Başlık: İNSAN VE çEşİTLİ HAYVAN KAYNAKLI STAFİLOKOK SUŞLARININ PROTEİN-A OLUŞTURMALARı ÜZERİNDE BİR ARAŞTIRMAYazar(lar):AKAY, Ömer;OCAK, İbrahim;İZGÜR, Müjgan;ARDA, Mustafa;AYDIN, Nejat;SULTAN, Nedim;AYDIN, NedretCilt: 32 Sayı: 3 DOI: 10.1501/Vetfak_00000

A. V. Vet. Fak. Derg.

32 (3) : 401-412, 1985

İNSAN VE çEşİTLİ HAYVAN KAYNAKLI STAFİLOKOK SUŞLARININ PROTEİN-A OLUŞTURMALARı ÜZERİNDE BİR ARAŞTIRMA

Ömer Akay] İbrahim Ocak

2

Müjgan İzgür'

Mustafa Arda

4

Nejat Aydın

5

Nedim Sultan

6

Nedret Aydın?

An investigation on the pı'oduction of Protein-A by staphylococci of human and various animal origin

Sumnıary: The aim of this study is to investigate the protein A

pro-duetion eapaeities of staphyloeoeei strains of different origin (human and

ani-mals).

In this study, 189 Staph. aureus and 248 Slaph. epidermidis from

lll/man,. 97 Staph. aureus and 43 Staph.epidermidis from bovine; 53 Staph.

aureus and

7

Staph.epidermidis from avian, and

25

Staph.epidermidis

strains

from

ovine sources were tested b.J'passive haemagglııtination test using

sensi-ti<.ed sheep red blood eells on slide.

To identijy the staplıyloeoeei, the 1'Ouıine tests were used for the

follo-wings:

eoagulase, clıımpiııg faetor,

DNase,

0/

F glucose and mannitol. Of

662 staphyloeoeei straiııs tested, 339 were identijied as Staph.aureus and the

rest (323) was Staph.epidermidis. Protein A was produeed by 162 out oj 339

,')'taph.aurcus, but no produetion was observed by Staph.epidermidis

strains.

Amol/g 189 human and 97 bouz'neisolates of Staph.aureus, 118 (62.4%)

and 44(45.3%)

were positive for

the protein A respeetivery. But, n017eof

the 25 avian strains showed positive reaetion in the same test.

These results shou"cd that protein-A

test can be used as an aeeessoıy

to others to identU) the pathogenie staph]loeocci.

Özet: Bu çalışmada,

insan orijinli

189 Staph.aureus

ve 248 Staph.

epidermidis,. sığır/ara ait 97 Staph.aureus

ve 43 Staph.epidermidis,.

kanat-i Doç. Or., A.ü. Veteriner Fakültesi, Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Ankara. 2 Dr., Gülhane Askeri Tıp Akademisi, Mikrobiyoloji Bilim Dalı, Ankara.

:~ Yrd. Do~'. Dr., A.U. Veteriner Fakültesi, Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Ankara. ,i. Prof. Dr., A.L. Veteriner Fakiıltesi, ~1ikrobiyoıoji Anabilim Dalı, Ankara . .1 Do';' Dr., A.t:. Veteriner Fakültesi, :'v1ikrobiyoloji Anabilim Dalı, Ankara.

(j Araş. Gör., G.l:. Tıp Fakültesi, Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, Ankara. 7 Uznı. Vet. Hek., Etlik Vet. Kont. Araşt. Enstitüsü, Ankara.

402 Ö. Akay - İ. Ocak - M. İzgür - M. Arda - N. Aydın - N. Sultan - N. Aydın

lı kaynaklı

53

Staph. aureus ve

7

Staph.epidermidis

ile ko)'unlardan i;:,ole

edilen 25 Staph.epidermidis

suşlarının sensihili;::e koyun

al:J'uvadarı

kulla-narak [(im ü;:,erinde, hemaglutinasyon testi ile protein A oluşturmaları

ince-lenmiştir.

hole

edilen stafilokokları

identifikaS)'onda, standart testlerden,

koagu-la;::, clumpi17g faktdr,

DNase,

0/

F gliko;:: ve mannitol fermentasyon

de-neyleri yapılmıştır.

To/ılam

662

staji'tokok suş~nda17

339

tanesi Staph.aureus

ve 323 adedi de Staph.epidermidis

olarak identifiye edilmiştir.

İnsan ve çeşitli hayvan türlerinden i;::oleedilen

339

Staph.aureus

suşun-dan 162 sinin protein A oluşturduğu, buna karşın Staph.epidermidis' lerden

hiç birinin protein A meydana getirmediği saptanmıştır.

lnsan orUinli

189

Staph.aureus'dan

IIS'inin

(%

62.4)

ve

97

sığıda-ra ait Staph.aureus suşundan 44 ünün

(%

45.3) protein A sente;::ledikleri,

ancak 53 kanatlı i;:,olatıııın ise bu yönden negatif olduğu belirlenmiştir.

Bu çalışmadan alınan sonuçlara göre indirek hemaglutina.~yon testi

kul-lanılarak protein A saptanmasının

dile

i'

testlere )lal'dırncı olarak, pat~jenik

stafilokokların

identifikasyonunda

değerli olacağı anlaşılmıştır.

Giriş

Stafilokok

suşlarından

patojenik

olanları

belirlemek

için

bir

çok kriterler

kullanılmaktadır.

Bunlar

arasında

koagulaz,

DNase,

termonukleaz,

glikoz-mannitol

anaerob

fermentasyon

gibi

testler

bulunmaktadır.

Protein-A(Sp

A), bazı Staph.aureus

suşlarının

protein

karakte-rinde ve antijenik

spesifiteye sahip olan bir komponentidir.

Öncele-ri, insan ve tavşan

serum globulinleri

ile Protein-A'nın

vermiş

ol-duğu reaksiyon,

bir antijen-antikor

birleşmesi olarak göz önüne

alın-mış, ancak,

Forsgren ve Sjöquist (6)'ün araştırmalarıyla

bunun

pse-udo-immun

bir reaksiyon olduğu gösterilmiştir.

Bu araştırıcılara

göre,

Protein-A,

bir immunglobulin-G(Ig

G) molekülünün

Fe- kısmı ile

reaksiyon

vermekte,

Fab-kısmı

ile bağlantı

yapamamaktadır.

Bu

bulgular

diğer

araştırıcılar

(4, 7, 12, 13, 17)

tarafından

da

doğ-rulanmıştır.

Hücre

yüzeyindeki

Protein-A'nın

ortaya

konulması

taksonamik

bir önem taşır. Zira,

bu antijen,

Staph-aureus suşları için spesifiktir

ve aynı zamanda

epidemiyolojik

olarak bir önemi de vardır.

Çünkü,

bu antijen temel olarak insan orijinli suşlarla ve hayvanlardan,

özel-likle,

sığır

kaynaklılarda

çok daha

fazla

bulunmaktadır

(14, 23).

İNSAN VE çEşİTLı HAYVAN KAYNAKLI STAFİLOKOK... 103

Stafilokok

su~larında

Protcin-A'nın

varlığı

<;e~itli

ara~tırmacı-lar (4, lA, 15) tarafından

deği~ik yöntemler

kullanılarak

demonstre

edilmiştir.

Bu amaçla,

Kronvall

ve Frommd

(12), Kronvall

ve

Wil-liams (I 3) bakteri

kültürlerinin

ekstrelerinin

serum

ile

prcsipitas-yonunu,

Kronvall

ve ark. (I 5) 19 G tipi radioaktif

mydoma

globu-linlerinin

stafilokoklara

absorbsiyonunu

ve Forsgren (4), Stap/ı.aııreııs

suşlarının

buyyon

kültürlerinin

üst sıvılarını

duyarla~tırılmış

erit-rositlerle

aglutinasyon

testinde

kullanml~lardır.

Protein-A,

Stafilo-kokların

hücre duvarında

bulunduğu

gibi, bu yapının

aynı suşların

ekstraselüler

bir

ürünü

de olduğu

ortaya

konulmu~tıır

(5,21' 28).

Protein-A'ya

fazla

miktarda

sahip

bulunan

Staph.aııreus

suşlarının

bu maddeyi

az veya (;ok hiç içermeyen

su~larcı oranla

fagositoza

çok daha

diren()ilik

gösterdiği

bildirilmektedir

(I).

İ

nsan ve değişik hayvan

orijinli stafilokok

suşlarının

Protcin-A

olu~turmaları

üzerinde

bazı

çalışmalar

(14, 15, 22, 23, 25, 27)

ya-pılmıştır.

Poutre! vc Le/ort (23), insan 589 ve sığır orijinli 215

sta-filokok

suşunu indirck

hemaglutinasyon(IHA)

ile Protein-A

yönün-den incelediklerinde;

koagulaz

pozitif suşlardan

insan orijinli

139'-undan

133 ünün (% 95.5) ve sığır orijinli 200 su~tan 112 sinin

(%

56)

Protein-A

yönünden

pozitif olduğunu,

buna

karşın koagulaz

nega-tif su~lardan 450 insan ve 45 sığır orijinli

suşu n Protein-A

testinde

negatif

sonuç verdiklerini

bildirmi~lerdir.

Poutrel ve Ducelliez (22),

araştırmalarında

sığır orijinli

200 Staph.aureus

su~undan

112

tanesi-nin (% 56) Protein-A

pozitif, 88'nin

(% 44) ise negatif

bulundu-ğunu

açıklamışlardır.

Vitkov (25),

koyun

mastitis

olgularından

izole ettiği

110 Staph.aııreııs suşundan

100 adedinin

Protein-A

testi

ile pozitif, 23 Stap/ı.epidermidis

su~unun ise aynı testte negatif

bulun-duğunu

rapor

etmi~tir.

Kronvall

ve ark. (14), insan

orijinli

215,

akut mastitis'li

30 ve kronik mastitis'li

ineklerden

izole ettikleri

97

Stap/ı.aureııs su~unun

Protein-A

olu~turmalarını

incelediklerinde;

in-san ve akut mastitis orijinli suşların yüksek oranda

Protein-A

olu~-turduklarını

(215 insan materyalinden

196'sının (% 91.2);

30 akut

mastitis'li

inekten

%

100 ve kronik mastitis'li

vakalardan

ayırdıkları

97 suştan 58'inin (% 59.8) ve 77 Stap/ı.epidermidis su~undan sadece

biri-sinin (% 1.3) Protein-.'\. sentezlediklerini

açıklamışlardır.

Kronvall

ve

ark. (15), denemelerinde

kullandıkları

insan or~jinli 156 Stap/ı.aııreus

suşundan

141'ini

(% 90)

Protein-A

pozitif

buldukları

halde,

47

Stap/ı.epidermidis

suşundan

hepsinin

negatif

olduklarını

rapor

etmiş-ler ve inkubasyon

ısısının ve inokulum

miktarının

Proıein-A oluşumu

üzerine etkili olmadığını

da açıklamışlardır.

Forsgren (4), insan

ori-404 Ö. Akay - İ. Ocak - M. İzgür - M. Arda - N. Aydın - N. Sultan - N. Aydın

jinli

800 patojenik

ve apatojenik

stafilokok

suşlarını

Protein-A

yö-nünden

muayene

ettiklerinde;

700 koagulaz

pozitif suştan

692'sinin

(% 98.9) ve 100 koagulaz negatif suştan ise 2'sinin (% 2)

ekstrasel-lüler Protein-i\. oluşturduğunu

bildirmiştir.

Winhlad

ve Ericson (27),

insanlardan

izole ettikleri

311 izolattan

301 'inin

(%)

88.3)

lam

tes-tinde pozitif, bu yöntem ile negatif bulunan

suşların II 'inin (% 3.2)

tüpte

yapılan

HA

testinde

pozitif

bulunduğunu

açıklamışlardır.

Weiss ve ark. (26), çeşitli hayvan

türlerinden

ayırdıkları

stafilokok

suşlarının

hücreye

bağlı ve ekstraselüler

Protein-A

yapımı

yönün-den ELJSA

yöntemi

ile incclediklerinde;

29 suşta hücreye

bağlı ve

88 suşta ise ekstraselüler

Protein-A

saptadıklarını,

Lind (16), insan

orijinli 455 Staph.aureus'u

FAT yöntemi

ile Protein-A

yönünden

in-celediklerinde;

124 suşu n pozitif ve 153'ünün

ise negatif sonuç

verdi-ğini, Müller

ve ark. (20), sığırlardan

izole ettikleri

345 Staph.aureus

suşundan

%

99'unda

(341)

Protein-A

saptadı kıarını

açıklamışlar-dır. Holmberg

(9), inek sütlerinden

izole ettiği 46 Staph.aureus suşu

n-dan

20'sinin

(% 43.5), 218 Staph. epidermidis suşundan

sadece bir

tanesinin

(% 0.5)

Proteİn-A

oluşturduğunu,

Müller

ve ark. (19),

insan ve çeşitli hayvan orijinli 36 Staph.aureus suşundan

hepsinin

Pro-tein-A

testinde

pozitif bulunduğunu

bildirmişlerdir.

Bu çalışmanın

amacı,

insan ve değişik hayvan

orijinli

stafilo-kok suşlarının

Protein-A

oluşturmalarını

incelemek ve bu sonuçların

diğer kriterlerle

karşılaştırmasını

yapmaktır.

Materyal ve Metot

Suşlar:

Bu çalışmada

aşağıda

bildirilen

stafilokok

suşlarından

yararlanılmıştır.

Bunlar da:

a- Test suşları:

Denemede,

437 insan

ve 225 hayvan

orijinli

toplam

662 stafilokok

suşundan

yararlanılmıştır.

İnsanlardan

izole

edilen 437 stafilokok suşundan

248'i Staph.epidermidis ve l89'u

Staph.

aureus,. hayvanlardan

ayrılan 225 suştan 75 i Staph.epidermidis ve

150'-si ise Staph.aureus olarak identifiye

edilmiştir.

Denemede

kullanılan

suşların

sağlandığı

kaynaklar

ve

orı]!n-leri

Tablo-l

de

gösterilmiştir.

b- Standart suşlar:

Denemede,

A. Ü. Veteriner

Fakültesi

Bakte-riyoloji

Bilim Dalı kültür

kolleksiyonundan

sağlanan

ve Protein-A

sentezleyen

Staph.aureus (emoVan suşu) pozitif kontrololarak

kullanıl-mıştır.

Ayrıca,

çalışmada

negatif

kontrololarak

kullanılan

Staph.

epidermidis suşu da aynı kaynaktan

temin

edilmiştir.

İNSAN VE ÇEşITLt HAYVAN KAYNAKLI STAFİlOKOK 405

Tablo 1. Denemcde kullanılan suşların sağlandığı yerlcr ve orijinkri

5 8

o

8 ph. cus 67

ı

_Staplı.Stafilokok _Statürü Sağlandığı yer Orijin Suş sayısı cpidermidis aur

--- - --- --_.- -- -

--Etlik Vet. Kont. Araşt. Enst. İnek 109 42

--- --_._-- ---- '..._- --- --

--AT. Vet. Fak. Doğum vc Rep.

Hasta-lıkları Bilim Dalı İnck 16 1 1

---- -- --,-_.- _--- --- --

-Polatlı Devlet Ürctmc Çiftliği İnek 15 1

--- - ---- --_._- --- --

---A.Ü. Vet. Fak. Bakteriyoloji BiEm Dalı Koyun 21 25

--- ---

--A.Ü. Vct. Fak. Bakteriyoloji Bilim Dalı Tavuk 21 (i 1

-- --- --- --

---tÜ. Vet. Fak. Bakteriyoloji Bilim Dalı Tavuk 39 1 3 --_._--_. --- ....---- ._._---- -_ .. ..._-

---SSK Ankara Hastanesi Çocuk Kli. İnsan 47 29

ı

--- -- - ---- --'--- -- ---

--Gülhane Askeri Tıp Akademisi

Bakte-riyoloji Bilim Dalı İnsan 167 lOG 6

--- --- -- -- ---- ."...-____ o

G.Ü. Tıp Fak. Bakteriyoloji Bilim Dalı İnsan 223 113 IL --- .__.,._- _--- .,--_._- - ._--,-- -- --- ---.-

--.---To p i am li62 323 33

Besi )'erleri:

Denemede

kullanılan

suşların

identifikasyonunda

ve karakter/erinin

saptanmasında

(koagulaz, c1umping faktör, D:\"ase,

O

i

F-glukoz,

mannitol,

morfolojik

ve kültürel

özellikleri,

Protein-A

oluşturmaları)

kanlı

agar,

O

i

F stafilokok

besi yeri,

D!\;ase agar

(Oxoid),

Müller-Hinton

agar

(Difeo),

nutrient

buyyon

ve nutrient

agar

(DifCo), 'fSB,

TSA

(Oxoid)

ve BI-Il (DifCo) besi yerlerinden

yararlanıl mıştır.

Tavşan plazması:

Çalışmada

kullanılan

insan ve hayvan

orıJın-li stafilokok

suşlarının

koagulaz

ve clumping

faktör

aktivitelerinin

saptanması

amaeıyla

tieari liyofilize tavşan plazması

(Sigma)

kulla-nılmıştır.

Sensibilize ko)'un eritrositlerinin hazırlanması:

Sensi bilize

koyu n

eritrosideri

Poutre!

ve

Lefort'un

(23)

bildirdikleri

yönteme

göre

hazırlanmıştır.

Koyun

kanı

alsever

solusyonuna

alınarak,

%0'85

FTS ile 3 kez yıkanmı~, 004 ml kan sedimentine

9 ml fizyolojik tuzlu

su ve

1/100

sulandırılmış

hemolitik

serum'dan

(titre

1/5000-Beh-ring-Germany)

6 ml ilave edildikten

sonra karışım,

4-0°C

de

90

dak.

hafifçe

çalkalanarak

inkubc

edilmiştir.

Bu süre

sonunda

karışıma

damla damla

i

ml

%

0.0075

gluteral

aldelıit'ten

konmuş ve solusyon

.to6 Ö. Akay -1. Ocak - M. İzgür - M. Arda - N. Aydın - N. Sultan - N. Aydın

10 saat süre ile 40e(: lik su banyosunda inkube edilmiştir. Bu

işlem-leri takiben karışım 3 kez FTS ilc yıkanmış ve kan sedimenti, içinde

(10

1 oranında sığır albumini (Merek) içeren 14.5 ml PBS ile süspan-sc edilerek böylece

%

3 lük duyarlaştırılmış kan solusyon u elde edil-miştir.

/del1tirika~)on

çalışmaları:

Çeşitli kaynaklardan sağlanan 662 stafilokok suşunun identifikasyonları bilinen klasik yöntemlere göre yapılmıştır

(ı

1, 18, 24, 29).

Koagula::;, testi:

Bu test, Terzolo ve Shimizu'nun (24) bildirdiği metoda göre yapılmıştır. Teste tabi tutulacak suşların

%

0.2 glikoz içeren

BHI

(Difco) buyyonunda

3rC

deki 18 saatlik kültürlerinden 0.25 ml alınarak 0.5 ml tavşan plazmasına ilave edilmiş ve tüpler 37"C de tutularak, sonuçlar koagulasyonun olup olmamasına göre 2, 4, 6 ve 24.'üneü saatlerde değerlendirilmiştir.

Clumping faktör:

Bu amaçla Koneman ve ark.'nın

(ı

1) bildirdiği yöntem uygulanmıştır. Temiz bir Lım üzerine, sulandırılmamış bir damla steril tavşan plazması ilc, teste tabi tutulacak suşların nutri-ent agardaki kültürlerinden öze ilc alınan koloniIerden konmuş ve kümclqmenin oluşumu pozitif olarak kabul edilmiştir.

DNasc

testi:

Bu test, Ziedt ve Golde'nin (29) bildirdiği metoda göre DNase (Oxoid) besi yerinde yapılmıştır. Denenecek suşların TBS'deki kültürlerinden besi yerine nokta inokulasyonu yapılmış ve petriler 3

re

de 24 saat inkube edildikten sonra üremelcr üzerine 1 N HCl ilave edilerek, üremeler etrafındaki açılmalar pozitif kabul edilmiştir.

O!

F-gliko:::. ue mannitol Jermellt(l~J'onlı:

Teste tabi tutulacak stafi-lokok suşlarının glikoz yönünden 0/ F ve anacrob mannitol fermen-tasyon testleri MaeFaddin'in (18) bildirdiği yönteme göre Staph-O

i

F besi yerinde yapılmış ve sonuçlar 14 günlük bir inku basyon süresi sonunda indikatörün renk dC,~işikliğine göre değerlendiril-miştir.

Proteİn-A

testi:

Çalışmada kullanılan insan \w hayvan orijinli

662 stafilokok suşunun Protein-A oluşturmaları Poutre! ve Lefort'un (23) bildirdikleri yönteme göre yapılmıştır. Tcste tabi tutulacak stafilokok suşlarının M ülIer-Hinton besi yerindeki 18-24 saatlik kültürlerinden yararlanılmıştır. Temiz bir lam üzerine 20 !Li duyar-laştırılmış kan solusyonundan konmuş ve ıvı ülIer-Hinton besi yerin-deki üremelerden öze ilc alınan kolonilcr bu kan solusyonu ilc

karış-iNSAN VE çEşiTLİ HAYVAN KAYNAKLI STAFILOKOK.. 407

tınlarak HA'nun oluşumu 30 saniye ilc 2 dakika içinde değerlendiril-miştir. Aynı işlemler kontrololarak Protein-A pozitif bilinen Cavvan ve negatif

Staplz. epidemzidis

suşları ilc de uygulanmıştır.

Ayrıca, suşların kendiliğinden sensibilize olmamış eritrositlerle HA verıp vermediği ıse yukarıda bildirilen yönteme göre

%

:nük yıkanmış koyun eritrositleri ile de denenmiştir.

Bulgular

identilikasyon

sonuçları:

Çeşitli kaynaklardan izole edilen stafi-lokok suşlarının bilinen yöntemlere göre identifikasyonları yapılarak, toplam 662 stafilokok suşundan 323 tanesi

Staplz.epidermidis,

339'u ise

Staph.aureus

olarak identifiye edilmiştir.

Staplz. epidermidis

suşlarının 248 tanesi insandan, 75 adedi değişik tür hayvanlardan,

Staph.aureus

suşlarından 189'u insandan ve 150 tanesi de hayvanlardan ızole ve identifiye edilmiştir (Tablo-2).

Tablo 2. İzole ve idenıifiye edilen slafilokok suşlarının orijinleri

İdentifiye edilen stafilokok türü

Orijin

İzole edi len

stafilokok suş sayısı Staplı. epidermidis Staph. aurcııs

tnsan 437 248 189 İnek Kanatlı Koytın Toplam 140 4~ GO 7 25 323 'l7 53

_.__._-

i

~--_. ~39

Koagulaz testi sonuçları:

İnsan or~jinli 248, sığır orijinli 43, kanatlı orijinli 7 ve koyun orijinli 25

Staplz.cpidermis

suşu koagulaz negatif bulunmuş, insandan izole edilen 189

Staplz.aureus

suşundan

ı

86'sı

(%

98.4), inek orijinli 97 suştan 96'sı

(%

98.9) ve aVlan orıJınli 53 suşun 53'ünün

(%

100) pozitif olduğu saptanmıştır.

Clumping Jakliir sonuçları:

Staph.epidermidis

suşlarından, ınsandan izole edilen 248 suşun 8'i

(%

3.2), inekten 43 suşun 2'si

(%

4.6) po-zitif sonuç verirken, kanatlı 7 ve koyun orijinli 25 suşun negatif bu-lunduğu belirlenmiştir. Buna karşın, 189 ınsan, 97 inek ve 53

kanat-'iOf! Ö. Akay - i. Ocak - M. İzgür - M. Arda - X Aydın - N. Sultan - N. Aydın

lı orijinli

Staph.aureus

suşunun sırası ilc 176

(l/o

93.

i),

91

(%

93.8), 52

(%

98.1 )'sinin bu testtc pozitif bulunduğu saptanmıştır.

J)Xase

testi sonuçlan:

İnsan orijinli 248

Staplı.epidermidis

suşu n-dan 7

(%

2.4), 140 inek orijinli'den 1-

(%

9.3;, koyun orijinli 25 suşun ise IS'i

(%

60) testte pozitif sonuç verirken, kanatlı orijinli 7 ~uşun negatif olduğu ve ayrıca, insanlardan izole edilen 189

Staph.

aureus

suşundan i78'i

(%

91.1) ve inek orijinli 97 suştan 91-'ü

(%

96.9) ve kanatlı orijinli 53 suştan 52'si

(%

98.1) pozitif bulunmuş-tu r.

o

(F-gliko",-, ma/llıitol anatTob fennentasyon

sonuçları:

Tcstte kulla-nılan insan ve değişik hayvan orijinli

Staf)h. epidennidis

ve

Staplz.aureııs

suşlarının büyük bir çoğunluğunun glikozu aerob

(%

98.7) ve ana-crob

(%

99.2) olarak fermente etmelerine rağmen,

Staplz. epidermidis

suşlarının mannitolü anaerob fermente etme oranları ise düşük bu-lunmuştur

(%

38.3). Ayrıca, denemede, kullanılan

Staph.aureus

suş-ları ise mannitol'ü anaerob olarak büyük bir oranda fermente et-mişlerdir

(%

96.4).

Protein-A

testi soııuçları:

İnsan ve hayvanlardan izole edilen top-lam 662 stafilokok izolatlarından i62'sinin

(%

27.4), sadece insan orijinli suşlardan 118'inin

(%

27) ve hayvan orijinli suşlardan ise 44'ünün

(%

19.5) Protein-A oluşturdukları saptanmıştır (Tablo- 3). Bu çalışmada kullanılan 437 insan ve 225 hayvan orijinli stafilokok suşundan, insan orijinli 189

Staph.aureus

suşundan 118

(%

62.4) ve hayvan orijinli 150 suştan 41

(%

29.3)'nün Protein-A pozitif olduk-ları belirlenmiş (Tablo-3) ve hayvan orijinli

Staph.epidermidis

suşları-nın ise negatif oldukları saptanmıştır (Ta blo-3).

Hayvan orijinli suşlar izole edildikleri Layvan türüne göre ince-Iendiklerinde; ineklcrden izole edilen 13, bna tlı 7 ve koyun orijinli 25

Staplı. epidermidis

suşunun Protein-A ol Llşturmadıkları saptanmış-tır (Tablo-4). İnekIerden izole edilen ~17

Staplı. aureııs

suşundan 44. tanesinin

(%

45.3) Protein-A pozitif~ buna karşın kanatlı orijinli 53

Staplz.aureus

suşundan hiçbirisinin Protein-A pozitif sonuç ver-mediği ortaya konulmuştur (Tablo-4.).

Tartışma ve Sonuç

Protein-A(Sp A;, patojenik stafilokoklar tarafından sentezlc-Hen, hücre duvarına bağh ve değişik scrolojik yöntemlerle clemonstre edilebilen bir yapıdır (4, 5, 2 i, 23, 2G, 28). İnsan ve hayvan orijinli

Tablo 3. Denemede kullanılaıı stafilokok slIşlarınm l'rotciıı-;\ olıışturmaları

Stafilokok lürii

i Protein-A * Protcİıı-A*

l'rotein-A * pozitif Staplı. pozitif Staplı. I'roıein-A I'rotein-A pozitif Stafilokok epidermidis suş sayısı ve aureus suş sayısı ve pozitif pozitif Sıafilokok Sıapll. Sıaplı. sayısı ve toplam Stal'lı. epidcrmidis toplam Stapll. aurcııs Stal'lı. epiclermidis Staplı. aurcııs

Orijin suş sayısı epitlermidis aufCus ('Y,,) pozitif suş sayısı suş sayısı _(':'~)oranı ve (%)oranı

---- --- .._~._.-.--- --- -- --- ..._---- --- ._---- -- --- ---_.

__

._.'_.. - --- --- -- ---İnsan-i-llayvan !iG2 323 339 ](,2 (24.7) Of 323

ıG2! 339

o

47.7 ----

---

--- -1---

--- --- - -- --- --- - -_.- - ---- ---İnsan 437 24R 189 118(27) 0/248 118/ IS9 O 62 .4 --- ---- .._-

_

.. ,- ---_ .._-- --- - ._._---. --- -- - ---- --_._._- ---_ .._-- ---- -.- ---Hayvan 22', 75 150 44(19.:-,) OL 75 4-4l 1:,0 O 29.3

*A: Deııemede kullanılan SllŞ sayısı.

Tablo 4. Ilayvan orijinli stafilokok suşlarının I'rotein-A oluşturmaları

Staplı. tiirü

i

Protcin-A

I'rotein-A I'rotein-A pozitif Staplı. aUITi.IS I'roleiıı-A

Toplam pozitif Stafilokok negatif Stafilokok suş sayısı \T pozitif Staplı.

Hayvan Stafılokok Staplı. ~uş sayısı ve suş sayısı ve toplaın Staplı. aurctls aı.ırcus orijini sayısı epiderınidis Staplı. <turcııs (0.;,) pozitifiik (~<1) Ncgatiflik suş sayısı (O~) oranı

--- --- - -- -- -~_._._-- --- --- -_. --- ___ o _._--- .._- --- ---_.

__

._--İnek 140 43 ')7 44 (31.4) 96 (GS.5) 44/97 45 .3 ---- ._-- --- -- --- - - --- --- --- ----rıo- (10;))--1-- --_._---

._

.. Kanatlı riO 7 )3 O 0/ .'>3 O --- --- --- -- --- --- -- - -- --- -- - -- --- ___ o --- ._'. ---Koyun 2) 2) - O 2:; (i00) ---

--,\\0 Ö, Akay -

i.

Ocak - M. İzgür - M. Arda - N. Aydın - N. Sultan - N. Aydın

stafilokok su~brı ilc yapılan çalışmalarda; Protein-A'nın büyük bir oranda

Stap/ı.aıırellf

suşları tarafindan scntezlendiği ortaya konul-mu~tu)' (3, i4, 15, 20, 23, 25). Flandrois ve ark. (2) ilc Kronvall vc ark. (I 5), tarafından yapılan çalışmalarda insan ve hayvan ori-jinli koagulaz-negatif suşların Protein-A oluşturmadıkları, aynı şekilde, PoutrcI ve Lefort (23) denemelerinde kullandıkları 4.50 in-san ve 45 sığır orijinli koagulaz negatif suşun da Protein-A sentez-!emedikleri bildirilmiştir. Buna karşın, Kronvall ve ark. (14), inek orijinli 77 suştan birinin

(%

1.3), Forsgrcn (4), insan orijinli 100 koa-gulaz negatif suştan 2'sinin

(%

2), Holmberg (9), inek sütlerinclen ayırdığı 218

StajJh.epidermidis

suşundan l'ini

(%

0.5) Protcin-A yö-nünden pozitif bulduklarım açıklamışlardır. Çalışmada kullanılan 662 sta['ilokok suşundan, 248'i insan, 43'ü sığır, 7'si kanatlı ve 25'i koyun orijinli olmak üzere, toplam 323

Staph.epidermidis

identifiye edilmiştir. Alınan sonuçlara göre 323

Staph.epidermidis

suşundan Iıiç'-birisinin Protein-A yönünden pozitif sonuç vermediği ortaya konul-muş ve elde edilen bulgular araştırıcıların sonuçlarına uygunluk göstermişt ir.

İnsan orijinli

Staph.aııreııs

suşlarının

%

90'ının bu komponenti (Protein-A) scntezledikleri bildirilmiştir (3,4, 14, 15,20,23). Bu ça-lışmada 137 insan kaynaklı stafilokok suşundan 189 tanesi

Staph.

aureus

olarak, identifiye edilmiş ve bu suşların llS'i

(%

62.4) Pro-tcin-A pozitif bulunmuştur.

Ha yvan orijinli, özellikle, sığırlardan izole edilen stafilokok-lar üzerinde Protein-A yönünden incelemeler de yapılmıştır. Kron-vall ve ark. (14), Holmbcrg (9) ve Hajekve MarsaIck (S) sırası ilc ineklerden ayırclıkları

Stap/ı.aureus

suşlarım Protein-A yönünden

%

54,

%

'13 ve

%

40 oranında pozitif bulduklarını, PoutreI ve Le-fort (23) sığır orijinli 200 koagulaz pozitif suştan i i 2'sini

(%

56) pozitif olarak saptadıklarını açıklamışlardır. Bu denemede, inekler-den izole edilen 97 ve kanatlı orijinli 53 olmak üzere toplam ISO lıayvan crijinli

Stap/ı.aureus

suşundan yararlanılmı~ ve bu suşların pozitiflik oranı ise

%

29.3 olarak belirlenmiştir. Ancak, bu su~lar-dan 97 adedi sığır orijinli olup, Protein-A pozitif olan su~ sayısı 44

(45.3), bnatlıIarelan ayrılan suş sayısı ise 53 olup, Protein-A testinde pozitif bulunan suş yoktur. Elele edilen bu bulgular, diğer araştırıcı-ların sonuçları ile karşılaştırıldığında bir paralellik göstermektedir.

Sonuç olarak, denemede kullanılan

Stap/ı.epidermidis

suşlarının Protein-A olu~turmadıkları, buna karşın insan ve hayvan orijinli

iNSAN VE (EşiTLİ HAYVAN KAYNAKLI STAFiLOKOK.. ,tıı

Staph.aııreııs

su~larının ise belirli oranlarda Protein-/\. meydana ge-tirdikleri saptanarak, İster insan ve ister Iıayvan orijinli olsun suş-larda Protein-A'rıın c1cmonslre edilmesi bu suşların patojenik stafi-lokok su~ları olabilece,ği, ancak sadece Protein-A testi ile yetinilmc-yerek koagulaz, cIıımping faktör, DNase vs. testleriyle sonuçların birleştirilerek karar verilmesinin doğru olacağı vc Protein-A testinin

Staph.aurws

su~larının ayrımında önemli ve geçerli bir test olduğu kanısına varılmıştır. Ayrıca, bundan sonra yapılacak <;alışmada aynı yöntem uygulanarak besi yerinin, inkııbasyon ısısı ve süresinin Pro-tein-A vapıım üzerine etkinliği ara~tırılacaktlr.

Kaynaklar

ı.

Dosset, J.H., Kron"al1, G., Williams, R.C. and Quie, P.G. (196'1).AIl[iplwgoc)'[ic ([/ee[s nJ s[(lI,/~)'lococe(l1 Ino[eiıı A..I. ımmııno!., 103: 140') 14 iO.

2. Flandrois, J.P., Fleurette, J. et Eyraud, F. (1')7(i). /Je[er[ioıı de la I,ro[fiııe A de S[ap-hylneocCl:.\ (lıırel/S Iwr heııwgglıı[iııolioıı roııdi[io/mec. Ann. Bio!. elin., 33: 3fj'i.-3GS.

3. Flandrois, J.P., Fleurette, J. et Thome, M.F. (1<:ı7B).Faelfllls iııflllfl,'can[ la Inndııe-[ioıı de f,ro[ciııe A 1,(Lr d" .•. wııches III/ıııaiııes de Sla/ı/~vlnrnrOl" aıııfllS. Ann. \[icrobio!., 129 B: .'i7-(i2

4. Forsgren, A. (I~170;.Sigııijicnııre o/Inolciıı .'1 fm,d",liOlI b.rsıaı,hvlocorci. 1nICel.

ı

ınmu-nity, 2: G72 673.

'i. Forsgren, A. and Forsum, U. (1970). Role of InOleilı .1in ııoııspecific ilJllJlıııııJj/ııoreserJce of SIf'p/~rlocorcus aIlTCII". Int<-cl. lınmıınİI)'. 2: 387-:~91.

G. Forsgren, A. and Sjöquist, J. (19GG). "Pro[eiıı-A" jimıı Sıa/'/~rloeot:rll' tlııreus. [.Pseııdo-imııııııı rmr[ioıı u.iıh hııııııııı --,- glubııliıı ..I. lınmııno!., 97: 1l22-827.

7. Forsgren, A., Nordström, K., Philipson, L. and Sjöquist, J. (1971). ['ro[eiu A IııIl[alıls oj' Slal,h)10en(cııs Dıırcıı.'- .1. Bacıerio!., 107: 21.~-2:ıO.

B. Hajek, V. and Marsalek, E. (197G). [,',:aluaıinıı oj' classijimıuı)' nileriıı .Ii". S[aph.)'lo-coeci. Zbl. Bakıerio!' I'arasit. Abt. i. Orig., 209: 1,1+- 1GO.

9. Holmberg, O. (1973). Sıaı,hrlocoecıı.ı e/,idenııidis isula[edfmııı bm:iııe Illilk. Ada Vet. Seand. Supp., '1:;:1-144.

10. Jensen, K. (19(j8). A ııomıal/y ocmniug s[lıph)'ln(ueClls aıı[ibudy iıı 1ןilןil111}semııı. Acıa Pat-ho!. Minabio!. Scand., 44: 421-418.

1

ı.

Koneman, E.W., Allen, S.D., Dowell, V.R. and Simmer, H.M. (El79).

"Ding-ııos[ie J\1inobiolo~/' . .I.B. Lippaincott Com pan\'. Philadelphia. Toronıo.

12. Kronvall, G. and Frommel, D. (1970). /J~/iııitiolı uj J[at)/~l'loroectıl I»uıeiıı A mıı[ivity fnr hıııııaıı iııımımoglobııliıı Gfragmm[s. Immunochemisır)', 7: 124 .. i27.

13. Kronvall, G. and Williams, R.C. (19G9). Diljermees iu au/i-pru[eiıı A ae[iviry aıııoııg

H2 Ö. Akay - i.Ocak - M. İzgür - t••1. Arda - N. Aydın - N. Sultan - N. Aydın

H. KronvaU, G., Dossett, j.H., Quie, P.G. and Williams, R.C. (1971). Gecımeııee of Proleiıı A iıı sla.Myloeoccal sirailis :Qı/{II/Iiıalive aspeeıs and (orre/aıimı lo aıııigmie arıd bııc-lerio/ıhııge Ir/,es. Infeet. Immıınily, 3:10-1').

1'). Kronvall, G., Holnıberg, O. and Ripa, T. (1972). I'rolei,ı A iıı Sıııplıylococcııs Iıl1reus slTl/illS of hıımıııı ıınd bOI'iııe origiı!. Acta. Pathol, Y1ierobiol, Scand. See. ll, 80:735-742. 16. Lind, I. (1972). Corrciıılioıı belweeıı ıhe occıırınıcc oj Inoleiıı A ıınd soıııe oıher properıies iıı

SIIıI,h)'locoecııs Iıl1relıs. Acta Patlıol. Y1icrobiol. Scand. See. B, 80:702-.708.

17. Lind, F., Live, I. and Mansa, B. (1970). Vıırialion iıı sllıl,lıyloeoecal proleiıı .1 reaclivily

wiıh "( G-globıılins oj di[ferenl speeie.L Aeta Pathol. Mierobiol. Seand. See. B, 78 :673-682. LS. Mae Faddin, j.F. (1980). "Biologicıılleslsjor idmıifilOıion ~fmedicııl blUleria." 2 tlı. Ed.

Williams and Wilkiııs. Baltimorej London.

19. Müller, E.E., Brüekler, j., Schaea, W., Blobel, H. (1973). I'rodııeıio,ı of P10Ieiıı - A by cul/ıms of S. iilITelis isolrııed from cııııle Iıl1d iıs ImljilOıion. Pesquisa Agropccuaria Brasi-leira Veterinaria, 8~6):1 11' 119.

20. Millier, H.P., Litke, O.M. und Blobel, H. (1983). Prolei,ı-A Aklivilııl voll SlaplIJ-lo-koHm ıınd ve rsehiedlieher ıierıırtlidıer Herk1l11fl mil Immıll/oglobııliıı C; 1'011 Jlalıs"llI/d Versileiı tiereıı, sowie com ,Heııselım. Zbl. Vet. Med., 30:30.;-31:!.

:!i. Nickerson, D.S., White, j.G., Kronvall, G., Williams, R.C. and Quie, P.G. (1970).

Iııdireel ;;isııalizalioıı oj Slal)lıyloeoeelıs aııreııs ımıcin - A .

.J.

Exp. l\-1cd., 131: i039-1 047.

:n.

Poutrcl, B. and Ducelliez, M. (1979). l,"mlııalio,ı ~f three mpid lesls fm ideıılificıılioıı of Stapll)'locoeflls Iıl1relıs isolııled iıı boviııe milk. Ann. Rech. Vet., 10(1) :12')- 129. 23. Poutrel, B. et Lefort, B. (I 980). Mise iiliI)oiııl el Iılilislı/iOlI d'ıar mıeıif sen.,ible el sıııble

lumr Iıı delulion de Iıı Inoıeiııe .1 de Sıaplıyloeoccııs Iıl1reu,. Med. MaL. Inf., io~i) :38-11. 24. Terzolo, H.R. and Shimizu, A. (ı 979). Biologicııl ellr/raelers aııd bııcterioı)hage typiııg oj Slııplıy'locoeeııs aııreııs isolated .from clıiekms staı)hyloco(eosis Iıl1d coıııme,'Cial balanced elıieken jood iıı Argeıııiııe. Revista Argentina de Mierobilogia, i i (3) :89- iOI.

:!'). Vitkov, M. ~1984). Prodııeıioıı of Imıleiıı .1 bJ' slııpl!),lococci of oı'iııe oıigi,l. Veterinamo-mcditsirıski :'-:aııkıı, :! 1(9) :52-56.

26. Weiss, R., Sehmeer, N., Amend, A., Sehaeg, W. und Bekheat, I. (1984). <11ןil Xach

weis der I'roleiıı - .1 - Bı/dil/ıg .'011 Slal,lıylokokken mil/els der FL/SA - Teehııik. ZhL. Vet. Med,. 3 1:42.1-434.

27. Winblad, S. and Ericson, C. (ı973). Seıısilized shal, red eells as areacıanı fal' Slaplı)'-loeorcııı Iıl1l'elıll)roteilı A. Acla l'athoL. YlicrobioL. Seand. See. B, 81 :1:)0-156.

2B. Yoshida, A., Mudd, S. and Lenhart, N.A. (19(;3). Tlıe eommoıı pmıeiıı agg/ıılim;gen

,,!Slaplıy'lococCllS oureııs. ll. Prujicaıion, ehemimi (h"Tllclel'izalion, aııd ıerologic comp"ri.<on u,i//ı ]ensfll'.' mıligen . .i. ImmıınoL., 91 :777-782.

29. Zierdt, C.H. and Golde, D.W. (ı 970). Deo.vyribonııciease-posilhe Slapll)'oloco(elıs ej,i-demıidis slmins. App. Microbiol., 20(1) :54- S7.