve yumurtalık kanalından etkenin izole

edilmesi

yumurta yolu ile bulaşma

**Hastalığın tüm dünya üzerinde hızlı bir şekilde

Broylerlerde 4-6 haftalık yaşta *yem tüketiminde azalma *depresyon

*sinüzit

*burun ve göz akıntısı *solunum bozuklukları

*Bazı olgularda subklinik seyir Damızlık broylerlerde

*çoğunlukla 24-52 haftalık yaşta

*yumurta veriminin pik seviyede olduğu dönemde ya da yumurta üretimine girmeden hemen önce görülür

*Ölüm oranı değişken olup komplike olmamış olgularda düşüktür



Broylerlerde

• Akciğerlerde pnömoni,

• Plöritis

• Hava kesesi yangısı

• Hava keselerinde çoğunlukla “yoğurt benzeri“

ya da kaymak gibi bir eksudat birikimi



Subklinik infeksiyonlarda

Hindilerde lezyonlar

genellikle akciğerlerde

(fibrinopürülent eksudatla + akciğerlerin tek ya da çift

taraflı sertleşmesi + ödem)

Perikarditis, airsakkulitis, peritonitis, enteritis

İnfeksiyon Tavuk kolerası, İnfeksiyöz Bronşitis, Klamidyoz, Hindi rhinotracheitis, İnfeksiyöz laringotracheitis, Newcastle infeksiyonları ile karışabilir.

Kesin tanı etkenin izolasyon ve identifikasyonu

(Etken izolasyonunun infeksiyonun ilk 10 günü içerisinde daha başarılı

olduğu belirtilmiştir)

Bakteriyolojik ekim için en uygun dokular

trachea, akciğerler ve hava keseleridir

Subklinik infeksiyonlarda

Örneklerden izolasyon

%5-10 gentamisinli ve/veya

gentamisinsiz koyun kanlı agara ekimler 37o_{C de, %5-10 CO}

2 (mumlu kavanoz)

48 saat inkübasyon

İzole edilen koloniler

oksidaz testleri

Mac Conkey agarda üreme. biyokimyasal test besiyerlerine ekim

API 20 NE

API ZYM, gibi ticari test kitleri önerilmiştir RapiD NF Plus

• Serolojik tanı

ELISA ve AGP testi

• Serotiplendirme

AGP

AŞI

• İnaktif aşı Hollanda’da geliştirilmiş ve deneysel

olarak yapılan çalışmalarda genç broylerlerin inaktif

aşı ile aşılanması etkili bulunmuştur.

• Damızlıkların ölü aşı ile ve bu damızlıklardan elde

edilen civcivlerin ise yaklaşık 3 haftalıkken canlı aşı

ile aşılanmasının broylerlerde O. rhinotracheale

infeksiyonuna

karşı

en

iyi

koruma

sağladığı

bildirilmiştir

Bordetellozis

 Genç hindiler (2-6

haftalık)



Düşük mortalite & yüksek morbidite

 Okulonasal

akıntı, aksırık, solunum güçlüğü,

yüzde

şişlik, hırıltılı solunum, trakeal kollaps ve

ağırlık kaybı, üst solunum sistemi hastalığı

 Ticari hindiler oldukça

duyarlıdırlar

• Bordetella avium

Gram negatif kokobasil,

hareketli,

sporsuz,

kapsülsüz,

nonfermentatif, aerob

•

Kanlı agar, MacConkey agar, TSA, BHI

Temas, aerosol, indirekt kontak

Sindirim, solunum



İnkubasyon periyodu: 7-10 gün

• Öksürük,

•

Burun akıntısı,

•

Yüzde şişkinlik,

•

Hırıltılı solunum,

• Tüylerde kabarma,

• Durgunluk,

•

İştahsızlık,

• Depresyon

Nekropsi

• ÜSY lokalize

•

Burun deliklerinde mukoid salgı

• Sinüzit

• Laringit

• Trakeit

• Pnömoni

 Etken izolasyonu

 Serolojik testler

ELISA

IFAT

MAT

Sağaltım / Koruma

• Antibiyogram (

Tetrasiklin, Oksiterasiklin, Niasin

)

•

AŞI: İnaktif ya da aktif aşı

• Genel önlemler

İnsan ve hayvanların intestinal içerik, mide ve iç

organlarında bulunan ve birçok hastalığa neden

olduğu saptanmış helikal ya da spiral şekilli

mikroorganizmalardır.

Helicobacter pullorum

• Gram negatif,

• Sporsuz,

• Kapsülsüz,

• Monopolar k

l

fs

z

flagellaya sahip,

• Safraya dirençli,

• Hafif k

vr

ml

çomaklar

Asemptomatik etçi tavukların sekumundan,

vibrionik hepatitli yumurtacı tavukların karaciğer ve intestinal içeriğinden, gastroenteritli insanların dışkı örneklerinden

“Campylobacter Like Organism” (CLOs)

Dot-Blot DNA hibridizasyon metodu ile diger Campylobacter’lerden ayrıldığını

16S rRNA gen dizisini incelediklerini, sonuçları relatif DNA homoloji testleri ve total protein modelleriyle destekleyerek bu izolatların

Helicobacter cinsi

“Helicobacter pullorum”

1 mm çap

nda

pigmentsiz

yar

-

effaf

gri-beyaz

α-hemolitik

Marmara bölgesinin farklı illerinde yetiştirilen ve kesime

sevk edilen

96 tavuğa ait sekum ve kolon örneklerinde

H. pullorum

’ un izolasyonu ve DNA ‘sının varlığının

Örneklerin her birinden bir gram içerik ve doku kazıntısı

Birebir oranında FTS ile sulandırıldı

BHI broth (At serumu ve glukoz katkılı)

Brucella agar (%5 koyun kanı katılmış) 0.65 µm filtre bu karışımdan 150 µl

37°C 1 saat mikroaerobik

Filtre kaldırıldı, filtrat yayıldı Anaerobik jarda

Campygen kit ( % 5 CO2, % 90 N2, % 2 H2 )

Şüpheli koloniler Brucella agarda saflaştırıldı.

• Gram boyanma özellikleri,

• Katalaz ve oksidaz aktiviteleri, • Üreaz ve DNaz aktiviteleri,

• Hippurat ve İndoksil asetat hidrolizi, • Nitrat redüksiyonu,

• TSIA’ da H2S oluşumu,

• 25°C, 37°C ve 42°C de üreme özelliği,

• % 1 safra katkılı Brucella agar, % 1 glisin katkılı Brucella agar, % 3.5 tuz katkılı Brucella agar, % 7 koyun kanlı agarda üreme özellikleri

• Çeşitli antibiyotiklere duyarlılıkları saptandı. • Şüpheli izolatların identifikasyonunda kontrol

PCR –

DNA Ekstraksiyonu

PCR –

DNA Amplifikasyonu

• Her örnekten

alınan 4 µl kalıp DNA, 16 µl PCR karışımına

ilave edildi.

PCR

karışımı:

1 µl Primer R,

1 µl Primer F,

2 µl 10X Buffer,

0.8 µl dNTP,

0.4 µl MgCl2,

10.6 µl RNaz, DNaz free Distile Su,

0.2 µl Taq Polymerase

• 94°C

de

5

dakika

ön

denatürasyonu takiben,

• toplam 35 siklus 94°C de 1 dakika

(denatürasyon),

60°C

de

90

saniye (baglanma),

72°C de 90 saniye (sentez)

•

siklusların sonunda 72°C de 5

dakika final sentez

aşaması

PCR –

PCR –

Elektroforetik Separasyon ve

DNA’ n

n Saptanmas

PCR –

Sonuçların Yorumlanması

Pozitif kontrolde 447 bp moleküler ağırlığında spesifik bantın oluşumu, negatif kontrolde ise bantın olmaması yapılan PCR testinin doğruluğunu gösterdi.

Örneklerin H. pullorum spesifik DNA pozitif olarak değerlendirilmesi, 447 bp’ lik DNA bandının varlığına göre yapıldı.

İzolasyon ve İdentifikasyon Bulgular

ı

İncelenen

sekum ve kolon örneklerinden

M N P 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 M

96 tavu

un 53’ ünde (% 55.21) 447 bp’lik bantlar saptandı.

H. pullorum’

un prevalansı etçi

tavuklarda

% 55.21

Avian chlamydiosis

Evcil ve yabani kuşlarda görülen

sistemik, bulaşıcı, zoonoz, nadiren ölümcül

infeksiyondur

• kuşlarda Klamidyoz,

• insanlarda ise Psittakoz

terimi tercih edilmektedir

Kanarya ve nonpsittacine ... Ornithoz

Psittacidae fam

. kuşlarda... Psittakoz

Klamidyoz

Morfolojik formları

meydana gelirler)

1. elementer cisim (EB)

2. retiküler cisim (RB)

3. Ara cisim (IB)

 Chlamydia psittaci

 Gram negatif kokoid

 Obligat

 intraselüler bakteriler



duyarlı hücre kültürleri



embriyolu tavuk yumurtaları



laboratuvar hayvanları

Üreme

• C. psittaci

–

kümes hayvanları

– Psittacidae

familyasına ait kuşlar

muhabbet kuşları)

– Güvercinler, kumrular, kanaryalar, hindi, ördek, sülünler, su

kuşları, deniz ve sahil kuşları

infekte etmektedir

•

Sığırcık gibi kuşlar bazı tür kumrular intermitent konakçı

(bu kuşlar infekte doğal taşıyıcılarla kısa süreli temasla ara sıra infekte

olarak kısa zaman periyodu boyunca taşıyıcı olurlar ve organizmayı

*Yavruların beslenmesi sırasında anne-babadan yavruya oral, tracheal ya da nasal eksudatlarla da bulaşma olabilmekte

** indirekt olarak etkenle bulaşık yem, su, kümes ekipmanları ve yabani kuşlar da hastalığın yayılışında önemidir

BULAŞMA

Duyarlı sağlam hayvanlara etken

fekal-oral

solunum yoluyla

Vertikal bulaşma

•Yabani

hayvanların klinik bulgu göstermeden hastalığı

taşıdıkları ve diğer hayvanlara bulaştırdıkları bildirilmiştir.

•En

duyarlı hindi ve ördekler !

İnfekte hayvanlar ve portörler

dışkı ve burun akıntıları

 Çalışma : İstanbul ve yöresindeki pet kuşlarında C. psittaci varlığı

ve prevalansı saptandı.

 Dışkı örnekleri C. psittaci’nin izolasyonu ve spesifik DNA’sının

saptanması amacıyla kullanıldı.

 İzolasyon amacıyla dışkılardan hazırlanan inokulumlar altı günlük

embriyolu tavuk yumurtası sarısına inokule edildi.

 Üç kör pasajdan sonra yumurta sarısı zarlarından hazırlanan preparatlar Modifiye Gimenez boyama ve direkt FAT ile incelendi.  Dışkıda spesifik DNA’nın saptanması için PCR kullanıldı.

İncelenen 96 dışkı örneğinin 33’ü (%34.4) PCR,

21’i (%21.9) Modifiye Gimenez,

29’u (%30.2) FAT ile pozitif PCR ile pozitif saptanan 33 örnekten 28’i FAT ile,

20’si MGB ile pozitif bulundu

çalışma sonucunda kanatlı Chlamydiosis’inin prevalansının pet kuşları arasında oldukça yüksek olduğu, Chlamydial izolasyonda karşılaşılan zorluklar nedeniyle PCR’ın tarama testi olarak uygulanabileceği, pozitif olgularda gerekiyorsa izolasyon yöntemlerinin de tanıyı desteklemek amacıyla kullanılması

72 saat inokulasyondan sonra embriyolu tavuk yumurta sarısı

zarında görülen hemorajiler.

72 saat inokulasyondan sonra açılan embriyolu tavuk

yumurtalarında saptanan allantoik sıvıdaki bulanıklık.

**İnfekte evcil kuşlar, kümes hayvanları ve güvercinler insanlar için önemli infeksiyon kaynakları olup, özellikle bu hayvanlarla bir şekilde temas kuranlarda infeksiyon (Psittacosis) görülmektedir

C. psittaci kuşlardan insanlara bulaşma

nazal ya da göz sekresyonlarından

gelen

damlacıkların

ve

dışkı

tozlarının

İnsanlarda

görülebilen

semptomlar;

•

Ateş

•

Üşüme titreme

nöbetleri

•

Baş ağrısı

• Fotofobi

• Öksürük

•

Yaşamı tehdit

eden atipik

pnömoni

• pet kuş sahipleri ve üreticileri • karantina merkezinde çalışanlar • veteriner hekimler,

• veteriner teknisyenler, • laboratuvar çalışanları,

• kanatlı kesim ve işleme fabrikalarında çalışanlar,

• hayvanat bahçesi çalışanları,

• güvercin tutkunları ve yabani kuşlarla temas halindeki işçiler

Kuşlarda inkubasyon süresi....

3 gün - birkaç hafta

latent infeksiyonlarda

aktif hastalıkların infeksiyondan yıllar

sonra görülebildiği

İnsanlarda 7-21 gün,



Akut,

subakut,

kronik

ya

da

asemptomatik



Yüksek derecede virulent suşla infekte

mukopurulent nazal ve konjuktival akıntılar, sık

işeme, iştahsızlık, zayıflama, solunum güçlüğü

ve durgunluk bazılarında ishal, bazılarında

sarımsı-yeşil dışkı



Düşük derecede virulent olan suşların klinik

bulgular benzer, ama

daha hafif seyir



Asemptomatik

form

organizmanın

bulaşmasında en tehlikeli grup – dışkı ile

saçılma

Tanı

*izolasyon ve identifikasyonu