Histolojik Yöntemler
✓ Hücre ve hücrelerin oluşturduğu dokuların yapısal özelliklerinin mikroskop altında incelenebilir hale getirilmesini sağlayan
preparat hazırlama yöntemlerine histoloji tekniği adı verilir. ✓ Hücre ve dokuları iki şekilde incelemek mümkündür.
CANLI
Histolojik Teknik
Canlı İnceleme
üSıvı ortamda birbirinden ayrı duran hücreler (kan, lenf, sperm, beyin omurilik sıvısı, sinoviyal sıvı vb.)
üDokular özel işlemlerle hücrelere ayrılarak izole hale getirilip hücreler incelebilir
Canlı İncelemede
üFaz kontrast mikroskobu
üHoffman Modülasyon Kontrast Mikroskobu üDiferansiyel interferans mikroskop
üVital boyalar (az toksik) Ör: Çini mürekkebi, tripan mavisi
İnsan göbek kordonu mezenkimal kök hücreleri (hUC-MSCs) (mediyum içinde)
Cansız İnceleme
Tespit edilmiş ve boyanmış ince doku kesitleri/hücreler
Hücreleri Mikroskobik İnceleme
Yöntemleri
üRutin preparat hazırlanması üÖzel tekniklerin uygulanması üMikroskobik incelemeler
Temel Aşamalar
üTespit (fiksasyon) üYıkama
üSuyunu giderme (dehidratasyon) üSaydamlaştırma üEmdirme (embeding) üGömme (bloklama) üKesme üBoyama üKapatma
Tespit
Hücreleri ve hücrelerarası materyali yaşamın durduğu andaki yapısal ve kimyasal
Tespitin Amacı
üZar yapısını sabitleştirip otolizi önlemek,
üLipoproteinler, glikoproteinler, nükleoproteinler, karbonhidratlar, lipitler vb. maddeleri sabitleştirmek,
üProteinlerde koagülasyon ve çökme,
üDokuda sertleşme ve kesilebilirlik,
üBoyanmanın kolaylaştırılması,
Tespit Yöntemleri
Kimyasal Fiziksel
üIsı
üDondurma üKurutma
Isı
üProteinler koagüle olur, yağlar erir
üBüyük parçaların tesbitinde kullanılır
Dondurma (Freezing)
üDoku kalınlığı 2mm. ‘den küçük olmalıdır
üBuz kristali oluşması kriyoprotektanlarla azaltılır. Ör: gliserol, dimetilsülfoksit, sükroz
üSıvı azot (-196 0C), solid karbon dioksit (kuru buz) (-75 0C)
Tespiti Etkileyen Faktörler
üTespit sıvısının amaca göre seçimi,
üTespit sıvısının miktarı,
üTespit sıvısının pH’sı,
Tespit Teknikleri
§ İmmersiyon
Tespit sıvıları
üFormol veya Formalin; Proteinlerle hidroksimetil köprüleri oluşturur
üGluteraldehit
üAseton
üOsmiyum tetroksit
üEtil Alkol
Yıkama
üTespitte kullanılan kimyasalların tortu ve
çökeltilerini uzaklaştırmak için yapılır. Tespit türüne göre :
üSu
Suyunu Giderme
ü Dokudaki suyun uzaklaştırılmasını amaçlar. Düşük
dereceden başlayarak yükselen konsantrasyonlarda etil alkol kullanılır
Saydamlaştırma
üDokudaki alkollü çıkarıp gömme materyalinle yer değiştirebilen bir maddenin dokuya sokulması amaçlanır.
üBu maddeler aynı zamanda ışık geçirgenliğini de arttırarak dokuyu şeffaflaştırır. üksilol ükloroform übutanol ümetil benzoat üamyl asetat ükarbon tetraklorür
Emdirme
üAlkollü giderilmiş doku parçaları gömme materyaline alınır üparafin üjelatin, agar üepon üepoksi resin üselloidin, plastik maddeler
Gömme-bloklama
Emdirme materyalin içine almış parçalar aynı materyal içinde
uygun pozisyonda özel kalıplara
Kesme
Mikrotom
Sliding Rotary
Bıçak hareket eder Blok hareket eder (büyük bloklarda)
