HARZEMŞAHLARIN MOĞOLLARLA OLAN ĐLĐŞKĐLERĐ

Após a aquisição e o processamento dos dados de MALDI MSI, foi criado um mapa de calor para representar a variação de intensidade relativa de diferentes neurotransmissores e neuromoduladores por região do cérebro entre os grupos REP e controle. A estratégia desenvolvida permite comparar determinadas regiões do cérebro (também chamadas de regiões de interesse – ROI) através de um preparo de amostra in situ, que nos fornece não só a identificação dos compostos de interesse como sua localização no cérebro e sua quantidade relativa.

Através da utilização do algoritmo MSiReader v0.05 foram definidas diferentes regiões de interesse (ROI) que correspondem aos principais centros nervosos no cérebro das abelhas; os dados de cada uma das 18 regiões do cérebro foram processados e analisados separadamente para a criação do mapa de calor. O algoritmo determina o número de pixels dentro de cada ROI e posteriormente calcula o espectro médio dessa região. A título de exemplo, as figuras 19 e 20 mostram o espectro médio de duas regiões do cérebro dos indivíduos do grupo controle. É gerada, também, uma lista de picos e informações sobre cada pico desta lista, tais como os valores centroides de m/z, a intensidade e as coordenadas x e y dos diferentes picos, dentre outras informações.

Figura 19. Espectro médio da região do lobo antenal esquerdo (grupo controle), gerados a partir do EIC, através do software MSiReader v0.05. Nesse espectro estão

representados os principais neurotransmissores e neuromoduladores identificados nessa região. Os valores de intensidade do eixo y está expresso em unidades arbitrárias definidas pelo próprio algoritmo.

Figura 20. Espectro médio da região do gânglio sub-esofágico (grupo controle) gerados a partir do EIC, através do software MSiReader v0.05. Nesse espectro estão

representados os principais neurotransmissores e neuromoduladores identificados nessa região. Os valores de intensidade do eixo y está expresso em unidades arbitrárias definidas pelo próprio algoritmo.

Na figura 21 podemos observar a criação de um ROI, correspondente a região dos corpos pedunculados, no software MSiReader v0.05. Para a delimitação exata das diferentes regiões do cérebro com a imagem gerada por espectrometria de massas, foi utilizado a sobreposição do mapa de contorno, criado a partir das imagens de H&E, com a imagem gerada por MALDI MSI, através da utilização da ferramenta de sobreposição do software MSiReader.

Figura 21. Delimitação de uma região de interesse (ROI) no software MSiReader v0.05.

Para a construção do mapa de calor a intensidade dos diferentes compostos foi extraída de cada pixel dentro de uma mesma região; após esse processo foi realizado o cálculo da média das intensidades dos metabólitos (incluindo o IS) entre os diferentes pixels de um mesmo ROI, a partir dos EICs de cada região do cérebro (tabela 15 e 16). Posteriormente o valor de intensidade média para cada um dos compostos estudados foi dividido pelo valor da intensidade média do IS dentro do mesmo ROI, e esse procedimento foi repetido para todas as regiões do cérebro estudadas (tabela 17 e 18). O valor numérico desse resultado obtido a partir grupo REP foi dividido pelo valor análogo obtido para o grupo controle em uma mesma região (tabela 19). O logaritmo na base 10 desses resultados pode ser observado na tabela 20.

Tabela 15. Média das intensidades* dos metabólitos (incluindo a média da intensidade do IS) nas 18

diferentes regiões do cérebro de A. mellifera para o grupo controle.

(*)Os valores de intensidade obtidos com o auxílio do MSiReader v0.05 estão expressos em unidades arbitrárias definidas pelo próprio algoritmo.

Tabela 16. Média das intensidades dos metabólitos (incluindo a média da intensidade do IS) nas 18

diferentes regiões do cérebro de A. mellifera para o grupo REP.

(*)Os valores de intensidade obtidos com o auxílio do MSiReader v0.05 estão expressos em unidades arbitrárias definidas pelo próprio algoritmo.

Tabela 17. Normalização dos valores de intensidade média dos metabólitos nas 18 regiões do cérebro

com base no valor de intensidade do IS, para os indivíduos do grupo controle. Para cada ROI, o valor da intensidade média dos metabólitos foi dividido pelo valor de intensidade média do IS dentro do mesmo ROI. Os valores de intensidade normalizado para os compostos não detectados por MALDI MSI receberam o valor 0,0.

Tabela 18. Normalização dos valores de intensidade média dos metabólitos nas 18 regiões do cérebro

com base no valor de intensidade do IS, para os indivíduos do grupo REP. Para cada ROI, o valor da intensidade média dos metabólitos foi dividido pelo valor de intensidade média do IS dentro do mesmo ROI. Os valores de intensidade normalizado para os compostos não detectados por MALDI MSI receberam o valor 0,0.

Tabela 19. Divisão entre os valores normalizados de intensidade obtidas para o grupo REP pelos valores

normalizados de intensidade obtidos para o grupo controle.

Tabela 20. Logarítmo na base 10 do resultado da divisão entre os valores normalizados de intensidade

obtidas para o grupo REP pelos valores normalizados de intensidade obtidos para o grupo controle.

Posteriormente esses dados foram representados na forma de um mapa de calor, conforme mostrado na figura 22. No mapa de calor a escala de cor varia do vermelho ao azul, indicando se a concentração relativa de um determinado composto aumentou ou diminuiu em relação ao grupo REP. Desse modo, a coloração azul indica que um composto estava mais presente no grupo controle do que no grupo REP em uma determinada região do cérebro, e a coloração vermelha indica que a concentração desse composto é maior no grupo REP do que no grupo controle.

Figura 22. Mapa de calor representando a distribuição dos metabólitos nas 18 diferentes regiões do

cérebro de A. mellifera comparando os grupos controle e REP. A coloração azul indica que um composto estava mais presente no grupo controle do que no grupo REP em uma determinada região do cérebro, e a coloração vermelha indica que a concentração desse composto é maior no grupo REP do que no grupo controle.