Ekonomik Faaliyete Yabancı Sermaye Katılımı

O presente trabalho teve como objetivo o estudo estrutural e a determinação do mecanismo de ação, bem como a descrição detalhada das interações que fazem o intermédio entre os inibidores identificados e a enzima GAPDH de T. cruzi,

Foram realizados ensaios de co-cristalização da enzima GAPDH na presença de diversos inibidores identificados através de experimentos de cinética enzimática. A partir dos ensaios de cristalização, foram obtidos quatro complexos cristalográficos da GAPDH na presença de inibidores diferentes. Estudos estruturais foram realizados fornecendo valiosas informações mecanísticas com evidente importância para o planejamento de novos inibidores mais potentes para a GAPDH.

Dentre os complexos obtidos se encontram aqueles formados a partir da GAPDH na presença dos inativadores iodoacetato e iodoacetamida. Durante os estudos realizados com esses inativadores, foram determinados os tempos de inativação de cada um desses compostos mostrando que os mesmos exerciam sua função inativadora de forma diferente, apresentando tempos de inativação diferenciados. Além disso, os estudos estruturais conduzidos com os complexos referentes a esses inativadores foram suficientes para esclarecer e elaborar uma nova sugestão para o mecanismo de ação desses compostos diferente daquele previamente proposto na litaratura.68

Dessa forma, foi mostrado que para a acomodação do inativador iodoacetamida é necessário que o sítio do cofator NAD+ _{esteja desocupado. Assim}

foi proposto que o retardo observado nos ensaios cinéticos do inativador iodoacetamida com relação ao iodoacetato pode se explicado em função da expulsão do NAD+ por parte do iodoacetamida. Esses resultados contribuem para o melhor entendimento do comportamento da GAPDH enquanto alvo molecular empregado no planejamento de moléculas com atividade anti chagásica.

Um outro estudo realizado nessa tese, compreende os complexos metálicos de rutênio liberadores de grupos nitrosil, onde a partir dos resultados de inibição

enzimática, ensaios de co-cristalização foram conduzidos com os compostos (3), (4) e (5) dessa tese. Apenas um dos conjuntos de dados obtidos revelou a presença de ligante em interação com o resíduo catalítico Cys166 causando inativação enzimática. Experimentos de espectrofotometria foram realizados com o objetivo de melhor compreender o mecanismo de inativação e os parâmetros relacionados à liberação do grupo nitrosil no sistema em estudo.

Dessa forma, a análise integrada dos resultados obtidos forneceu informações que indicam que a liberação do grupo nitrosil acontece pela redução do complexo de rutênio na presença do tampão de ensaio cinético e que somente a proteína (livre de tampão) não possui capacidade de exercer essa função. Além disso, com base em resultados encontrados na literatura, esses compostos apresentando configuração trans não apresentam atividade biológica84. Assim, foi possível sugerir que além da importância do potencial redox, requerimentos estéricos sejam necessários para que tais compostos possam atuar na enzima GAPDH. Contudo, embora esse composto não tenha se apresentado como bom inibidor dessa enzima, ele apresenta boa atividade frente a testes realizados in vitro com parasito na forma tripomastigota, sendo mais eficaz e menos tóxico que o beznidazol e além disso, se mostra ativo in vivo quando reduz a quantidade de parasitas na forma amastigota presente no tecido cardíaco de camundongos74_.

Portanto, é muito importante que outros mecanismos de ação sejam investigados, pois essa informação é fundamental para que se possa tentar otimizar as propriedades responsáveis pela atividade terapêutica associada ao composto durante o processo de planejamento.

Por último, estudos cristalográficos com compostos derivados de produtos naturais foram realizados baseados em resultados de cinética enzimática previamente obtidos.41 A partir dos resultados de cinética, além da potência inibitória dos compostos, o mecanismo de ação dos mesmos foi revelado como sendo não- competitivo. Tal informação implica dizer que os compostos derivados de ácido anacárdico não se ligam no sítio ativo da proteína, exercendo sua função inibitória a partir da interação em outra região da proteína.

Dessa forma, para identificar a localização desse novo sítio, foram realizados experimentos de co-cristalização com a GAPDH na presença do

composto (6) apresentado na Tabela 7 dessa tese. Um conjunto de dados foi obtido permitindo a elucidação estrutural do complexo formado pela proteína e o inibidor (6). O sítio foi identificado na superfície da proteína apresentando caráter bastante hidrofóbico o que justifica a presença de ligante com características apolares. Além disso, foi possível examinar as interações que contribuem para a estabilização do inibidor em sua cavidade.

A interação desse inibidor com a proteína provocou alterações conformacionais suficientes para causar mudanças consideráveis no sítio ativo, como a expulsão do cofator NAD+ de seu sítio a partir do choque estérico com o resíduo Ile13. A análise da relação estrutura atividade também colaborou para o entendimento dos requisitos necessários para que o inibidor exerça seu papel. Foi visto que a potência é diminuída quando os derivados de ácido anacárdico apresentam cadeia alquílica com menores números de átomos de carbono, pois esse encurtamento do grupo apolar do inibidor estaria diminuindo o número de possíveis contatos de van der Waals existentes em cadeias alquílicas maiores. Os ligantes que não possuem o grupo ácido carregado também apresentam menor potência que pode ser explicada pela extinção da ligação de hidrogênio que se formaria entre a Lys101 e o grupo ácido carregado. Além disso, ocorre choque estérico com moléculas de água que fazem parte de uma rede de ligações de hidrogênio e que contribuem para a estabilização do ligante nessa posição.

A obtenção da estrutura da GAPDH na presença do derivado de ácido anacárdico, bem como a descoberta de um novo sítio alostérico abriu novas perspectivas de estudo que podem ajudar bastante no planejamento de novos inibidores para essa enzima. Com base nessas considerações, serão conduzidos pelo aluno de doutorado Fernando Maluf, estudos de mutações sítio dirigida com foco no resíduo Lys101 que se mostra chave para estabilização do ligante no sítio. Esses estudos serão realizados juntamente com ensaios cinéticos visando monitorar a contribuição desse resíduo para a acomodação do inibidor na cavidade e sua conseqüente atividade inibitória. Essas investigações além de esclarecer melhor o mecanismo de inibição, fornecerá informações valiosas para que se possa iniciar um novo processo de planejamento baseado no novo sítio descoberto.

Dessa forma, a integração de diferentes abordagens tais como cinética enzimática, cristalografia e docking, forneceram informações muito relevantes que contribuíram para o entendimento do mecanismo de ação dos diferentes inibidores apresentados nessa tese.

REFERÊNCIAS

1 REME, J. H. F. et al. Tropical diseases targeted for elimination: Chagas disease, lymphatic filariasis, onchocerciasis, and leprosy. WHO - World Health Organization-

Infectious Disease, p. 147, 2006. Disponível em:

<http://files.dcp2.org/pdf/DCP/DCP22.pdf>. Acesso em: 05 de mar. de 2010.

2 O’ CORNELL, D. Neglected disease. Nature, v. 449, p.170, 2007. Disponível em: < http://www.nature.com/nature/journal/v449/n7159/pdf/449157a.pdf>. Acesso em: 05 de mar. de 2010.

3 CAMARGO, E. P. Doenças tropicais. Estudos Avançados, v. 22, n. 64 , p. 95-110, 2008.

4 MORAN, M. et al. Neglected disease research and development: how much are we really spending? Plos Medicinal, v. 6, n. 2, p. 137-146, 2009.

5 GUIDO, R. V. C. and OLIVA, G. Structure - based drug discovery for tropical diseases. Current Topics in Medicinal Chemistry, v. 9, n. 9, p. 824-843, 2009.

6 NWAKA, S.; RIDLEY, R. G.; Virtual drug discovery and development for neglected diseases through public–private partnerships. Nature Review Drug Discovery, v.2, n. 11, p. 919, 2003.

7 WHO - World Health Organization, Technical Report Series, 2002. Disponível em: <http://whqlibdoc.who.int/trs/WHO_TRS_905.pdf>. Acesso em: 14 de mar. de 2010.

8 SILVA, J. J. N. et al. Quimioterapia da doença de Chagas: estado da arte e perspectivas no desenvolvimento de novos fármacos. Quimica Nova, v. 32, p. 2444- 2457, 2009.

9 CAVALLI, A.; BOLOGNESI, M. L. Neglected tropical diseases: multi-target-directed ligands in the search for novel lead candidates against Trypanosoma and Leishmania. Journal of Medicinal Chemistry, v. 52, p. 7339 - 7359, 2009.

10 HOARE, C. A. The Trypanosomes of mammals. Oxford: Blackwell Scientific Publications, 1972. p. 60-80.

11 HOARE, C. A.; WALLACE, F. G. Developmental stages of Trypanosomatid flagellates: a new terminology. Nature, v. 212, n. 5068, p. 1385-1386, 1966.

12 TEIXEIRA, A. Doença de Chagas e evolução. Brasília: Finatec, 2007.

13 ARTHROPODA: Rhodnius prolixus. Disponível em: <http://www.icb.usp.br/~marcelcp/Default.htm>. Acesso em: 14 dez. 2009.

14 LENGAUER, T. Bioinformatics: from genomes to drugs. In: MANNHOLD, R.; KUBINYi, H.; FOLKERS, G.(Ed.). Methods and principles in medicinal chemistry. Weinheim: Wiley-VHC Verlag , 2002. v. 1.

15 NELSON, D. L.; COX, M. M. Lehninger: principles of biochemistry. 3 ed. New York: Worth Publishers, 2000.

16 COPELAND, R. A. Enzymes: practical introduction to structure, mechanism and data analysis. New York: Wiley VHC, 2000.

17 COPELAND, R. A. Evaluation of enzyme inhibitors in drug discovery: a guide for medicinal chemists and pharmacologists. New Jersey: John Wiley & Sons Inc., 2005.

18 STRYER, L. Biochemistry. New York: W. H. Freeman Co, 1995.

19 MICHELS, P. A. M. Compartmentation of glycolysis in Trypanosomes: a potential target for new trypanocidal drugs. The Journal of Cell Biology, v. 64, p. 157-164, 1988.

20 VERLINDE, C. L. M. et al. Glycolysis as a target for the design of new anti Trypanosome drugs. Drug Resistance Updates, v. 4, p. 50-65, 2001.

21 BAKKER, B. M. et al. What controls glycolysis in Bbloodstream form Trypanosoma brucei. The Journal of Biological Chemistry, v. 274, n. 21, p. 14551- 14559, 1999.

22 BAKKER, B. M. et al. Metabolic control analysis of glycolysis in Trypanosomes as an approach to improve selectivity and effectiveness of drugs. Molecular and Biochemical Parasitology

, v. 106, p. 1-10, 2000.

23 CÁCERES, A. J. et al. Genetic validation of aldolase and glyceraldehyde-3- phosphate dehydrogenase as drug targets in Trypanosoma brucei. Molecular and Biochemical Parasitology, v. 169, p. 50-54, 2010.

24 OPPERDOES, F. R.; MICHELS, P. A. M. Enzymes of carbohydrate metabolism as potential drug targets. International Journal for Parasitology, v. 31, p. 482-490, 2001.

25 ARONOV, A. M. et al. Structure-based design of submicromolar, biologically active inhibitors of trypanosomatid glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase. Proceedings of the National Academy of Sciences USA, v. 96, n. 8, p. 4273-4278, 1999.

26 ARONOV, A. M. et al. Selective tight binding inhibitors of trypanosomatid glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase via structure-based drug design. Journal of Medicinal Chemistry, v. 41, p. 4790-4799, 1998.

27 VERLINDE, C. L. M. J. et al. Selective inhibition of trypanosomal glyceraldehyde- 3-phosphate dehydrogenase by protein structure-based design: toward new drugs for the treatment of sleeping sickness. Journal of Medicinal Chemistry, v.37, p. 3605- 3613, 1994.

28 FERSHT, A. Structure and mechanism in protein science: a guide to enzyme catalysis and protein folding. New York: W. H. Freeman and Company, 2002.

29 LESKOVAC, V. Comprehensive enzyme kinetics. New York: Kluwer. 2004.

30 MUNOS, B. Lessons from 60 years of pharmaceutical innovation. Nature Review Drug Discovery, v. 8, p. 959-968, 2009. Disponível em: <http://www.nature.com/nrd/journal/v8/n12/pdf/nrd2961.pdf>.

Acesso em: 05 de mar. de 2010.

31 ORLOFF, J. et al. The future of drug development: advance clinical trial design. Nature Review Drug Discovery, v. 8. p. 949-957, 2009. Disponível em: <http://www.nature.com/nrd/journal/v8/n12/pdf/nrd3025.pdf>. Acesso em: 05 de mar. de 2010.

32 BABINE, R. E.; ABDEL-MEGUID, S. S. Protein crystallography in drug discovery. Weinheim: Wiley-VHC Verlag, 2004. (Methods and principles in medicinal chemistry, v. 20).

33 BÖHM, H. J.; SCHNEIDER, G. Protein-ligand interactions. Weinheim: Wiley-VHC Verlag, 2003. (Methods and principles in medicinal chemistry, v. 19).

34 ANDRICOPULO, A. D.; SALUM, L. B.; ABRAHAN, D. J. Structure-based drug design strategies in medicinal chemistry. Current Topics in Medicinal Chemistry, v. 9, n. 9, p. 771-790, 2009.

35 NATESH, R. et al. Structural details on the binding of antihypertensive drugs captopril and enalaprilat to human testicular angiotensin I converting enzyme. Biochemistry, v. 43, p. 8718-8724, 2004.

36 PROTEIN data bank. Disponível em:

<http://www.pdb.org/pdb/explore/explore.do?structureId=3FW3>. Acesso em: 09 jan. 2010.

37 LINDSKOG, S. Structure and mechanism of carbonic anhydrase. Pharmacology & Therapeutics

, v. 74, p. 1-20, 1997.

38 PROTEIN data bank. Disponível em:

<http://www.pdb.org/pdb/explore/explore.do?structureId=1UZF>. Acesso em: 09 jan, 2010.

39 SOUZA, D. H. F. et al. Trypanosoma cruzi glycosomal glyceraldehyde-3- phosphate dehydrogenase: structure, catalytic mechanism and targeted inhibitor design. FEBS Letters, v. 424, p. 131-135, 1998.

40 BRADFORD, M. M. A Rapid and sensitive method for quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye-binding. Analytical Biochemistry, v. 72, p. 248-254, 1976.

41 ZOTTIS, A. Planejamento racional de novos agentes quimioterápicos: identificação e estudos cinéticos de novos inibidores da enzima gliceraldeído-3- fosfato desidrogenase glicossomal de Trypanosoma. cruzi. 2009. 141 f. Tese (Doutorado em Física Aplicada) – Instituto de Física de São Carlos, Universidade de São Paulo, São Carlos, 2009.

42 NG, J. D. et al. The crystallization of biological macromolecules from precipitates: evidence for Ostwald Ripening. Journal Crystal Growth, v. 168, p. 50-62, 1996.

43 BOISTELLE, R.; ASTIER, J. P. Crystallization mechanisms in solution. Journal Crystal Growth, v. 90, p. 14-30, 1988.

44 BERGFORD, T. M. Protein crystallization : techniques, strategies, and tips - a laboratory manual. La Jolla: IUL Biotechnology Series, 1999.

45 DRENTH, J. Principles of X ray crystallography. Heidelberg: Springer, 1999.

46 STOUT, G.H.; JENSEN, L.H. X-ray structure determination: a pratical guide. London: The MacMillan Company,1989.

47 POLIKARPOV, I. et al. Set-up and experimental parameters of protein crystallography beamline at the brazilian national synchrotron radiation laboratory. Journal of Synchrotron Radiation, v. 5, p. 72-76, 1998.

48 GUIMARÃES, B. G. et al. The macromolecular crystallography beamline: a wiggler X-ray source at the LNLS. Journal of Synchrotron Radiation, v. 16, p. 69-75, 2009

49 ARDT, U. W. Design and use of a camera for low-angle X-ray diffraction experiments with synchrotron radiation. Journal of Physics E: Scientific Instruments, v. 10, n. 10, p. 1035-1044, 1977.

50 LESLIE, A. G. The integration of macromolecular diffraction data. Acta Crystallographica Section D, v. 62, p. 48-57, 2006.

51 EVANS, P. R., Recent advances. In phasing. In: PROCEEDINGS OF THE CCP4 STUDY. Warrington: Daresbury Laboratory, 1997. p. 97-102.

52 FRENCH, G. S.; WILSON, K. S. On the treatment of negative intensity observations. Acta Crystallographica Section A, v. 34, p. 517-525, 1978.

53 COLLABORATIVE COMPUTATIONAL PROJECT NUMBER 4. The CCP4 suite: programs for protein crystallography. Acta Crystallographica Section D, v. 50, p. 760- 763, 1994.

54 VAGIN, A.; TEPLYCOV, A. MOLREP: an automated program for molecular replacement. Journal of Applied Crystallography, v. 30, p. 1002-1025, 1997.

55 PAVÃO, F. et al. Structure of Trypanosoma cruzi glycosomal glyceraldehyde-3- phosphate dehydrogenase complexed with chalepin, a natural product inhibitor, at 1,95 Å resolution. FEBS Letter, v. 520, p. 13-17, 2002.

56 ADAMS, P. D. et al. PHENIX: building new software for automated crystallographic structure determination. Acta Crystallographica Section D, v. 58, p. 1948-1954, 2002.

57 EMSLEY, P.; COWTAN, K. COOT: model-building tools for molecular graphics. Acta Crystallographica Section D, v. 60, p. 2126-2132, 2004.

58 ENRAF NONIUS. Kappa CCD operation manual. Netherlands: 2001. p.3.

59 OTWINOWSKI, Z.; MINOR, W. Macromolecular crystallography. In: CARTER JUNIOR., C. W.; SWEET, R. M., (Ed.). Methods in enzymology. New York: Academic Press, 1997. v. 276, p. 307-326.

60 FARRUGIA, L. J. WingGX suite for small - molecule single - crystal crystallography. Journal of Applied Crystallography, v. 32, p. 837-838, 1999.

61 SHELDRICK, G. M. SHELXS 97: program for crystal structure resolution. Germany: University of Gottingen,1998.

62 SHELDRICK, G. M. SHELXS-97: program for the solution of crystal structures. Acta Crystallographica Section A, v. 46, p. 467-473, 1997.

63 SPEK, A. L. Single-crystal structure validation with the program PLATON. Journal of Applied Crystallography, v. 36, n. 1, p. 7-13, 2003.

64 FARRUGIA, L. J. ORTEP for windows :a version of ORTEPIII with a graphical user Interface (GUI). Journal of Applied Crystallography, v. 30, n. 5-1, p. 565, 1997.

65 MACRAE, C. F. et al. Mercury: visualization and analysis of crystal structures. Journal of Applied Crystallography, v. 39, n. 3, p. 453-457, 2006.

66 THOMPSON, J. Lactose metabolism in Streptococcus lactis: phosphorylation of galactose and glucose moieties in vivo. The Journal of Bacteriology, v. 140, p. 774- 785, 1979.

67 POOLMAN, B. et al. Control of glycolysis by gliceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase in Streptococcus cremoris and Streptococcus lactis. The Journal of Bacteriology, v. 169, p. 5887-5890, 1987.

68 EVEN, S.; GARRIGUES, C.; LOUBIERE, P.; LINDLEY, N.D.; COCAIGN- BOUSQUET, M. Pyruvate metabolism in Lactococcus lactis is dependent upon glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase activity. Metabolic Engineering, v. 1, 198-205, 1999.

69 FENSELAU, A. Nicotinamide adenine dinucleotide as an active site director in glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase modification. Journal of Biological Chemistry, v. 245, p. 1239-1246, 1976.

70 GUIDO, R. V. C. et al. Kinetic and crystallographic studies on glyceraldehyde-3- phosphate dehydrogenase from Trypanosoma cruzi in complex with iodoacetate. Letters Drug Design and Discovery, v. 6, p. 210-214, 2009.

71 RAMACHANDRAN, G. N.; RAMAKRISHNAN, C.; SASISEKLARAN, V. Stereochemistry of polypeptide chain configurations. Journal Molecular Biology, v. 7, p. 95-99, 1963.

72 MAYER, M,; ROCHA LIMA, H. Zur Entwicklung von Schizotrypanum cruzi in Saengatieren. Arch Schisffs u Tropen Hyg, v.16, p. 90-94, 1912.

73 MAYER, M,; ROCHA LIMA, H. Zum Verhalten von Schizotrypanum cruzi in Warmbluetern und Arthropoden. Arch Schiffs u Tropen-Hyg., v. 5, p. 101-136, 1914.

74 SILVA, J. J. et al. Novel ruthenium complexes as potential drugs for Chagas's disease: enzyme inhibition and in vitro/in vivo trypanocidal activity. British Journal of Pharmacology, v. 156, 2010. In press.

75 CASTILLA, J. J. et al. In vitro activity and biochemical effectiveness of new

organometallic complexes of osmium(III) against Leishmania donovani and Trypanosoma cruzi. Arzneimittelforschung, v. 46, p. 990-996, 1996.

76 HESS, D. T. et al. Protein S-nitrosylation: purview and parameters. Nature Review Molecular Cell Biology, v. 6, n. 2, p. 150-158, 2005.

77 ASCENZI, P. et al. Inactivation of parasite cysteine proteinase by the NO-donor 4- (phenylsulfonyl)-3-((2-(dimethylamino)ethyl)thio)-furoxan oxalate. Biochimica et Biophysica Acta. v. 1703, p. 69-77, 2004.

78 BOCEDI, A. et al. Kinetics of parasite cysteine inactivation by NO-donors. Biochemical Biophysical Research Communications, v. 315, p. 710-718, 2004.

79 SALVATI, L. et al. NO Donors Inhibit Leishmania infantum cysteine proteinase activity. Biochimica et Biophysica Acta, v. 1545, n. 9, p. 357-366, 2001.

80 STAMLER, J. S. et al. S-Nitrosylation of proteins with nitric oxide: synthesis and characterization of biologically active compounds. Proceedings of the National Academy of Sciences, v. 89, p. 444-448, 1992.

81 BENHAR, M.; FORRESTER, M. T.; STAMLER, J. S. Protein denitrosylation: enzimatic mechanisms and cell function. Nature Review Molecular Cell Biology, v. 10, p. 721-732, 2009.

82 SCHREITER, E. R. et al. S-Nitrosylation-induced conformational change in blackfin tuna myoglobin. Journal Biological Chemistry, v. 282, p. 19773-19780, 2007.

83 RONCAROLI, F.; OLABE, J. A. The reactions of nitrosyl complexes with cysteine. Inorganic Chemistry, v. 44, p. 4719-4727, 2005.

84 SILVA, J. J. N. Tetraaminas de rutênio (II) como transportadora de óxido nítrico e benznidazol e sua ação sobre o Trypanosoma cruzi. 2008. 185 f. Tese (Doutorado em Química Inorgânica) – Instituto de Química de São Carlos, Universidade de São Paulo, São Carlos, 2008.

85 RATES, S. M. K. Plants as source of drugs. Toxicon, v. 39, p. 609-613, 2000.

86 MONTANARI, C. A. ; BOLZANI, V. S. Planejamento racional de fármacos baseado em produtos naturais. Química Nova, v. 24, p. 105-111, 2001.

87 CORREIA, S. J.; DAVID, J. P.; DAVID, J. M. Metabólitos secundários de espécies de Anacardiaceae. Química. Nova, v. 29, p. 1287-1300, 2006.

88 PEREIRA, J. M. et al. Anacardic acid derivatives as inhibitors of glyceraldehyde-3- phosphate dehydrogenase from Trypanosoma cruzi. Bioorganic Medicinal Chemistry, v. 16, p. 8889-8895, 2008.

89 POPOVYCH, N. et al. Dynamically driven protein allostery. Nature Structural Molecular Biology, v. 13, p. 831-838, 2006.

90 GOODEY, N. M.; BENJOVIC, S. J. Allosteric regulation and catalysis emerge via a commom route. Nature Chemical Biology, v. 4, p. 474-481, 2008.

Tabela 1 - Distâncias interatômicas (Ǻ) para o cis-[Ru(NO)(bpy)2SO3]PF6 com os respectivos

desvios padrão entre parênteses.

Átomo 1 Átomo 2 Distância

Ru S 2,3766(7) N4 C15 1,349(4) Ru N1 2,092(2) N4 C11 1,345(4) Ru N2 2,141(3) C1 C2 1,374(4) Ru N3 2,091(2) C2 C3 1,374(5) Ru N4 2,070(2) C3 C4 1,369(6) Ru N5 1,748(2) C4 C5 1,391(4) S O1S 1,472(2) C5 C6 1,471(4) S O2S 1,454(2) C6 C7 1,379(5) S O3S 1,468(2) C7 C8 1,367(6) P F4 1,580(4) C8 C9 1,357(6) P F5 1,564(4) C9 C10 1,377(5) P F6 1,518(6) C11 C12 1,376(4) P F2 1,534(5) C12 C13 1,369(5) P F3 1,581(4) C13 C14 1,371(4) P F1 1,530(5) C14 C15 1,386(4) Continua

Continuação O1N N5 1,137(3) C15 C16 1,468(4) O1W H11W 0,6600 C16 C17 1,380(4) O1W H12W 0,9400 C17 C18 1,376(5) O2W H21W 0,8600 C18 C19 1,366(5) O2W H22W 0,9200 C19 C20 1,368(5) O3W H31W 0,6700 O3W H32W 0,8700 N1 C5 1,365(4) N1 C1 1,334(4) N2 C6 1,347(4) N2 C10 1,336(4) N3 C16 1,349(4) N3 C20 1,340(4)

Tabela 2 - Ângulos de ligação (o_{) para cis-[Ru(NO)(bpy)}

2SO3]PF6com os respectivos desvios

padrão entre parênteses

Átomo 1 Átomo 2 Átomo 3 Ângulo

S Ru N1 97,20(7) S Ru N2 170,06(7) S Ru N3 86,30(7) S Ru N4 89,37(7) S Ru N5 86,30(8) F1 P F3 90,0(3) F1 P F2 179,3(3) F5 P F6 90,1(3) F4 P F6 177,7(3) F4 P F5 88,5(2) F1 P F4 87,6(2) F1 P F5 92,7(3) F1 P F6 90,6(3) N1 Ru N2 77,87(10) N1 Ru N3 91,69(9) N1 Ru N4 167,49(9) N1 Ru N5 94,15(10) N2 Ru N3 85,23(9) N2 Ru N4 93,96(9) N2 Ru N5 102,57(11) N3 Ru N4 78,07(9) N3 Ru N5 171,09(10) C1 N1 C5 119,6(2) N4 Ru N5 96,90(10) C6 N2 C10 119,9(3) Ru S O1S 106,67(10) Ru N1 C1 125,4(2) Ru N1 C5 114,96(19) Ru N2 C6 114,6(2) Ru S O2S 108,32(10) Continua

Continuação Ru N2 C10 125,4(2) Ru S O3S 107,31(11) Ru N3 C16 115,25(18) Ru N3 C20 125,75(19) Ru N4 C11 124,91(19) Ru N4 C15 115,92(18) Ru N5 O1N 173,6(2) O1S S O2S 111,97(14) O1S S O3S 110,40(14) C16 N3 C20 118,8(2) O2S S O3S 111,90(14) F2 P F3 89,6(3) C11 N4 C15 119,2(2) F2 P F4 91,9(2) F2 P F5 87,7(3) F2 P F6 89,9(3) N1 C1 C2 122,4(3) F3 P F4 89,17(19) C1 C2 C3 118,9(3) F3 P F5 176,4(3) C2 C3 C4 119,3(4) F3 P F6 92,4(3) C3 C4 C5 120,4(3) N1 C5 C4 119,5(3) C4 C5 C6 124,0(3) N1 C5 C6 116,5(3) N2 C6 C5 115,5(3) N2 C6 C7 120,6(3) C5 C6 C7 123,9(3) C6 C7 C8 119,1(3) C7 C8 C9 120,0(4) C8 C9 C10 119,3(3) Continua

Continuação N2 C10 C9 121,0(3) N4 C11 C12 121,5(3) C11 C12 C13 119,5(3) C12 C13 C14 119,5(3) C13 C14 C15 119,2(3) N4 C15 C14 121,1(3) N4 C15 C16 115,4(2) C14 C15 C16 123,6(3) N3 C16 C15 115,2(2) N3 C16 C17 120,9(3) C15 C16 C17 123,9(3) C16 C17 C18 119,8(3) C17 C18 C19 118,7(3) C18 C19 C20 119,5(3) N3 C20 C19 122,2(3) H11W O1W H12W 99,00 H31W O3W H32W 95.00 H21W O2W H22W 104,00