118 Apoptozis-Hücre Döngüsü - İnsan adipoz dokusundan mezenkimal kök hücrelerinin eksplant kül

119

RT-PCR

120

S24

Yeni bir multi duvarlı karbon nanotüp tabanlı yapı iskelesinin insan meme kanseri hücre hattı (mcf-7) üzerine biyouyumluğunun incelenmesi

Pınar Kılıçaslan Sönmez1_{, Mahmud Özkut}1_{, Eser Metin Akinoglu}3_{, Cengiz Kurtman}4_{, Michael}

Giersig5_{, Sevinç İnan}1_{, Kemal Özbilgin}1

1_{Celal Bayar Üniversitesi Tıp Fakültesi, Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı} 2_{Freie Universität Berlin, Department of Physics, Berlin, Germany}

3_{Max Planck Institute of Colloids and Interfaces, Potsdam-Golm, Germany} 4_{Ankara University, School of Medicine, Ankara, Turkey}

5_{Poznan University of Technology, Poznan, Poland}

Yapı iskelesi uygulamaların hücre kültürü çalışmalrında kullanılması doku mühendisliğinin yeni konuları arasındadır. Multi (Çoğul) Duvarlı Karbon Nanotüp tabanlı nanostrüktürel yapı iskelesi yeni üretilen bir biyo malzeme olup, hücre kültürü çalışmalrında etkileri bilinmemektedir. Bu çalışmada, Multi Duvarlı Karbon Tabanlı Nanostrüktürel Yapı İskelesinin insan meme kanseri hücrelerinde (MCF-7) biyouyumluluğunu göstermeyi amaçlandı.

MCF-7 insan meme kanseri hücreleri, 10% FBS, 1% L-Glutamin, 1% Penisilin-Streptomisin içeren kültür vasatında çoğaltıldı. Hücrelerin materyal üzerine ekiminden önce MDKNT tabanlı yapı iskelesi 3 defa distile su ile yıkandı. Daha sonra etilen oksit uygulaması ile sterilize edildi. 12 gözlü hücre kültür plağının bir gözüne MDKNT tabanlı yapı iskelesi, diğer bir gözüne silikon referans materyali yerleştirilerek her birinin üzerine konfluent monolayer elde etmek amacıyla 1 x105 adet hücre ekildi. Kültür vasatı gün aşırı değiştirildi ve 1 hafta sonra deney sonlandırıldı. Elde edilen hücrelerin yarısı immunhistokimyasal boyama yapılmak üzere kazıma yöntemiyle alındı. Hücreler santrifüjden geçirilerek damla metoduyla lam üzerine alındı. Materyallerin yüzeyinde kalan hücreler tarama elektron mikroskobu görüntüsü alınmak üzere gluteraldehit ile fikse edildi.

Yapılan TEM analizinde MDKNT tabanlı yapı iskelesi hücrelerin yaygın olarak çoğaldığı gözlendi. Proliferasyon, migrasyon ve metastaz kabiliyetini karşılaştırmak amacıyla immunhistokimyasal yöntemlerle yapılan boyamada PI3K, AKT ve NF-KB antikorlarında herhangi anlamlı bir fark saptanmadı.

MDKNT tabanlı yapı iskelesinin meme kanseri çalışmaları için biyouyumlu olduğu tespit edildi ve MDKNT tabanlı yapı iskelesinin doku mühendisliği ve diğer biyomedikal uygulamalar için

kullanılabileceği sonucuna varıldı.

121

A novel multi walled carbon nanotube based scaffold and its biocompatibility in human breast adenocarcinoma cells

Pınar Kılıçaslan Sönmez1_{, Mahmud Özkut}1_{, Eser Metin Akinoglu}3_{, Cengiz Kurtman}4_{, Michael}

Giersig5_{, Sevinç İnan}1_{, Kemal Özbilgin}1

1_{Celal Bayar Üniversitesi Tıp Fakültesi, Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı} 2_{Freie Universität Berlin, Department of Physics, Berlin, Germany}

3_{Max Planck Institute of Colloids and Interfaces, Potsdam-Golm, Germany} 4_{Ankara University, School of Medicine, Ankara, Turkey}

5_{Poznan University of Technology, Poznan, Poland}

The application of bioengineered scaffolds is recently one of the crucial factors in tissue

engineering. Multi Walled Carbon Nanotube based nanostructurel scaffold (MWCNTs) is a novel biomaterial and its effects in cell culture studies are not known yet. In this study we aimed to show biocompatibility of MWCNTs in human breast cancer cell line (MCF7).

MCF-7 human breast cancer cells were cultered in cell culture medium RPMI 1640 containing 10% FBS, 1% L-glutamine, 1% penicillin-streptomycin. MWCNT based scaffold was washed with distilled water three times before the seeding cells onto the material. After that they were sterilized using the application of ethylene oxide. MWCNT based scaffold was placed on one well of 12-well cell culture cluster and silicon reference was placed on another well and 1x105 cells were seeded on wells to obtain a confluent monolayer. The culture medium was changed every other day and one week after the experiment was terminated. The half of the incubated cells were collected by scraping for immunohistochemical staining. The cells were centrifuged and put on slides using drop method. Remaining cells on the surface of materials were fixed with glutaraldehyde to be imaged by scanning electron microscope.

SEM analysis of cells which are cocultured with MCWNT-based scaffold were found to proliferate widely. The results of immunohistochemical staining of cells with PI3K, AKT ve NF-KB primary antibodies showed that there was no significant difference between groups compared to their ability of proliferation, migration and metastasis. These results demonstrated that the MCWNT based scaffold is biocompatible for breast cancer studies so MWCNT based scaffold and these properties made it to plausible potential candidate for tissue engineering or other biomedical applications.

122

S25

Neonatal farede kardiyak rejenerasyon mekanizmalarinin araştırılması

Doğacan Yücel1_{, Galip Servet Aslan}1_{, Semih Arbatlı}1_{, Raife Dilek Turan}1_{, Merve Aksöz}1_{, İlkem}

Emrah Nikerel1_{, Bayram Yılmaz}2_{, Alev Cumbul}3_{, Ünal Uslu}3_{, Remziye Döğer}1_{, Fatih Kocabaş}1 1_{Yeditepe Üniversitesi, Genetik ve Biyomühendislik Bölümü, İstanbul}

2_{Yeditepe Üniversitesi, Fizyoloji Ana Bilim Dalı, İstanbul}

3_{Yeditepe Üniversitesi, Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı, İstanbul}

Neonatal farede kardiyak rejenerasyon mekanizmalarinin araştırılması

Doğacan Yücel¹, Galip Servet Aslan¹, Semih Arbatlı¹, Raife Dilek Turan¹, Merve Aksöz¹, İlkem Emrah Nikerel¹, Bayram Yılmaz², Alev Cumbul³, Ünal Uslu³, Remziye Döğer¹, Fatih Kocabaş¹,* ¹Genetik ve Biyomühendislik Bölümü, Mühendislik Fakültesi, Yeditepe Üniversitesi, İstanbul, Türkiye

²Fizyoloji Bölümü, Tıp Fakültesi, Yeditepe Üniversitesi, İstanbul, Türkiye

³Histoloji ve Embriyoloji Bölümü, Tıp Fakültesi, Yeditepe Üniversitesi, İstanbul, Türkiye *fatih.kocabas@yeditepe.edu.tr

Son yapılan çalışmalara göre, memeli neonatal kalbinin yaralanma sonrasında tamamiyle

yenilenme kapasitesi olduğu belirlenmiştir. Ancak bu olağanüstü rejenerasyon kapasitesi, farenin doğumundan 7 gün sonra önemli ölçüde azalmaktadır [1]. Bu değişim, kardiyomiyosit bölünmesinin durmasıyla ve yetişkin memelilerde kalp krizi sonrası fibrotik doku oluşmasıyla da gözlemlenebilir. Yakın tarihte Meis1 geninin kardiyojenik faktör olarak belirlenmesi ve neonatal fare modelinde kardiyomiyosit bölünmesi açısından önemi tarafımızca kanıtlanmıştır [2, 3]. Ancak, neonatal kardiyak rejenerasyonunun altında yatan diğer moleküler mekanizmalar henüz bilinmemektedir. Bu çalışmada, tarafımızca belirlenmiş olan ve kardiyomiyosit bölünmesinde görev alması olası

kardiyojenik faktörlerin, kalp rejenerasyonundaki görevlerini incelenmiştir. Seçilen genlerin kalpte ve spesifik olarak kardiyomiyositlerdeki gen anlatımlarının varlığı belirlenmiştir. Buna ek olarak, neonatal farede kalp rejenerasyonu sırasında Innp5d, Dnmt3a, c-Myc ve Cbl genlerinin

anlatımlarının azaldığı da gözlemlenmiştir. Bu duruma paralel olarak, 7 günlük rejenerasyon kapasitesini kaybetmiş farede bu dört genin anlatımlarında artış görülmüştür. Elde ettiğimiz bu veriler Inpp5d, Dnmt3a, c-Myc ve Cbl genlerinin kardiyomiyosit bölünmesinde negatif rol oynayan faktörler olabileceği ve kalp rejenerasyonunu sağlamak amacıyla hedef alınabileceğini

göstermektedir. Referanslar:

1) Enzo R. Porrello, Ahmed I. Mahmoud, Emma Simpson, Joseph A. Hill, James A. Richardson, Eric N. Olson, and Hesham A. Sadek. "Transient regenerative potential of the neonatal mouse heart." Science 331, no. 6020 (2011): 1078-1080.

2) Fatih Kocabas (co-first author), Ahmed I Mahmoud, Shalini A. Muralidhar, Wataru Kimura, Ahmed S. Koura, Suwannee Thet, Enzo R. Porrello, and Hesham A. Sadek. Meis1 regulates postnatal cardiomyocyte cell cycle arrest. Nature 497, no. 7448 (2013): 249-253.

3) Fatih Kocabas, Ahmed I Mahmoud, Shalini Muralidhar, Suwannee Thet, Enzo R. Porrello, Eric Olson, and Hesham A. Sadek. Meis1 is a key regulator of post-natal cardiomyocyte cell cycle arrest. Basic Cardiovascular Sciences 2012 Scientific Sessions, New Orleans, Louisiana, USA (July 23-26, 2012). Circulation Research. 111(4_MeetingAbstracts) Supplement 1, July 20, 2012. Teşekkür: Bu çalışma Türkiye Bilimsel ve Teknolojik Araştırma Kurumu tarafından

desteklenmektedir (TÜBİTAK) [destek numarası 115S185]. Doğacan Yücel’in kendisi de TÜBİTAK- BİDEB 2209A programı tarafından desteklenmektedir.

Anahtar Kelimeler: Kardiyak rejenerasyonu, Kardiyojenik faktörler, Kardiyomiyosit bölünmesi, Hücre biyolojisi

123

Analysis of underlying molecular mechanisms of neonatal cardiac regeneration Doğacan Yücel1_{, Galip Servet Aslan}1_{, Semih Arbatlı}1_{, Raife Dilek Turan}1_{, Merve Aksöz}1_{, İlkem}

Emrah Nikerel1_{, Bayram Yılmaz}2_{, Alev Cumbul}3_{, Ünal Uslu}3_{, Remziye Döğer}1_{, Fatih Kocabaş}1 1_{Department of Genetics and Bioengineering, Yeditepe University, Istanbul, Turkey}

2_{Department of Physiology, Yeditepe University, Istanbul, Turkey}

3_{Department of Histology and Embryology, Yeditepe University, Istanbul, Turkey}

Analysis of underlying molecular mechanisms of neonatal cardiac regeneration

Doğacan Yücel¹, Galip Servet Aslan¹, Semih Arbatlı¹, Raife Dilek Turan¹, Merve Aksöz¹, İlkem Emrah Nikerel¹, Bayram Yılmaz², Alev Cumbul³, Ünal Uslu³, Remziye Döğer¹, Fatih Kocabaş¹,* ¹Department of Genetics and Bioengineering, Faculty of Engineering, Yeditepe University, Istanbul, Turkey

²Department of Physiology, Faculty of Medicine, Yeditepe University, Istanbul, Turkey

³Department of Histology and Embryology, Faculty of Medicine, Yeditepe University, Istanbul, Turkey

*fatih.kocabas@yeditepe.edu.tr

Neonatal mammalian heart has recently been shown to possess the capacity to regenerate

completely after injury. This remarkable regenerative capacity is lost after postnatal day 7 [1]. This transition has been marked with cardiomyocyte cell cycle arrest and induction of fibrotic response similar to what occurs after myocardial infarction in adults. We have recently outlined the function of Meis1 as a new cardiogenic factor that plays a pivotal role in neonatal cardiac regeneration [2,3]. However, underlying molecular mechanisms of neonatal cardiac regeneration and other cardiogenic factors remained elusive. Here, we investigated the involvement of novel putative cardiogenic factors in neonatal cardiac regeneration and cardiomyocyte cell cycle withdrawal. We have confirmed their expression in the heart and cardiomyocytes. We have shown that expressions of Inpp5d, Dnmt3a, c-Myc and Cbl are significantly downregulated during neonatal cardiac

regeneration process. Intriguingly, these four factors are upregulated in non-regenerative period of 7-day old mice after injury. Taken together, our findings suggest that Inpp5d, Dnmt3a, c-Myc and Cbl may be involved in the regulation of cardiomyocyte cell cycle progression and represent new targets for induction of cardiac regeneration.

References:

3) Fatih Kocabas, Ahmed I. Mahmoud, Shalini Muralidhar, Suwannee Thet, Enzo R. Porrello, Eric Olson, and Hesham A. Sadek. Meis1 is a key regulator of post-natal cardiomyocyte cell cycle arrest. Basic Cardiovascular Sciences 2012 Scientific Sessions, New Orleans, Louisiana, USA (July 23-26, 2012). Circulation Research. 111(4_MeetingAbstracts) Supplement 1, July 20, 2012. Acknowledgments: This study is funded by The Scientific and Technological Research Council of Turkey (TÜBİTAK) [grant-no 115S185]. DY has been supported by TÜBİTAK-BİDEB 2209A program.

124

Belgede İnsan adipoz dokusundan mezenkimal kök hücrelerinin eksplant kültür tekniğiyle i̇zolasyonu (sayfa 126-132)