ARAŞTIRMA MAKALESİ
Subklinik mastitisli süt ineklerinden izole edilen katalaz negatif Gram pozitif kokların
identifikasyonu ve antibiyotiklere duyarlılıkları
H. Hüseyin Hadimli*, Zafer Sayın, Osman Erganiş, Kürşat Kav
Selçuk Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, 42075, Kampüs, Konya, Turkiye Geliş: 25.03.2013, Kabul: 07.05.2013
*hhadimli@selcuk.edu.tr
Özet
Hadimli HH, Sayın Z, Erganiş O, Kav K. Subklinik
mastitis-li süt ineklerinden izole edilen katalaz negatif Gram pozitif kokların identifikasyonu ve antibiyotiklere duyarlılıkları.
Eu-rasian J Vet Sci, 2013, 29, 3, 153-158
Amaç: Bu çalışmada, subklinik mastitisli süt ineklerinin süt örneklerinden izole edilen katalaz negatif Gram pozitif kok-ların (KNGP) identifikasyonu ve etkenlerin antibiyotiklere duyarlılıklarını belirlenmesi amaçlandı.
Gereç ve Yöntem: Subklinik mastitisli süt ineklerinden top-lam 104 KNGP kok izole edildi. İzolatlar koloni morfolojisi ve hemoliz özelliklerine göre seçildi ve VİTEC 2 ile identifi-ye edildi.
Bulgular: İzolatların 32’si Enterococcus faecalis (%30.76), 21’i Aerococcus viridans (%20.19), 18’i E. faecium (%17.30), 13’ü Streptococcus agalactiae (%12.50), 11’i S. uberis (%10,57), 3’ü Lactococcus garviae/lactis ssp. lactis (%2,88), 2’si L. lactis ssp. latis (%1.92) ve 1’i L. garviae (%0.96) olarak tanımlandı. Üç izolat (%2,88) ise identifiye edilemedi. KNGP kokların antimikrobiyal ajanlara karşı duyarlılıklarının fark-lı olduğu tespit edildi.
Öneri: Bu çalışma, subklinik mastitisli süt ineklerinden izole edilen KNGP kokların doğru identifikasyonlarının yapılması gerektiğini gösterdi.
Anahtar kelimeler: Gram pozitif kok, mastitis, süt ineği
Abstract
Hadimli HH, Sayin Z, Erganis O, Kav K. Identification and
antibiotic susceptibility of catalase negative Gram positive cocci isolated from dairy cows with subclinical mastitis.
Eu-rasian J Vet Sci, 2013, 29, 3, 153-158
Aim: This study was aimed to identify of catalase negative Gram positive cocci (CNGP) isolated from milk samples of da-iry cows with subclinical mastitis and to determine suscepti-bility of microorganisms to antibiotics.
Materials and Method: Totally, 104 CNGP cocci were isola-ted from dairy cows with subclinical mastitis. Isolates were selected according to coloni morphological and haemolysis properties and were identified by VITEC 2.
Results: Out of isolates, 32 (30.76%) were identified as En-terococcus faecalis, 21 (20.19%) Aerococcus viridans, 18 (17.30%) E. faecium, 13 (12.50%) Streptococcus agalactiae, 11 (10.57%) S. uberis, 3 (2.88%) Lactococcus garviae/lactis ssp. lactis, 2 (1.92%) L. lactis ssp. latis and 1 (0.96%) L. gar-viae. Three isolates (2.88%) could not be identified. The sus-ceptibilities of CNGP cocci were determined to be different to antimicrobial agents.
Conclusion: This study shown that identification of CNGP cocci isolated from dairy cows with subclinical mastitis sho-uld be performed accordingly.
Giriş
Süt ineklerinde mastitis etkenleri arasında, katalaz negatif Gram pozitif (KNGP) koklar da önemlidir (Ebrahimi ve ark 2008). Mastitise sebep olan streptokok türleri ve diğer kata-laz negatif koklar geniş bir grup oluşturmaktadırlar. Bu gru-bun üyeleri Streptococcus agalactiae (S. agalactiae) gibi bu-laşıcı patojenler ve S. uberis, S. bovis, S. dysgalactiae, Entero-coccus subsp. ve LactoEntero-coccus subsp.’ler gibi çevresel patojen-lerdir (Klimiene ve ark 2001, Maricato ve ark 2005, Wyder ve ark 2011). S. uberis, S. agalactiae ve S. dysgalactiae gibi patojenler mastitis vakalarından sıklıkla izole edilirken, En-terococcus subsp., Aerococcus viridans (A. viridans) ve viri-dans streptokoklar çoğunlukla apatojen olarak değerlendi-rilmektedir. Lactococcus garviae ise geç laktasyon dönemin-de meme içi enfeksiyonlara sebep olan fırsatçı patojendir (Devriese ve ark 1999, Rositto ve ark 2002, Metzger ve Ho-gan 2008, Walther ve ark 2008, Wyder ve ark 2011, Spako-va ve ark 2012) .
Mastitise sebep olan patojenler arasında S. agalactiae bu-laşıcı ve çoğunlukla hayvan bakıcıları tarafından tespit edi-lemeyen sublinik mastitise sebep olmaktadır. Bir sürüde S. agalactiae’nin teşhisi ve identifiye edilmesi zaman açısından önemlidir (Karahan 2005). Çünkü S. agalactiae sürü içeri-sinde hızlı bir şekilde yayılmakta ve süt veriminde ani düş-melere neden olmaktadır (Meiri-Bendek ve ark 2001, Merl ve ark 2003, Duarte ve ark 2004). Bu nedenle bir sürüde S. agalactiae’nin teşhisi ve identifiye edilmesi zaman açısından önemlidir. Günümüzde S. agalactiae sadece kontrol program-larının yetersiz olduğu sürülerde görülmekte ve antimikro-biyal ajanlarla kolayca kontrol altına alınabilmektedir (Merl ve ark 2003). S. uberis özellikle klinik mastitislerden en fazla izole edilen çevresel bir patojen olup, kuru dönemde şekille-nen mastitislerin başlıca etkenidir (Leigh 1999). S. dysgalac-tiae de çevresel bir patojenler olarak mastitise sebep olmak-tadırlar (Rositto ve ark 2002, Ebrahimi ve ark 2008). Enterokoklar, insan ve hayvanları enfekte etme yeteneğin-dedirler. Normalde süt ineklerinin sindirim sisteminde flo-rasında bulunan ve mastitislerine sebep olan fırsatçı
pato-jenlerdir. Enterokoklar, jelatinaz, agregasyon madde, kapsül formasyonu ve yüzey proteinleri dahil biyofilm ile ilişkili bir-çok virülens faktörlerinden dolayı insan ve evcil hayvanları enfekte edebilirler. İnsan ve hayvanlardan en fazla izole edi-len enterokoklar E. faecalis, E. faecium ve E. caaseliflavus’tur (Metzger ve Hogan 2008).
Laktokoklar, laktik asit bakteri grubunda olup doğal olarak çayırda, süt ineklerinin ağzında ve meme dokusunda bulun-maktadırlar. Sağım esnasında süte geçebilir ve özellikle çiğ sütten yapılan bazı peynirlerde bulunabilirler. Lactococcus garvieae (L. garviae) süt ineklerinde mastitise sebep olabilen ciddi bir balık patojenidir. Ayrıca immün sistemi baskılanmış ya da bozulmuş insanlarda septisemi, osteomyelitis ve endo-karditis gibi enfeksiyonlarla ilişkilidir. Bununla birlikte L. lac-tis apatojen olup, süt ürünlerinin üretilmesinde starter kül-tür olarak kullanılmaktadır. Süt ineklerinde mastitis ve met-ritis gibi enfeksiyöz hastalıkların önlenmesi veya tedavisi için antibiyotikler yaygın olarak kullanılmaktadır. Laktokok-lar antibiyotiklere direnç kazanabilmekte, antimikrobiyal te-davilerde canlılığını devam ettirebilmekte ve diğer bakteri-ler için antibiyotik dirençlilik genbakteri-leri için bir rezervuar ola-rak rol oynayabilmektedir (Maricato ve ark 2005, Walther ve ark 2008, Wyder ve ark 2011).
Aerococcus subsp.’ler karışık kültürlerde ve kontamine ör-neklerde sıklıkla izole edilmektedir. Ancak aerokokların inek mastitislerindeki rolleri henüz net olarak bilinmemektedir (Devriese ve ark 1999, Spakova ve ark 2012).
Bu çalışmada, mastitisli süt ineklerinin süt örneklerinden izole edilen KNGP kokların identifikasyonunun gerçekleşti-rilmesi ve izole edilen etkenlerin antibiyotiklere duyarlılıkla-rının belirlenmesi amaçlandı.
Gereç ve Yöntem
Mikroorganizmaların izolasyon ve identifikasyonları
Toplam 812 süt ineği California Mastitis Testi (CMT) ile ta-randı ve 651 CMT pozitif subklinik mastitisli süt ineklerin-den süt örnekleri alındı. Süt örnekleri kanlı agara ekildi ve 37ºC’de 24-48 saat inkübe edildi. Şüpheli izolatlar kültürel özelliklerine göre seçildi, Gram boyama yapıldı ve katalaz testi uygulandı (Alaçam ve ark 1989, Ateş ve ark 1991). Daha sonra, VITEC 2 compact (Biomerieux Inc, France) ile identi-fiye edildi. İdentifikasyon prosedürleri üretici firmanın tali-matlarına göre yapıldı.
Antibiyotik duyarlılık testi
KNGP kokların antibiyotik duyarlılık testleri; oksitetrasiklin (30 µg, Oxoid, UK), gentamisin (10 µg, Oxoid, UK), eritromi-sin (15 µg, Oxoid, UK), linkomieritromi-sin (10 µg, Oxoid, UK), klok-sasilin (5 µg, Oxoid, UK), danofloksasin (5 µg, Pfizer, USA), ampisilin (25 µg, Oxoid, UK), amoksisilin (25 µg, Oxoid, UK),
Tablo 1.
Süt ineklerinden izole edilen katalaz negatif Gram pozitif koklar.
Bakteri Streptococcus agalactiae S. uberis Enterococcus faecalis E. faecium Aerococcus viridans
Lactococcus lactis subsp. lactis L. garvieae
L. garvieae/ lactis subsp. lactis İdentifiye edilemeyen Toplam n 13* 11 32 18 21 2 1 3 3 104 % 12.5 10.57 30.76 17.30 20.19 1.92 0.96 2.88 2.88 100
amoksisilin+klavulanik asit (30 µg, Oxoid, UK), sefaperazon (75 µg, Bioanalyse, UK), penisilin G (10 U, Oxoid, UK) ve sip-rofloksasin (5 µg, Oxoid, UK), oksasilin (5 µg, Oxoid, UK), kanamisin+sefaloksin, trimethoprim+sülfametaksazol (25 µg, Oxoid, UK), linkomisin+spektinomisin (10 µg, Oxoid, UK), tularitomisin (15 µg, Oxoid, UK), enrofloksasin (5 µg, Oxoid, UK), rifamisin (30 µg, Oxoid, UK) diskleri kullanılarak disk difüzyon yöntemi ile %5 koyun kanı katılmış Mueller-Hinton agarda (Oxoid) yapıldı (Bauer ve ark 1966, NCCLS 2003). Be-siyerleri 37°C’de 48 saat inkübe edildikten sonra sonuçlar değerlendirildi.
Bulgular
Toplam 104 KNGP kok izolat; S. agalactiae (%12.50), S. ube-ris (%10.57), E. faecalis (%30.76), E. faecium (%1.30), A. vi-ridans (%20.19), L. lactis subsp lactis (%1.92), L. garvieae (%0.96) ve L. garvieae/lactis subsp. lactis (%2.88) olarak identifiye edildi. Üç izolat (%2.88) ise identifiye edilemedi (Tablo 1).
S. agalactiae izolatları; oksiterasiklin, kanamisin+sefaloksin ve oksasiline %100, amoksisilin+klavulanik asite %84.6, penisilin G ve sefaperazona %76.9, amoksisilin ve am-pisiline %69.2 ve tularitomisine %61.5 oranlarında du-yarlı bulundu. Ayrıca danofloksasin, kloksasilin, linkomi-sin, linkomisin+spektinomilinkomi-sin, enrofloksasin ve rifamisine %100, eritromisin ve trimetroprim+sülfametakzasole %84.7 oranlarında dirençli oldukları belirlendi (Tablo 2).
S. uberis izolatları; kanamisin+sefaloksin, sefaperazon, amoksisilin+klavulanik asit ve oksasiline %100, oksitetra-siklin, eritromisin, ampisilin, penisilin G, amoksisilin ve tu-laritomisine %69.2 oranlarında duyarlı bulunurken, da-nofloksasin, gentamisin, kloksasilin, enrofloksasin ve ri-famisine %100, linkomisin, linkomisin+spektinomisin ve trimetoprim+sulfametakzasole %30.7 oranlarında dirençli oldukları tespit edildi (Tablo 2).
E. faecalis izolatları; kanamisin+sefaloksin ve ok-sasiline %100, penisilin G ve sefaperazona %90.6, amoksisilin+klavulanik asite %84.3, amoksisilin, ampisi-lin ve tularitomisine %68.8, danofloksasin ve enrofloksasi-ne %53.1 oranlarında duyarlı oldukları tespit edildi. Ayrıca kloksasiline %100 ve diğer antimikrobiyal ajanlara da deği-şik oranlarda dirençli oldukları gözlendi (Tablo 2).
E. faecium izolatları; kanamisin+sefaloksin ve oksasiline %100, tularitomisine %83.3, amoksisilin+klavulanik asite %72.2, ampisilin, penisilin ve amoksisiline %61.1 oranların-da duyarlı bulunurken, kloksasiline %100 ve diğer antimik-robiyal etkenlere değişik oranlarda dirençli oldukları belir-lendi (Tablo 2).
A. viridans izolatları; oksitetrasiklin, ampisilin, peni-silin G, amokpeni-silin, kanamisin+sefaloksin, oksapeni-silin ve
amoksisilin+klavulanik asite %100 ve sefaperazona %90.4 duyarlı oldukları gözlenirken, kloksasilin, linkomisin, linkomisin+spektinomisine %100 ve diğerlerine de değişik oranlarda dirençli oldukları tespit edildi (Tablo 2).
L. lactis subsp. lactis, L. garviae ve L. lactis subsp. lactis/L. gar-viae izolatları; oksitetrasiklin, kanamisin+sefaloksin, oksasi-lin, ampisioksasi-lin, penisilin G, amoksisioksasi-lin, sefaperazon, tularito-misin ve amoksisilin+klavulanik asite %100 duyarlı bulunur-ken, rifamisin ve kloksisiline %100 dirençli oldukları belir-lendi (Tablo 2).
Tartışma
Mastitis süt inekçiliğini etkileyen önemli bir sağlık proble-midir ve süt kalitesini ve verimini etkilemesinden dolayı süt endüstrisi için ekonomik kayıplara yol açar. Ayrıca mastitis kontrol programlarında terapötik stratejilerin ve laboratuar ve veteriner hizmetleri de sütün maliyetini yükseltmektedir (Bramley ve Dodd 1984, Nyman 2007).
Teşhis laboratuarlarında streptokok türleri ve ilgili bakterile-rin identifikasyonu koloni morfolojisi, hemoliz ve rütin labo-ratuar testlerine (eskülin hidrolizi) dayanmaktadır. Bunun-la birlikte diğer streptokok türleri ve diğer KNGP kokBunun-ların ayrımı güç olmakta, tam identifikasyon için besiyerleri, kit-ler, bilgi ve zamana ihtiyaç duyulmaktadır (Maricato ve ark 2005). Farklı cins ve türde bulunan KNGP koklar genel ola-rak Streptococcus subsp. olaola-rak sınıflandırılmaktadır. Bu tür-lerin oluşturduğu mastitis vakalarının uygun şekilde kontro-lü için identifikasyonları önemli olmaktadır (Gordoncillo ve ark 2010). Wyder ve ark (2011) PCR ile mastitisli süt inekle-rinden izole ettikleri KNGP kokların 3 grup (Küme 1; Strep-tokokları, Küme 2; Lactococcus subsp., Enterococcus subsp. ve Aerococcus subsp. türleri, Küme 3; viridans streptokoklar) al-tında olduğunu bildirmişlerdir.
Mikroorganizmaların çabuk ve doğru identifikasyonu enfek-siyöz hastalıklarla mücadelede temeldir. Bunun yanı sıra me-totların kullanımının kolay ve maliyetinin düşük olması da gerekmektedir. Erken teşhis ve tedavi, hastalık ve ölüm oran-larının azaltılması ve etkenlerin saçılımı açısından çok önem-lidir (Wallet ve ark 2005, Shetty ve ark 1998). Vitek 2 sis-teminde farklı identifikasyon kartları (Florimetrik ve kolo-rimetrik) kullanılarak kısa sürede ve tam tanımlamanın he-deflendiği otomatize bir sistemdir. Sistemin zayıflığı ise iden-tifikasyon veritabanının genişliğidir. Bu sistemde bakterile-rin identifikasyonu 5.2 saat (fermentaif bakteriler) ile 6.7 saat (fermentatif olmayan bakteriler) arasında gerçekleş-mekte ve genel olarak sonuçlar gün içerisinde alınabilmek-tedir. Streptokokların identifikasyonunda florimetrik kar-ta (%87.9) göre kolorimetrik kartın (%90.9) daha iyi so-nuç verdiği belirtilmektedir (Wallet ve ark 2005). Bu çalış-mada, toplam 104 izolatın 101’ü identifiye edilirken 3 izolat ise identifiye edilemedi (Tablo 1). VITEC 2 sistem, E. faecalis izolatlarını %94-95, A. viridans izolatlarını %90-99, S. uberis
izolatlarını %86-99, E. faecium izolatlarını %99, S. agalactiae izolatlarını %85-99, L. lactis subsp. lactis izolatlarını ise %87-88 olasılıkla tanımladı. Bununla birlikte 3 izolatın L. garviae ya da L. lactis subsp. lactis olabileceğini belirtmesine rağmen tam identifikasyon gerçekleştirilemedi.
Çevresel streptokoklar ve enterokoklar sütçü sürülerde meme içi enfeksiyonun ve klinik mastitislerin önemli etken-leridir. Bununla birlikte bu patojenlerin kontrolünde kullanı-lan metotlar yeterince irdelenmemiştir (Rositto ve ark 2002, Metzger ve Hogan 2008). S. uberis, streptokoklar içerisinde en fazla karşılaşılan türdür (Leigh 1999). Enterokoklar içeri-sinde ise E. faecium ve E. faecalis sıklıkla izole edilmektedir (Wyder ve ark 2011).
Türkiye’de klinik ve subklinik mastitisli süt ineklerinin süt örneklerinden KNGP kokların izole edildiğini bildiren birçok çalışma mevcuttur (Alaçam ve ark 1989, Ateş ve ark 1991, Ak 2000, Ergün ve ark 2004, Macun ve ark 2011, Acar ve ark 2012). Bu çalışmaların çoğunluğunda KNGP koklar strepto-koklar olarak identifiye edilmişlerdir. Ak (2000) Trakya böl-gesindeki mastitisli süt ineklerinden izole ettiği 42 Strep-tococcus subsp. izolatının S. agalactiae (%27.27), S. ube-ris (%30.30), S. dysgalactiae (%24.24) ve diğer streptokok (%45.45) türleri olduğunu bildirmiştir. Ergün ve ark (2004) Hatay ilindeki süt ineklerinden izole ettikleri
streptokokla-rı S. uberis (%47.27), S. agalactiae (%27.27), S. dysgalacti-ae (%14.54) ve S. fdysgalacti-aecalis (%10.90) olarak identifiye etmiş-lerdir. Macun ve ark (2011) Kırıkkale ilindeki mastitisli süt ineklerinden izole ettikleri 22 streptokok suşunu S. uberis (%81.81) ve S. agalactiae (%18.18) olarak tanımlamışlardır. Acar ve ark (2012) Hatay bölgesinde mastitisli süt inekleri-nin süt örneklerinden izole ettikleri 17 Streptococcus subsp. izolatını S. agalactiae (%5.88), S. dysgalactiae (%47.05), S. uberis (%11.76) ve Enterococcus faecalis (%35.29) olarak identifiye ettiklerini belirtmişlerdir. Bu çalışmada subklinik mastitisli süt ineklerinin süt örneklerinden izole edilen 101 KNGP izolat; S. agalactiae (%12.50), S. uberis (%10.57), E. fa-ecalis (%30.76), E. faecium (%1.30), A. viridans (%20.19), L. lactis subsp. lactis (%1.92), L. garvieae (%0.96) ve L. garvi-eae/lactis subsp. lactis (%2.88) olarak identifiye edilmesine rağmen, 3 izolat (%2.88) identifiye edilemedi (Tablo 1). Çevresel streptokoklar sıklıkla süt ineklerinin mastitislerin-den izole edilmektedir. Bu mikroorganizmaların antibiyo-tiklere duyarlılıkları sınırlı bulunmaktadır (Rossitto ve ark 2002, Ebrahimi ve ark 2008). Rossitto ve ark (2002) 3 yıl-lık periyotta süt ineklerinin mastitislerinden izole ettikle-ri 362 adet Streptococcus subsp. türleettikle-rinin %39.9’unu S. uberis, %42.2’sini S. dysgalactiae ve %11.1’ini Enterococcus subsp. olarak identifiye etmişlerdir. Çevresel streptokoklar için referans olacak antibiyotiklere duyarlılıklarda önemli
Tablo 2. Katalaz negatif Gram pozitif izolatların antibiyotiklere duyarlılıkları.
Antimikrobiyal Oksitetrasiklin Danofloksasin K+S Oksasilin Eritromisin Kloksasilin Ampisilin Penisilin Gentamisin Linkomisin T+S Amoksisilin Sefaperazon L+S Tularitomisin Enrofloksasin A+K Rifamisin L. g ar vi ae /l ac tis su bs p la ct is n= 3 L. la ct is su bs p la ct is n= 2 L. g ar vi ae n= 1 A. vi rid an s n= 21 E. fa ec iu m n= 18 E. fa ec al is n= 32 S. ub er is n= 11 S. ag al ac tia e n= 13 n 13 0 13 13 2 0 9 10 3 0 2 9 10 0 8 0 11 0 % 100 0 100 100 15.3 0 69.2 76.9 23 0 15.3 69.2 76.9 0 61.5 0 84.6 0 n 9 0 11 11 9 0 9 9 0 4 4 9 11 4 9 0 11 0 % 69.2 0 100 100 69.2 0 69.2 69.2 0 30.7 30.7 69.2 100 30.7 69.2 0 100 0 n 4 17 32 32 8 0 22 29 10 10 10 22 29 10 22 17 27 5 % 12.5 53.1 100 100 25 0 68.8 90.6 31.2 31.2 31.2 68.8 90.6 31.2 68.8 53.1 84.3 15.6 n 9 3 18 18 8 0 11 11 0 6 0 11 6 6 15 3 13 8 % 50 16.6 100 100 44.4 0 61.1 61.1 0 33.3 0 61.1 33.3 33.3 83.3 16.6 72.2 44.4 n 21 9 21 21 5 0 21 21 2 0 5 21 19 0 14 9 21 2 % 100 42.8 100 100 23.8 0 100 100 9.5 0 23.8 100 90.4 0 66.6 42.8 100 9.5 n 2 2 2 2 0 0 2 2 0 0 0 2 2 0 2 2 2 0 % 100 100 100 100 0 0 100 100 0 0 0 100 100 0 100 100 100 0 n 1 0 1 1 1 0 1 1 0 1 0 1 1 1 0 0 1 0 % 100 0 100 100 100 0 100 100 0 100 0 100 100 100 0 0 100 0 n 3 1 3 3 1 0 3 3 1 1 1 3 3 1 3 1 3 0 % 100 33.3 100 100 33.3 0 100 100 33.3 33.3 33.3 100 100 33.3 100 33.3 100 0
farklılıklar olan sonuçlar elde edilmiştir. Test edilen mikro-organizmalar içerisinde enterokoklar en dirençli mikroorga-nizma olarak belirtilmiştir. Ayrıca insan ve hayvanlardan izo-le ediizo-len suşların duyarlılıkları bütünü iizo-le ters olduğu ifade edilmiştir (Rositto ve ark 2002). Osteras ve ark (2006) süt ineklerinden S. dysgalactiae (%1.2) ve S. uberis (%0.04) izo-le ettikizo-lerini bildirmişizo-lerdir. Ebrahimi ve ark (2008) masti-tisli süt ineklerinden izole ettikleri 42 adet streptokok izo-latının S. dysgalactiae (%35), S. agalactiae (%26), S. uberis (%18) ve Enterococcus subsp. (%4) olarak identifiye etmiş-lerdir. Akut ve subakut mastitis vakalarından izole edilen streptokok sayıları arasında farklılığın olduğunu ifade etmiş-lerdir. Bununla birlikte S. agalactiae, S. dysgalactiae, S. ube-ris türlerinin streptomisin, penisilin G ve kloksasiline karşı yüksek seviyede dirençli olduğunu belirtmişlerdir. Haguin-gan ve ark (2010) mastitisli inek sütlerinden KNGP izole et-tiklerini ve A. viridans (%3), L. lactis subsp. cremoris (%3), S. agalactiae (%3), A. urinae (%1.5), Streptococcus subsp. (%1.5), S. pyogenes (%0.5) olarak identifiye ettiklerini bil-dirmişlerdir. Klimiene ve ark (2011) mastitisli süt ineklerin-den izole edilen streptokok türleri çoğunlukla amoksisiline (%31.6) dirençli olduğunu bildirmiştir. Bu çalışmada S. aga-lactiae ve S. uberis izolatlarının kanamisin+sefaloksin, sefa-perazon, amoksisilin+klavulanik asit, oksasilin, oksitetrasik-lin, eritromisin, ampisioksitetrasik-lin, penisilin G, amoksisilin ve tulari-tomisine oldukça duyarlı bulundu (Tablo 2). Ayrıca S. aga-lactiae ve S. uberis izolatlarının danofloksasin, gentamisin, kloksasilin, enrofloksasin ve rifamisine %100, linkomisin, linkomisin+spektinomisin ve trimetoprim+sulfametakzasole yüksek oranda dirençli oldukları gözlendi (Tablo 2). Ebrahimi ve ark (2008) Enterococcus subsp. türlerinin strep-tomisin, penisilin ve kloksasiline karşı yüksek seviyede di-rençli olduğunu belirtmişlerdir. Bu çalışmada E. faecalis ve E. faecium izolatları kanamisin+sefaloksin, oksasilin, penisi-lin G, sefaperazon, amoksisipenisi-lin+klavulanik asit, amoksisipenisi-lin, ampisilin ve tularitomisine farklı oranlarda duyarlı oldukları tespit edildi. Ayrıca kloksasine %100 dirençli oldukları göz-lendi (Tablo 2).
Heleili ve ark (2012) Cezayir’de subklinik mastitisli süt inek-lerinden düşük oranda A. viridans (%1.51) izole ettiklerini ve antibiyotiklere duyarlılıklarının yüksek olduğunu bildir-mişlerdir. Slovakya’da süt ineği mastitislerinden izole edi-len A. viridans izolatları mikrobiyolojik, biyokimyasal ve moleküler tekniklerle (IGS-PCR ve rep PCR, ARDRA ve 16s rDNA gen sekanslama) ile karakterize edilmişlerdir. İzolat-ların çoğunluğunun beta-laktam antibiyotiklere dirençli ol-duğu, 3 izolatın tetrasiklin, 4 izolatın linkomisine direnç-li olduğu ve bütün izolatların neomisin ve sifrofloksasine duyarlı olduğu bildirilmiştir (Spakova ve ark 2012). Bu ça-lışmada subklinik mastitisli süt ineklerinden 32 A. viridans izole edilmiştir. İzolatların tümü oksitetrasiklin, ampisilin, penisilin G, amoksilin, kanamisin+sefaloksin, oksasilin ve amoksisilin+klavulanik asite %100 duyarlı ve kloksasilin, linkomisin, linkomisin+spektinomisine %100 dirençli
olduk-ları belirlendi (Tablo 2).
Walther ve ark (2008) süt ineklerinden izole ettikleri toplam 72 Lactococcus subsp. türlerinden 31’ini L. garvieae, 38’ini L. lactis subsp. lactis ve 3’ünü L. lactis subsp. cremoris olarak identifiye ettiklerini bildirmişlerdir. Lactococcus subsp. izo-latlarının tümünün amoksilin+klavulanik asit, enrofloksasin, gentamisin, linezolid, penisilin G, trimetoprim+ sülfametak-sazol ve vankomisine duyarlı olduğunu belirtmişlerdir. Ayrı-ca tüm L. garvieae izolatlarının klindamisine dirençli olduğu-nu ve dolayısıyla L. garvieae ve L. lactis ayrımı için bir kriter olarak değerlendirilebileceğini ifade etmişlerdir. Sonuç ola-rak patojen ve apatojen laktokoklar direnç genlerini kazana-bilmekte ve çiğ sütte bulunakazana-bilmektedir. Bu çalışmada 2 adet L. lactis subsp. lactis, 1 adet L. garviae ve 3 adet L. garviae/L. lactis subsp. lactis izole edilmiştir. Tüm Lactococcus subsp. izolatlarının oksitetrasiklin, kanamisin+sefaloksin, oksasi-lin, ampisioksasi-lin, penisilin G, amoksisioksasi-lin, sefaperazon, tularito-misin ve amoksisilin+klavulanik asite %100 duyarlı bulunur-ken, rifamisin ve kloksasiline %100 dirençli oldukları belir-lendi (Tablo 2).
Öneriler
Sonuç olarak subklinik mastitisli süt ineklerinden izole edi-len katalaz negatif tüm Gram pozitif kokların yetersiz iden-tifikasyonla streptokoklar olarak tanımlanması mastitise se-bep olan etkenlerin kontrolü ve mücadelesinde yanlış yakla-şım ve uygulamalara sebep olabileceğini göstermektedir. Bu çalışma Türkiye’de subklinik mastitis vakalarından Strepto-coccus subsp. türleri ile birlikte EnteroStrepto-coccus subsp., Lactococ-cus subsp. ve AerococLactococ-cus subsp. türlerinin de izole edilebildi-ği, dolayısıyla izole edilen KNGP kokların identifikasyonları-nın doğru yapılması gerektiğini göstermiştir.
Kaynaklar
Acar G, Yılmaz E, Solmaz H, Cantekin Z, 2012. Hatay bölgesin-de klinik ve subklinik mastitisli ineklerbölgesin-den Streptococcus ssp etkenlerinin izolasyonu ve antibiyotik duyarlılıklarının belirlenmesi. AVKAE Derg, 2, 1-5.
Ak S, 2000. Trakya yöresinde sığır mastitislerinden sorum-lu bulaşıcı ve çevresel bakteriyel etkenler ve antibiyotikle-re duyarlılıkları. İstanbul Üniv Vet Fak Derg, 26, 353-365. Alaçam E, Tekeli T, Erganiş O, İzgi C, 1989. İnek ve
mandalar-da subklinik mastitislerin tanısı, etkenlerin izolasyonu ve bunlara karşı etkili antibiyotiklerin belirlenmesi. Eurasian J Vet Sci, 5, 81-91.
Ateş M, Erganiş O, Çorlu M, Serpek B, 1991. Konya yöresinde-ki mastitisli ineklerden elde edilen süt örneklerinin mikro-biyel florası ve LDH aktivitesi. Doğa Tr Vet Animal Sci, 47, 152-157.
Bramley AJ, Dodd FH, 1984. Reviews of the progres of dairy science: Mastitis control – progress and prospects. J Dairy Res, 51, 481-512.
Devriese LA, Hommez J, Laevens H, Pot B, Vandamme P, Ha-esebrouck F, 1999. Identification of aesculin-hidrolyzing streptococci, lactococci, aerococci and enterococci from subclinical intramammary infections in dairy cows. Vet Microbiol, 70, 87-94.
Duarte RS, Mranda OP, Bellei BC, Brito MPVP, Teixeria LM, 2004. Phenotypic and molecular chracteristics of Strep-tococcus agalactiae isolates recovered from milk of dairy cows in Brazil. J Clin Microbiol, 42, 4214-4222.
Ebrahimi A, Nikookhah F, Nikpour S, Majiian F, Gholam M, 2008. Isolation of Streptococci from milk samples of nor-mal, acute and subclinical mastitis cows and determinati-on of their antibiotic susceptibility patterns. Pak J Biol Sci, 11, 148-150.
Ergün Y, Aslantaş O, Doğruer G, Cantekin Z, 2004. Hatay ilin-deki aile tipi süt sığırcılığı işletmelerinde subklinik masti-tislerin epidemiyolojisi. Eurasian J Vet Sci, 20, 25-28. Gordoncillo MJN, Bautista JAN, Hikiba M, Samago IG,
Hagu-ingan JMB, 2010. Comparison of conventionally identified mastitis bacterial organisms with commercially available microbial identification kit (BBL Crystal ID). Philipp J Vet Med, 47, 54-57.
Haguingan JMB, Gordoncillo MJN, Bautista JAN, Hikib M, Sa-mago IG, 2010. Detection and identification of bacteri-al carriage of subclinicbacteri-al mastitis cases in backyard dairy cows. Philipp J Vet Med, 47, 21-25.
Heleili N, Ayachi A, Melizi M, Kassah AL, Mamache B, 2012. Prevalence of subclinical bovine mastitis and the in vitro sensitivity of bacterial isolates in Batna Governorate, East of Algeria. J Anim Sci Adv, 26, 576-582.
Leigh JA, 1999. Streptococcus uberis: A permanent barrier to the control of bovine mastitis? Vet J, 157, 225-238. Karahan M, 2005. Mastitisli inek sütlerinden izole edilen
streptokok ve stafilokok etkenlerinde genetik polimorfiz-min araştırılması. Fırat Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Ensti-tüsü, Doktora Tezi, Elazığ, Türkiye.
Klimiene I, Ruzauskas M, Spakauskas V, Mocheliunas R, Pe-reckiene A, Butrimaite-Ambrozeviciene C, 2011. Preva-lence of Gram positive bacteria in cow mastitis and their susceptibiliy to beta-lactam antibiotics. Vet Med Zoot, 56, 65-72.
Macun HC, Pir Yağcı İ, Ünal N, Kalender H, Skarya F, Yıldırım M, 2011. Kırıkkale’de belirlenen subklinik mastitisli inek-lerde etken izolasyonu ve antibiyotik direnç durumu. Erci-yes Üniv Vet Fak Derg, 8, 83-89.
Maricato E, Lange CC, Brito MAVP, Brito JRF, Cerqueria MMOP, 2005. Chracterization and antibiotic susceptibi-lity patterns of Catalase Negative Gram Positive Cocci iso-lated from bovine mastitis in Brazil. ISAH 2005, Warsaw, Poland, pp: 54-55
Meiri-Bendek I, Lipkin A, Friedmann A, 2001. A PCR-based method for the detection of Streptococcus agalactiae in milk. J Dairy Sci, 85, 1717-1723.
Merl K, Abdulmawjood A, Lammmler C, Zschock M, 2003. De-termination of epidemiological relationship of Streptococ-cus agalactiae isolated from bovine mastitis. FEMS Micro-biol Letters, 226, 87-92.
Metzger S, Hogan J, 2008. Biofilm formation by Enterococcus species of bovine mammary gland and environmental ori-gins. The Ohio State University. Department of Animal Sci-ences Honors Theses, USA.
NCCLS, 2003. National committee for clinical laboratory standards: Performance standards for antimicrobial sus-ceptibility testing. Eighth Edition, NCCLS document M2-A8 volume 23, no 1, pp 22-23.
Nyman AK, 2007. Epidemiological studies of risk factors for bovine mastitis. Doctoral thesis, Swedish University of Ag-ricultural Sciences, Swedish.
Osteras O, Solverod L, Reksen O, 2006. Milk culture results in a large Norwegian survey-effects of season, parity, days in milk, resistance, and clustering. J Dairy Sci, 89, 1010-1023. Rossitto RV, Ruiz L, Kikuchi Y, Gleen K, Luiz K, Watts JL, Cul-lor JS, 2002. Antibiotic susceptibility patterns for environ-mental streptococci isolated from bovine mastitis in Cent-ral California dairies. J Dairy Sci, 85, 132-138.
Shetty N, Hill G, Ridgway GL, 1998. Witek analyser for routine bacterial identification and susceptibility testing:Protocols, problems and pitfalls. J Clin Pathol, 51, 316-323.
Spakova T, Elecko J, Vasil M, Legath J, Priston P, Javorsk P, 2012. Limited genetic diversity of Aerococcus viridans stra-ins isolated from clinical and subclinical cases of bovine mastitis in Slovakia. Pol J Vet Sci, 15, 329-335.
Wallet F, Loiez C, Renaux E, Lemaitre N, Courcol RJ, 2005. Per-formances of VITEK 2 colorimetric cards for identification of Gram positive and Gram negative bacteria. J Clin Micro-biol, 43, 4402-4406.
Walther C, Rossano A, Thomann A, Perreten V, 2008. An-tibiotic resistance in Lactococcus species from bovine milk:Presence of a mutated multidrug transporter mdt(A) gene in susceptible Lactococcus garvieae strains. Vet Mic-robiol, 131, 348-357.
Wyder AB, Boss R, Naskova J, Kaufmann T, Steiner A, Gra-ber HU, 2011. Streptococcus ssp. and related bacteria: The-ir identification and theThe-ir pathogenic potential for chronic mastitis-A molecular approach. Res Vet Sci, 91, 349-357.
