Marksist Demokrasinin Eleştirileri

3.7.1 Glicemia _{– método da glicose-oxidase (TRINDER, 1969; HALL, 2003).}

Na primeira reação, a glicose oxidase, em fase aquosa, catalisa a oxidação da glicose da amostra produzindo, ácido glucônico e peróxido de hidrogênio.

48 O peróxido de hidrogênio formado oxida a 4-aminoantipirina na presença de fenol, sob ação catalisadora da peroxidase, formando a pirilquinoneimina que absorve em 505 nm, sendo a intensidade de absorção de luz proporcional à concentração de glicose na amostra.

2 H2O2  4-aminoantipirina  fenol antipirilquinoneimina  4 H2O 3.7.2 Proteinúria – método Bradford modificado (BRADFORD, 1976).

Método colorimétrico que utiliza o corante Coomassie azul brilhante, o corante forma um complexo com a albumina e com diferentes globulinas, reagindo integralmente com todas as proteínas da urina, promovendo um deslocamento em sua banda de absorção para 545 nm.

3.7.3 Uréia urinária – método enzimático da urease (BOLLETER, et al., 1961; BERGMEYER, 1985).

A hidrólise da uréia catalisada pela urease, produz íons amônio e CO2. Uréia  H2O 2NH4+  CO2

Os íons amônio reagem com salicilato e hipoclorito de sódio em meio alcalino na presença do catalisador nitroprussiato de sódio e forma o azul de indofenol, o qual pode ser monitorado espectrofotometricamente à 600 nm.

3.7.4 Colesterol _{– método colesterol-oxidase (MROZ, 2003; RIFAI & WARNICK, 2006).}

Os ésteres de colesterol presentes na amostra são hidrolisados à colesterol e ácidos graxos livres, em reação catalisada pela colesterol esterase.

Ésteres de colesterol  H2O colesterol  ácidos graxos

O colesterol formado é posteriormente oxidado pela enzima colesterol oxidase formando colest-4-en-ona e peróxido de hidrogênio:

Colesterol  O2 colest-4en-ona  H2O2

O peróxido de hidrogênio em reação catalisada pela peroxidase, oxida a 4-aminoantipirina no presença de fenol, formando antipirilquinoneimina. A intensidade de cor da antipirilquinoneimina é proporcional à concentração de colesterol presente na amostra, determinada espectrofotometricamente em 500 nm.

49 2 H2O2  4-aminoantipirina  fenol antipirilquinoneimina  4 H2O

3.7.5 Colesterol-HDL _{– método direto por inibição seletiva (HALLORAN et al. 1999).}

O poliânion composto por fosfotungstato de sódio, 4-aminoantipirina e íons de magnésio forma complexos estáveis com a superfície das lipoproteínas de muito baixa densidade (VLDL), das lipoproteínas de baixa densidade (LDL) e dos quilomicrons. Os complexos formados com as partículas do colesterol-HDL presentes no soro não se estabilizam, ficando sujeitos à ação detergente de um segundo reagente composto por polioxietileno lauril éter, solubilizando-se e sob ação da colesterol esterase, colesterol oxidase, peroxidase e N-bis (DSBmt)-m toluidina, se, resultando em um pigmento que é diretamente proporcional à concentração de colesterol presente no colesterol-HDL da amostra.

3.7.6 Triacilgliceróis – método de acoplamento de reações enzimáticas com reações seqüenciais. Hidrolise dos triacilgliceróis, presentes no soro, catalisada pela enzima lipase, produz glicerol e ácidos graxos livres: (RIFAI & WARNICK, 2006).

Triacilglicerol + 3 H2O glicerol + 3ácidos graxos

A fosforilação do glicerol pelo ATP ocorre em reação catalisada pela gliceroquinase produzindo glicerol-3-fosfato e adenosina difosfato (ADP):

Glicerol + ATP glicerol-3-fosfato + ADP

Em reação subsequente ocorre a oxidação do glicerol-3-fosfato em reação catalizada pela à diidroxicetona e peróxido de hidrogênio:

Glicerol-3-fosfato + O2 diidroxicetona + H2O2

O peróxido de hidrogênio formado oxidada a com 4-aminoantipirina na presença de clorofenol, sob ação catalisadora da peroxidase, formando antipirilquinoneimina: A intensidade da cor da antipirilquinoneimina é proporcional á concentração de triacilgliceróis na amostra e monitorado espectrofotometricamente à 500 nm.

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3.7.7 Aspartato aminotransferase (AST ou TGO) – método enzimático acoplado de monitoramento contínuo (RIFAI; WARNICK, 2006).

A AST catalisa a transferência do grupo amino do ácido aspártico para o cetoglutarato com formação de glutamato e oxalacetato

L-aspartato + cetoglutarato oxaloacetato + L-glutamato

O oxaloacetato é reduzido a malato pela ação da malato desidrogenase (MDH), enquanto que a coenzima NADH é oxidada à NAD+.

Oxaloacetato + NADH + H+ malato + NAD+

A diminuição da absorbância em 340 nm, em função do tempo, devido a oxidação da coenzima NADH, é diretamente proporcional á atividade da AST na amostra.

3.7.8 Alanina aminotransferase (ALT ou TGP) método cinético (RIFAI; WARNICK, 2006).

ALT catalisa a transferência do grupo amino da alanina para o cetoglutarato com a formação de glutamato e piruvato.

L-alanina + cetoglutarato piruvato + L-glutamato

O piruvato é reduzido a lactato pela ação da lactato desidrogenase (LDH), enquanto que a coenzima NADH é oxidada a NAD+.

Piruvato + NADH L-lactato + NAD

A diminuição da absorbância em 340 nm, em função do tempo, devido à oxidação da coenzima NADH, é diretamente proporcional á atividade da ALT na amostra.

3.7.9 Fosfatase alcalina (ALP) – método colorimétrico (RIFAI; WARNICK, 2006).

A fosfatase alcalina do soro, em meio alcalino, hidrolisa o p-nitrofenilfosfato liberando p- nitrofenol e fosfato inorgânico, segundo a reação:

p-nitrofenilfosfato + H2O p-nitrofenol + fosfato

A quantidade produzida de p-nitrofenol é diretamente proporcional á atividade enzimática da fosfatase alcalina na amostra e monitorada à 405 nm.

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3.7.10 Glicosúria (DUBOWSKI, 1962).

Este método é baseado na reação entre uma amina aromática, a o-toluidina e o grupamento aldeído da glicose, em meio aquecido e ácido, onde há formação de glicosamina. Esta estará em equilíbrio com seu derivado de desidratação (uma base de Schiff). Foi realizada uma curva padrão para a obtenção de um fator (Figura 9).

o-toluidina + glicose glicosilamina Base de Schiff + H2O

Figura 9. Curva analítica para a determinação da glicosúria.

3.7.11 Glicogênio hepático (HASSID & ABRAHAM, 1957, AOKI, et al., 2003).

A extração do glicogênio consiste na digestão do fígado através da solução de KOH e a temperatura de 100ºC, e precipitação com etanol. O ácido sulfúrico hidrolisa o glicogênio transformando em glicose, a antrona reage com a glicose produzida, gerando um cromóforo esverdeado com absorção a 540 nm. Foi realizada uma curva padrão com glicose, obtido um fator, e calculada a concentração do glicogênio hepático (Figura 10).

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 _{R= 0,99965} Y= 0,16272

*

Absor

bânci

a

(640nm

)

Glicose (mg/mL)

52

Figura 10. Curva analítica para determinação do glicogênio hepático. 3.8 Equipamentos

Para os testes bioquímicos de: glicemia, colesterol, colesterol-HDL, TAG, AST, ALT e ALP foi utilizado o aparelho autoanalyser LabMax-240 (Labtest). As demais leituras espectrofotométricas (proteinúria, glicosúria, uréia urinária e glicogênio) foram realizadas no Espectrofômetro Femto 600 Plus. Para estas leituras, foram utilizadas cubetas de quartzo (volume de 1 mL) com 1 cm de caminho óptico.