Fonksiyonlarına Göre Vektör Tipleri

Fonksiyonlarına Göre Vektör Tipleri

Promotor sonda vektörleri

Terminatör sonda vektörleri

Salgı sinyal vektörleri

Klon vektörleri

İfade vektörleri

Kromozomal entegrasyon vektörleri

Pazmid vektör+

Klonlanacak DNA parçası

DNA

ilavesi Rekombinant plazmid

Bakteri hücresine aktarım ve seçim

(amfisilin direç)

Amfisilin içeren

ortamda gelişen hücre

Bacterial chromosome

Bağımsız plazmid

replikasyonu Hücre

Çoğalması

Klonlanan DNA’nın Çoğaltılması ve Rekombinant Hücrenin Seçimi

Amp R

Amp R.

ORI

ORI

Amfisilin içeren ortamda gelişemeyen hücre

Amfisilin direnç ? + + Tetrasiklin direnç ? - +

B X B

B

B X Amp^r

ori Amp^r

Tc^r

ori

pBR322

Amp^r Tc^r

ori

İki antibiyotik dirençlilik durumunda insersiyonel İnaktivasyon

İki antibiyotik dirençlilik durumunda insersiyonel

İnaktivasyon

Replica plating (Eş ekim) yöntemi (eleme)

+amfisilin + amfisilin

+ tetrasiklin

Bu koloniler rekombinant plazmidi içermektedir

Transformasyondan sonra hücreler önce amfisilin içeren ortama ekilir

Amfisiline dirençli koloniler 2. Aşamada tetrasiklin

içeren ortama ekilir

Replica plating (Eş ekim) yöntemi (seçme)

Transforme edilen hücreler tetrasiklin ve sikloserin bulunan ortama aktarılır.Tetrasiklin duyarlı hücreler ölmez, ancak çoğalmaları engellenir (bakteriyostatik etki). Tetrasiklin dirençli hücreler gelişir ancak bu hücreler de sikloserin etkisiyle öldürülür. Bu ortamdaki hücreler daha sonra amfisilin içeren ortama aktarılır. Burada gelişen koloniler amfisilin dirençli ve tetrasiklin duyarlıdır(

dolayısı ile yalnız rekombinant plazmidi içerirler)

Amfisilin içeren besiyerinde gelişen Rekombinant koloniler