Para a realização da fase experimental da presente pesquisa foram utilizados os seguintes materiais, instrumentos e aparelhos:
4.1 Materiais
1- Meio de cultura Ágar Sabourand Dextrose, Cod. 7150A, produzido pela Acumedia Manufactures Inc., Baltimore, EUA
2- Quemicetina 500 mg (cloranfenicol levógiro), comprimidos revestidos, produzida pelos Laboratórios Pfizer Ltda., Jandira, São Paulo
3- Cloreto de sódio (P.A.A.C.S.), produzido pela CAQ- Casa da química Indústria e Comércio Ltda., Diadema, São Paulo
4- Ponta descartável para micropipeta, fabricada pela Gilson Inc., Middleton, EUA
5- Swab oral estéril, fabricado pela Diagnósticos Microbiológicos Especializados, Araçatuba, São Paulo
6- Lâmina para microscopia 76 mm x 26 mm, fabricada pela Knittel Gläser, Braunschweig, Alemanha
7- Lamínula para microscopia 24 mm x 50 mm, fabricada pela Knittel Gläser, Braunschweig, Alemanha
8- Álcool Etílico Absoluto, fabricado pela Labsynth Produtos para Laboratório Ltda., Diadema, São Paulo
9- Éter Etílico, fabricado pela Labsynth Produtos para Laboratório Ltda., Diadema, São Paulo
10- Xilol, fabricado pela Labsynth Produtos para Laboratório Ltda., Diadema, São Paulo
11- Solução de ácido periódico, produzida pela Sigma-Aldrich, St. Louis, EUA
12- Reativo de Schiff, produzido pela Sigma-Aldrich, St. Louis, EUA
13- Hematoxilina no 3 de Gill, produzida pela Sigma-Aldrich, St. Louis, EUA
14- Papel filtro 60 cm x 60 cm, fabricado pela Comercial Química Americana Ltda., Paulínia, São Paulo
15- Escova dental Tek, tamanho médio, cerdas duras, produzida pela Johnson & Johnson Com. e Distribuição Ltda., São Paulo, São Paulo 16- Daktarin gel Oral, bisnaga com 40 g, produzido pela Janssen-Cilag
Farmacêutica Ltda, São Paulo, São Paulo
4.2 Instrumentos
1- Espátula de aço inoxidável no 31, Duflex Ind. Brasil. Ltda., Juiz de Fora, Minas Gerais
2- Placa de Petri Pyrex® 100 x 15 mm, fabricada pela Corning Life Sciences, New York, EUA
3- Tubo de ensaio Pyrex® no9820, fabricado pela Corning Life Sciences, New York, EUA
4- Béquer graduado de 600 mL, fabricado pela Labor Quimi Vidrolabor, Poá, São Paulo
5- Béquer graduado de 1.000 mL, fabricado pela Labor Quimi Vidrolabor, Poá, São Paulo
6- Erlenmeyer graduado, fabricado pela Labor Quimi Vidrolabor, Poá, São Paulo
7- Proveta graduada de 1.000 mL, fabricada pela Labor Quimi Vidrolabor, Poá, São Paulo
8- Proveta graduada de 100 mL, fabricada pela Labor Quimi Vidrolabor, Poá, São Paulo
9- Micropipeta de 20-200 µL, fabricada pela Boeco, Hamburg, Alemanha 10- Micropipeta de 100-1.000 µL, fabricada pela Boeco, Hamburg,
Alemanha
11- Bico de Bunsen, fabricado pela OGP Produtos Odontológicos, São Paulo, São Paulo
12- Alça de Drigalsky, fabricada pela Labor Quimi Vidrolabor, Poá, São Paulo
13- Berço de vidro com ranhuras e alça de aço inox, ref. 76325 B, para coloração de lâminas de microscopia 26 mm x 76 mm, fabricado pela Comercial Química Americana Ltda., Paulínia, São Paulo
14- Cuba de vidro ref. 76323 B, fabricada pela Comercial Química Americana Ltda., Paulínia, São Paulo
15- Funil de vidro analítico liso com haste longa e ângulo de 60o, fabricada pela Comercial Química Americana Ltda., Paulínia, São Paulo
4.3 Equipamentos
1- Contador de colônias CP 600 Plus, fabricado pela Phoenix - Indústria e Comércio de Equipamentos Científicos Ltda., Araraquara, São Paulo
Modelo: CP-600 Série: 919
2- Balança de precisão, fabricada por Gehaka – Indústria e Comércio Eletro Eletrônica Gehaka Ltda., São Paulo, São Paulo
Modelo: BG 400 No 016450
3- Autoclave vertical, fabricada pela Phoenix - Indústria e Comércio de Equipamentos Científicos Ltda., Araraquara, São Paulo
Modelo : AV 60 No 6614
4- Estufa para secagem e esterilização, fabricada por Marconi Equipamentos Laboratoriais Ltda., Piracicaba, São Paulo
Modelo: MA 033 Série: 9819
5- Agitador de tubos, fabricado por Marconi Equipamentos Laboratoriais Ltda., Piracicaba, São Paulo
Modelo: A 162
Série: 8187148
6- Estufa bacteriológica, produzida por Marconi Equipamentos
Laboratoriais Ltda., Piracicaba, São Paulo Modelo: MA 0324
Série: 9819011
7- Câmara de fluxo laminar vertical, fabricada pela Pachane Indústria e Comércio Ltda., Piracicaba, São Paulo
Modelo: PA 115 No 12898
8- Microondas de dupla emissão de ondas, fabricado pela Brastemp, Manaus, Amazonas
Modelo: Sensor Crisp 27 – DES (Doublé Emission System)
9- Máquina fotográfica digital Sony, fabricada pela Sony Corporation, Tokyo, Japão
Modelo: Cyber-shot DSC-F828
10- Microscópio ótico Olympus, fabricado pela Olympus Latin America Inc., Miami, EUA
Modelo: BX 51
4.4 Métodos
4.4.1 Critérios para a seleção dos pacientes
Para a realização da presente pesquisa, foram selecionados 60 indivíduos saudáveis, entre homens e mulheres com idade entre 35 e 90 anos e portadores de estomatite protética nas áreas subjacentes às próteses totais superiores. Foram excluídos os pacientes imunocomprometidos, com endocrinopatologias não controladas, que faziam uso de antibióticos e submetidos a radio ou quimioterapia. Este estudo somente foi iniciado após a aprovação pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Faculdade de Odontologia de Araraquara – UNESP. Para participar da pesquisa, todos os pacientes assinaram um termo de consentimento livre e esclarecido específico para cada grupo de estudo e devidamente preenchido pelo pesquisador responsável. As cópias dos termos de consentimento livre e esclarecido aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Faculdade estão anexos ao Apêndice 1.
Para a seleção dos 60 pacientes, 384 indivíduos usuários de próteses totais superiores foram avaliados por um especialista em Medicina Bucal. Após a avaliação, a estomatite protética foi clinicamente diagnosticada em 74 pacientes. O diagnóstico clínico foi determinado pela presença de eritema em áreas subjacentes à base das próteses totais superiores. Os 74 pacientes foram submetidos a uma anamnese inicial que consistia apenas das questões especificamente relacionadas aos critérios de exclusão adotados para a pesquisa. De acordo com esses critérios, 5 pacientes foram excluídos da pesquisa. Para a confirmação do diagnóstico clínico de estomatite protética dos 69 pacientes remanescentes, foram realizados exames citológicos por esfregaço tanto das áreas eritematosas da mucosa palatina de cada paciente quanto das áreas da superfície interna da prótese total superior correspondentes aos eritemas. Para ser considerada como positiva, a análise microscópica dos esfregaços deveria evidenciar a presença de formas miceliais (pseudohifas e hifas), que é uma característica morfológica indicativa de infecção pelas espécies de Candida. O resultado positivo deveria ser observado em, pelo menos, uma das superfícies avaliadas (palato e prótese). O resultado positivo para os exames de esfregaço confirmou o diagnóstico clínico para estomatite protética em 60 pacientes do total de 69 avaliados. Os 9 remanescentes que apresentaram resultado negativo para a patologia em questão foram excluídos da pesquisa.