Antibiyogram Testleri
Broth Mikrodilüsyon Yöntemi
•Bu yöntem 96 kuyucuklu mikroplakalarda gerçekleştirilir ve seri dilüsyona ihtiyaç duyar.
•İki kat seri sulandırım sonucunda antibiyotiklerin belirli mikroorganizmalara karşı MİK değerleri belirlenebildiğinden
kantitatif sonuç alınabilir.
•Disk difüzyon testine göre daha hassas bir test olmasına karşın
daha çok iş gücü gerektiren bir yöntemdir.
Antibiyogram Testleri
Broth Mikrodilüsyon Yönteminin Uygulanışı
•Antibiyotik duyarlılığı incelenecek mikroorganizma için uygun sıvı besiyeri (Mueller Hinton Agar-MHB) hazırlanarak mikroplakalara konulur.
•18-24 saatlik sıvı mikroorganizma kültürünün bulanıklığı 0,5 McFarland olacak şekilde ayarlanır.
•Çok ya da tek kanallı mikropipetlerle antibiyotik mikroplakalara
en yüksek dozdan başlanacak şekilde yerleştirilir. Daha sonra
diğer kuyucuklara aynı antibiyotiğin seri sulandırımı yapılır.
Antibiyogram Testleri
•Broth Mikrodilüsyon Yönteminin Uygulanışı
•Mikroorganizmalar mikropipetler ile kuyucuklara ekilir.
•Mikroplakalar 37 ºC’de 18-24 saat boyunca inkübe edilir.
•İnkübasyon sonrasında, mikroplakalardaki gelişim gözle yada mikroplaka okuyucu özelliği olan spektrofotometrede ölçülür.
Ölçülen değer CLSI yada EUCAST gibi kurumların bildirmiş
olduğu standart değerlere göre karşılaştırılarak
mikroorganizmanın o antibiyotiğe karşı duyarlı ya da dirençli
olduğu belirlenir.
Antibiyogram Testleri
•Broth Mikrodilüsyon Yönteminin Uygulanışı
Bu deneyde hiç antibiyotik içermeyen fakat mikroorganizma ve besiyeri içeren kuyucuklar pozitif kontrol olarak kullanılır.
Benzer şekilde antibiyotik ve besiyeri içeren fakat
mikroorganizma içermeyen kuyucuklar negatif kontrol olarak kullanılır.
Pozitif kontrolde üreme olmaması ya da negatif kontrolde
üreme olması durumunda deney tekrar edilir.
Antibiyogram Testleri
ug/mL
11024 2
512 3
256 4
128 5
64 6
32 7
16 8
8 9
4 10
2 11
1 12
0.5
A B C D E F G
H PK PK NK NK
Üreme var
Üreme yok
PK: Pozitif kontrol
NK: Negatif kontrol
Antibiyogram Testleri
ug/mL
11024 2
512 3
256 4
128 5
64 6
32 7
16 8
8 9
4 10
2
A PK NK
B PK NK
C PK NK
D PK NK
E PK NK
F PK NK
G PK NK
H PK NK
Üreme var Üreme
yok
