Çürüklük Deneyi

Çürüklük testleri İstanbul Üniversitesi Orman Fakültesi, Orman Endüstri Mühendisliği Bölümü, Orman Biyolojisi ve Odun Koruma Teknolojisi Anabilim Dalı, Odun Mikrobiyolojisi ve Koruma Laboratuvarında gerçekleştirilmiştir. Bu kapsamda aşağıda ayrıntılı olarak açıklanan yöntem kapsamında steril kabin, otoklav, etüv, hassas terazi, inkübatör cihazları ile malt ekstrakt agar, toprak, kültür şişeleri vb. sarf malzemeler kullanılmıştır.

Üç egzotik ağaç türü iroko, sapelli ve doussie ağaçlarının (kontrol örneği, soğuk su, sıcak su ve alkol ile yıkanmış) odunları kullanılmıştır. Çalışmada ayrıca, mantarların çürütme kapasitesinin kontrolü kapsamında kayın ve sarıçam diri odun örnekleri kullanılmıştır. Ağaç malzeme örnekleri Düzce ilinde orman ürünleri ithalat ve ihracatı yapan bir şirketten rastgele örnekleme yöntemine göre temin edilmiştir. Her bir ağaç türü için

40

oluşturulan örneklerin sağlam, düzgün lifli, budaksız olmasına, üzerinde küflenme, renklenme ve odun çürüklüğü bulunmamasına dikkat edilmiştir.

Çalışmada ağaç malzemede çürüklük mantarları olarakIrpex lacteus (Fr. : Fr.) Fr. (IRL 5367) beyaz çürüklük mantarı ve Postia placenta (Fr.) M.J. Larsen & Lombard (Mad 698-R)esmer çürüklükmantarı kullanılmıştır.

Örneklerin hazırlanması: Bu çalışmada, ASTM (American Standard Testing Methods)- 1413-07, ASTM D 2007 ve AWPA (American Wood Protection Association) E10- 91standartları esas alınmıştır [42], [61], [63].

Toprak / Blok testleri için örnekler, 20 (T) x 20 (R) x 10 (B) mm boyutlarında kesilerek hazırlanmıştır. Her bir test grubu 18 adet örnekten oluşturulmuştur. Bunlardan 9 adeti beyaz çürüklük, 9 adeti ise esmer çürüklük denemeleri için kullanılmıştır. Böylece, toplam 216 adet (iroko, sapelli ve doussie ağaçlarının her biri için kontrol, soğuk su, sıcak su ve alkol ile yıkanmış) örnek kullanılmıştır. Ayrıca mantarların çürütme kapasitesinin belirlenmesi için 9’ar adet kayın ve sarıçam örneği kullanılmıştır. Deneylerde kullanılacak örnekler Şekil 2.8’de verilmiştir.

41

Mantar kültürleri ve besleme levhalarının hazırlanması; yıkama işlemi görmüş ve görmeyen (kontrol) örneklerin (sapelli, doussie ve iroko) mantar etkisine bırakılması için, malt-agar besin ortamında mantar kültürleri geliştirilmiştir. Bu amaçla 45 g malt ekstrakt- agar bir kaba konularak üzerine 1000 ml distile su eklenerek iyice karıştırılmıştır. Daha sonra otoklavda 103 kPa basınç ve 121oC’de 15 dakika sterilize işlemi yapılan besin ortamı steril petri kaplarına aktarılmış, petri kapları soğuduktan sonra hazır bulunan mantar kültürlerinden petri kaplarına aşılama yapılmıştır.

Petri kabında hazırlanan mantar kültürü Şekil 2.9’da gösterilmiştir.

Şekil 2.9. Çalışmada kullanılan çürüklük mantar kültürleri.

Besleme levhaları, sarıçam ve kayın diri odunundan 0,3(T) x 2,9(R) x 3,5(B) cm boyutlarında hazırlanmış ve 22±1°C sıcaklık ve %65±5 bağıl neme sahip klima odasında bekletilmiştir.

Toprağın hazırlanması: ASTM D-1413/07standardına göre, denemelerde kullanılacak toprağın su tutma kapasitesi %20-40olması gerekmektedir. Toprağın su tutma kapasitesi aşağıda verilen eşitlik (2.2) ile hesaplanmıştır [64].

Toprağın Su Tutma Kapasitesi % = [(Yaş Ağırlık –Kuru Ağırlık) /Kuru Ağırlık] x100 (2.2)

42

Toprak içindeki yabancı maddeler temizlendikten sonra ASTM-2017’ye göre 0,51 ve 0,30 cm’lik eleklerden elenerek kapalı kaplar içinde muhafaza edilmiştir.

Deneme şişelerinin hazırlanması: Denemelerde, ASTM D-1413/07 standardında belirtilen, iç hacmi 225 cm3 _{ve ağız çapı en az 32 mm olan köşeli şişeler kullanılmıştır} (Şekil 2.15). Standartlara göre, şişe içine konacak toprakta bulunması gereken su yüzdesi, toprağın su tutma kapasitesinin %130’u olmalıdır. Bunun için her şişeye konacak miktar kadar hava kurusu toprak tartılmış ve bu toprak 12 saat süreyle bir fırında 105°C’ye kadar kurutulmuş ve tam kuru hale gelen toprağın ağırlığı bulunarak, hava kurusu topraktaki rutubet miktarı hesaplanmıştır. Şişeye eklenecek su miktarı aşağıdaki eşitlik yardımıyla bulunmuştur.

İlave Edilecek Su miktarı, g = (1,30 x A-B) x D/(100+B) (2.3) Bu eşitlikte;

A= Su tutma kapasitesi (%)

B=Hava kurusu toprağın rutubet miktarı (%)

D= Test şişesine konacak toprağın hava kurusu ağırlığı (g) dır.

Şekil 2.10. Çürüklük denemelerinde kullanılan kültür şişelerinin hazırlanışı. Mantarların geliştirilmesi sürecinde, bir huni yardımıyla yaklaşık 120 g toprak ve belirlenen miktarda (25 ml) distile su her bir şişeye eklenmiştir. Şişe daha sonra, toprak

43

yüzeyi ıslatılmadan şişeler hafifçe sallanıp, üzerine beyaz çürüklük mantarı için kayın esmer çürüklük mantarı için sarıçam besleme levhası yerleştirilmiştir. Hazırlanan şişeler daha sonra kapakları gevşek şekilde otoklavda 103 kPa basınç ve 121°C’de 30 dakika sterilize edilmiştir. Sterilize işlemi bittikten sonra, otoklavdan çıkarılan şişelerin kapakları sıkıca kapatılarak aşılama işlemine hazır hale getirilmiştir.

Aşılama işlemi: Steril kabin içerisinde hazırlandığı açıklanan ve en fazla 7 günlük olan mantar kültürlerinden besin ortamı ile birlikte petri kaplarından 1cm2_{’lik büyüklükte} parçalar alınıp, şişe içerisindeki besleme levhalarının kenarlarına yerleştirilmiştir. Bu işlemler sırasında kullanılan aletlerin sterilize edilmesi için alkol ocağı kullanılmıştır. Aşılama işlemi bittikten sonra, şişe kapakları gevşek duruma getirilerek 26,7±1,1°C sıcaklıkta ve %70±4 bağıl nemdeki inkübasyon odasında besleme levhalarının üzeri tamamen mantar miselleri ile kaplanıncaya kadar (yaklaşık 3 hafta) bekletilmiştir. Aşılama işlemi Şekil 2.11’de gösterilmiştir.

Şekil 2.11. Aşılama işlemi.

Odun örneklerinin şişelere yerleştirilmesi: Yıkanma işlemi görmüş ve yıkanma işlemi görmemiş kontrol örnekleri etüvde 60 o_{C sıcaklıkta 3 gün süre ile tutulmuş ve 0,01g} hassasiyetle ağırlıkları tespit edildikten sonra petri kapları içerisinde 100°C’de 20 dakika

44

otoklavda sterilize edilmiştir. Bu işlem sonrasında her şişedeki besleme levhaları üzerine, enine kesit yüzeyleri aşağı bakacak şekilde 2’şer örnek konmuştur. Daha sonra test şişeleri kapakları gevşek şekilde sıcaklığı 26,7±1,1°C ve bağıl nemi %70±4 olan inkübasyon kabinine yerleştirilmiştir.

Örneklerin şişelere yerleştirilmesi Şekil 2.12’de, örneklerin inkübasyon kabinine yerleştirilmesi Şekil 2.13’te ve İnkübasyon kabini Şekil 2.14’te verilmiştir.

45

Şekil 2.13. Örneklerin inkübasyon Şekil 2.14. İnkübasyon kabini. kabinine yerleştirilmesi.

Mantar denemelerinin sonlandırılması ve ağırlık kayıplarının belirlenmesi; 12 hafta olarak seçilen deneme süresi sonunda, odun blokları şişelerden çıkartılmış ve örneklerin yüzeylerindeki mantar miselleri dikkatlice fırçayla temizlenmiştir. Daha sonra örnekler etüvde 60o_{C sıcaklıkta 3 gün süre ile tutulmuştur. Denemelerde kullanılan kültür şişeleri} Şekil 2.15’te verilmiştir.

46

Daha sonra, 0,01g hassasiyetle tartılarak deneme numunelerinin T2 ağırlıkları bulunmuştur. Deneme örneklerinin ağırlık kayıplarının hesaplanmasında, tespit edilen T1 ve T2 ağırlıklarından yararlanılarak aşağıda belirtilen eşitliğe göre her bir örneğin % ağırlık kaybı hesaplanmıştır.

Ağırlık Kaybı, % = [(T1 - T2)/ T1 ]×100 (2.4) Bu eşitlikte,

T1: 60oC sıcaklıkta 3 gün süre ile tutulmuş, çürüklük öncesi örnek ağırlığı (g),

T2: 60oC sıcaklıkta 3 gün süre ile tutulmuş, çürüklük sonrası örnek ağırlığını (g) göstermektedir.

Rutubet Miktarının Belirlenmesi: Deney sonunda örnekler etüvde 60 o_{C sıcaklıkta 3 gün} süre ile tutulmuştur. Deney örnekleri 0,01g hassasiyetle tartılarak T2 ağırlıkları belirlenmiştir. Rutubet ölçümleri aşağıda verilen formül ile hesaplanmıştır.

Rutubet Miktarı % = [(T1 - T2)/ T2 ]×100 (2.5) Bu eşitlikte,

T1: Çürüklük testinden sonraki örnek ağırlığı (g),

T2: Çürüklük testinden sonraki tam kuru örnek ağırlığını (g) göstermektedir.