A. İtikâdî Tartışmalar
5. Diğer İtikadi Tartışmalar
A partir dos dados obtidos foi possível relacionar alguns genes diferencialmente expressos em cada condição analisada e no core estimulon, conforme dados da literatura ou suposições baseadas na localização dos genes no genoma de C.pseudotuberculosis 1002 e pelo envolvimento ao mesmo processo biológico, como GntR, nanK e opp. Na figura 27 propomos um modelo de regulação e representamos alguns genes que se destacaram pelo valor de RPKM apresentado em cada condição.
155 FIGURA 27 –Representação de uma possível regulação entre os genes diferencialmente expressos.
Nesta figura representamos alguns genes que foram diferencialmente expressos, que mostraram importância no processo da permanência da bactéria nos estresses. Em verde com contorno verde escuro, estão representados genes que foram induzidos no estresse térmico. Azul escuro com contorno verde- genes induzidos do estresse osmótico. Em amarelo mais forte com contorno em verde refere-se aos genes induzidos do estresse ácido. Amarelo claro com contorno marron- genes reprimidos do estresse ácido. Em rosa escuro com contorno verde- genes induzidos do core estimulon. Em rosa claro com contorno marron-genes reprimidos do core estimulon. A interrogação significa uma hipótese de regulação, sem dados na literatura para confirmação. O X vermelho significa que a reação de Fenton não acontecerá, quando a Dps está presente e forma um complexo com o ferro do meio. O gene kgd foi induzido, porém em uma expressão baixa. A seta vermelha representa repressão do gene e seta verde indução do gene, ou processo ativo indicando a atuação da proteína codificada pelo gene (como no gene cat). Em marron, genes que não foram considerados diferencialmente expressos.
156 7. CONCLUSÕES
O presente trabalho é pioneiro no Brasil e amplia o conhecimento sobre os recursos utilizados pela bactéria no processo de infecção e abre um leque para novas investigações biológicas, visando melhor entender sua regulação e patogenia. Através do sequenciamento do cDNA realizado pela plataforma SOLiDTM, uma tecnologia de nova geração, foi possível identificar grande número de genes diferencialmente expressos, e verificar provável interação entre eles;
Todo o genoma de C.pseudotuberculosis 1002 foi representado conseguindo distinguir regiões transcricionalmente ativas em todas as condições testadas e observando diferenças na expressão de cada gene, verificando a influência dos estresses na expressão de cada um;
O estresse térmico, depois de estabelecido o corte pelo fold-change, foi o meio que menos representou genes, levando a sugerir que a maioria dos genes são, possivelmente, regulados, além de outros fatores, pela densidade celular. Porém, genes interessantes foram descobertos como o gene ahpD, que em outro microrganismo já demonstrou seu papel protetor. Genes codificantes de chaperonas também foram induzidos, como já era esperado;
O estresse osmótico e ácido apresentou quase a mesma quantidade de genes diferencialmente expressos, mostrando que logo no início a bactéria se prepara para se manter e sobreviver nestes ambientes prejudiciais para a célula;
No estresse osmótico, entre outros genes interessantes, o destaque foi para o gene spaD que, quando interrompido em C. pseudotuberculosis linhagem T1 virulenta, apresentou proteção de 60% contra LC em trabalho realizado por membro da nossa equipe;
O estresse ácido foi a condição que mais apresentou genes relacionados à virulência, como o fagD, dps, msrB, lysR que além de contribuirem com a informação a respeito do processo de infecção, podem se tornar fortes candidatos vacinais;
Vários genes parecem ser regulados pela densidade celular, e possivelmente a expressão seja maior em fase de crescimento mais tardia, mas ainda assim, nossos resultados revelaram vários genes que demonstram ser importantes para sobrevivência e virulência dentro de cada nicho testado, principalmente proteínas hipotéticas.
Acreditamos que os resultados advindos através deste projeto sejam primordiais para entendimento do desenvolvimento da infecção causada por C. pseudotuberculosis e que podem ser utilizados como alvos para tratamento e desenvolvimento de novas vacinas contra este importante microrganismo, em estudos futuros.
157 8. PERSPECTIVA
Com os dados obtidos pelo sequenciamento, pretendemos:
Identificar os transcritos não codificantes que possivelmente estejam envolvidos na
regulação,
Aprimorar o processo de anotação,
Fazer a predição da rede regulatória in silico e validar com estes dados
experimentais
Realizar réplicas biológicas (duas) para validação dos resultados com a mesma
tecnologia utilizada neste trabalho .
Já finalizada toda a parte experimental relacionada a linhagem 258, a próxima etapa visa:
Identificar o perfil transcricional desta linhagem e comparar os dois
microrganismos (1002 e 258) para detectar a preferência ao hospedeiro, ou maior resistência e sensibilidade em determinado meio.
158 9. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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