Küresel Barış İndeksi Bağlamında Kuzey Afrika’nın Güvenlik Çalışmaları

Art. 29 - O produtor é obrigado a apresentar ao Escritório do IMA mais próximo, mensalmente, uma planilha com a produção do mês, contendo o nome e endereço do comprador, segundo modelo fornecido pelo IMA.

Art. 30 - Somente poderá exibir no produto ou em sua embalagem a classificação “QUEIJO MINAS ARTESANAL” o queijo fabricado em conformidade com as disposições deste Regulamento.

Art. 31 - O Banco de Desenvolvimento de Minas Gerais S.A.– BDMG estabelecerá programa de incentivo à produção do queijo artesanal, mediante apoio financeiro e qualificação técnica do produtor, com recursos do Fundo Estadual de Desenvolvimento Rural - FUNDERUR.

ANEXO 2

PROCEDIMENTO PARA ENUMERAÇÃO DE E. coli E COLIFORMES

Inocular e aplicar o difusor na placa de Petrifilm antes de inocular a placa seguinte.

1. Colocar a placa EC em uma superfície plana.

2. Levantar o filme superior e colocar 1 mL da amostra ou da amostra diluída no centro o filme inferior.

3. Baixar o filme sobre a amostra evitando a formação de bolhas de ar.

4. Posicionar o difusor plástico no centro da placa, com o lado liso voltado para baixo.

5. Distribuir a amostra uniformemente pressionando levemente o centro do difusor plástico. Não arrastar o difusor sobre o filme.

6. Remover o difusor e não tocar na placa durante pelo menos um minuto para deixar que o gel solidifique.

7. Incubar as placas na posição horizontal com o lado transparente para cima em pilhas de até 20 placas. A incubadora deverá estar umidificada. A perda de umidade de uma placa indica perda de peso, não deve ser superior a 15% após 48 horas de incubação.

INCUBAÇÃO

Método Oficial AOAC (991.14 Contagem de Coliformes e E. coli em Alimentos. Película Reidratável Seca).

Incubar as placas Petrifilm EC a 35º C ± 1º C por 48 ± 2 h.

Método Comitê Nórdico de Análise de Alimentos (NMKL) (146.1993).

Para resultados de Coliformes, incubar as placas Petrifilm EC a 37º C por 24 ± 2 h. Para resultados de E.Coli, incubar as placas Petrifilm EC a 37º C por 48 ± 2 h.

1. Escherichia coli – Colônias azuis acompanhadas de bolhas de gás (AOAC). 2. Coliformes – Colônias vermelhas acompanhadas de bolhas de gás (AOAC).

ANEXO 3

PROCEDIMENTO PARA ENUMERAÇÃO DE Staphylococcus aureus

1. Colocar a placa Petrifilm RSA em uma superfície plana.

2. Levantar o filme superior e colocar 1 mL da amostra ou da amostra diluída no centro do filme inferior.

3. Deslizar devagar o filme superior sobre a amostra inoculada para evitar a formação de bolhas.

4. Posicionar o difusor plástico no centro da placa.

5. Pressionar delicadamente o centro do difusor plástico para distribuir uniformemente. Não arrasta r o difusor sobre o filme.

6. Remover o difusor e não tocar na placa por pelo menos um minuto para deixar que o gel solidifique.

Tempo e Temperatura de Incubação

1. As placas de Petrifilm RSA são incubadas na posição horizontal com o lado transparente para cima, em pilhas de até 10 placas. O ambiente na estufa deverá estar umidificado. A perda de umidade de uma placa indica perda de peso, não deve ser superior a 15% durante a incubação.

2. Incubar por 24h ± 2h a 35º C ± 1º C ou 37º C ± 1º C.

3. Após 24h ± 2h de incubação, colônias podem estar presentes, mas não visíveis nas placas Petrifilm RSA porque os indicadores estão no Disco Reativo de TNAse. Transferir as placas Petrifilm RSA em pilhas de não mais de 10 placas para uma estufa com a temperatura equilibrada, a 62º C

± 2º C, e, incubar por, no mínimo, 60 minutos e, no máximo, 4 horas. Nessa etapa, há inativação das nucleases termolábeis, e as nucleases termoestáveis permanecem intactas. Caso colônias viáveis sejam necessárias para identificação posterior, estas deverão ser incubadas por, no mínimo, 60 minutos e, no máximo, 70 minutos. É importante que se as placas Petrifilm RSA não são incubadas a 62º C ± 2º C por 1-4 horas, colônias produtoras de nuclease, incluindo colônias de outros gêneros, poderão dar reação falso-positiva. As placas inoculadas deverão ser incubadas na parte central e não no fundo da estufa, uma vez que temperaturas excessivas podem interferir no desempenho das placas Petrifilm RSA.

4. Após um mínimo de 60 minutos e um máximo de 4 horas, as placas são retiradas da estufa.

5. Retirar do pacote uma moldura quadrada contendo o Disco Reativo de TNAse, tomando cuidado de não tocar no disco redondo.

6. Para prevenir contaminação do Disco Reativo de TNAse, segurar com uma mão o disco redondo usando uma pinça estéril e retirar a moldura com a outra mão. Descartar a moldura. Levantar o filme superior da placa e colocar um Disco Reativo de TNAse na parte rebaixada da placa.

(Nota: O desempenho da placa Petrifilm RSA não é afetado pela separação do gel quando se levanta o filme superior. A reação da nuclease termoestável é claramente visível porque o Disco Reativo de TNAse é ativo em ambos os lados).

7. Abaixar o filme superior.

8. Para garantir contato uniforme do Disco Reativo de TNAse com o gel e para eliminar bolhas de ar, pressione levemente a área correspondente ao disco

reativo. Isto pode ser feito aplicando-se um bastão de vidro em “l”. Esse procedimento permitirá o contato completo entre o Disco Reativo de TNAse e o gel eliminará as bolhas pelas bordas do disco.

9. Colocar as placas contendo ao Disco Reativo de TNAse em uma estufa a 35º C ± 1º C ou 37º C ± 1º C por no mínimo 60 minutos e no máximo 3 horas. Nota: Uma vez que as bactérias têm comportamentos variáveis, a reação de termonuclease pode ser visível em apenas 30 minutos. A observação periódica das placas poderá permitir a obtenção de resultados antes de 3 horas.

10. Uma vez retirada as placas da estufa, a leitura dos resultados deverá ser feita em até 1 hora.

Colônias cinzas com halo rosa enumerar como sendo Staphylococcus aureus. Placa 2 - sem contaminação. Placa 5 – contaminada.

ANEXO 4

PROCEDIMENTO PARA O TESTE REVEAL – Salmonella sp

1. Rehidratar o meio de pré-enriquecimento REVIVE com 200 mL de água estéril. 2. Adicionar 25g de amostra. Incubar a 37o _{C por 4 horas.}

3. Rehidratar o meio Rappaport ou Selenito Cistina com 200 mL de água estéril. 4. Adicionar todo o conteúdo do pré-enriquecimento em 200 mL do Caldo.

Rappaport ou Selenito Cistina. Incubar a 37º C por 16 horas.

5. Retirar da incubadora e transferir com uma pipeta ± 10 mL deste caldo para um tubo de ensaio.

6. Aquecer em banho-maria à ± 100º C por 10 minutos.

7. Adicionar 5 gotas da amostra na porta do mecanismo-teste (o dispositivo deverá estar em temperatura ambiente).

8. Fazer a leitura e reportar os resultados após 15 minutos.

Negativo: Linha vermelha em C e não aparece linha vermelha em T. Positivo: Linha vermelha em C e T.

C

C

ANEXO 5

PROCEDIMENTO PARA O TESTE REVEAL – Listeria sp

1. Adicionar 25 g da amostra no Caldo Half Fraser Plus já hidratado com 225 mL de água estéril (o suplemento já vem dissolvido no meio de cultura). Incubar á 30º C por 21-24 horas.

2. Transferir 0,1 mL do pré-enriquecimento para 10 mL do Caldo Tamponado de Enriquecimento Listéria (BLEB). Incubar a 30º C por 21-24 horas.

3. Coletar 2 mL do enriquecimento seletivo em um tubo de ensaio. 4. Aquecer à 80º C por 20 minutos. Resfriar a temperatura ambiente. 5. Adicionar 6 gotas da amostra no dispositivo.

6. Faça a leitura do resultado com 15 ou no máximo 20 minutos.

Negativo: Linha azul em C e não aparece linha azul em T. Positivo: Linha azul em C e T.

C

T