Ein Modifiziertes Verfahren zur Darstellung
des
Gc-Polymorphismus
WOLFGANG HUCKENBECK, WOLFGANG BONTE, VALERIA STANCU
Institut fiir Rechtsmedizin der Heinrich-Heine-Universitiit, Dusseldorf, Deutschland
Gc-POLIMORFiZMiNiN EELIRLENMESiNDE DE(;l~TtRiLMi~ EtR YONTEM Ozct
Gc-alt tipleri gerek nesep be!irlemelerinde gerekse iz analizinde adli laboratuvarlarda yaygm bir §ekilde
incelenmektedir. Bu ama91a blotting yontemIeri giderek onem kazanmakta olup ozellikle 1 S ve 1 F
bandlannm aymmmi kolayla§tlrml§ttf- Bu 9ah§mada, -20°C de u9 yll siire ile bcklemi§ 100 kan
omeginin Gc-alt tiplemesi, taraflmlzca hazlrlanan 1mmobiline jclleri kullanilarak izoelektrik odaklama
ve nitroseliiloz pasif blotting ile gergeklqtirildi. Tum alt tiplerin birbirinden belirgin bir §ckilde aynlabildigi gozlendi.
Schliissclworter: Gc-Polymorphismus - Immobilines - Blotting-Technik
EINLEITUNG
Das Gc-System
wird
selt J ahren
routinemaJ3ig
untersucht (1-6). Mit der
Entdeckung
der Gc-Subtypen wurde
der Einsatz
des Systems bei Paternitatsuntersuchungen noch
cffektiver (8,10,11,12,14,15)_ Auch bei Spurenuntcrsuchungen
wird
die
Gc-Subtypisie
r
ung mittlerweile in den meisten rechtsmedizinischen
Labors
routinemaJ3ig eingesetzt.
Mit der Entwicklung der
sog.
Blotting-
Te
chnik findet dieses
Ve
r
fahren
auch
bei, der GC-Typisierung vermehrt Anwendung (16,17)_ Eine
Obersichtsarbeit
findet sich
bei Rand et
al
(13). Die wichtigsten Gcsichtspunkte
bei
Spurcnuntersuchungen sind eine gute Auftrennung (insbesondere IS und IF)
sowie cine
spezifische
Erfassung der
Gc-Banden_
Aus
diesem Grund versuchtcn wir
eine
Aufspreitzung der
Darstcllung mittels Immobilines wahrend der Fokussierung.
MATERIAL und METHODE
Fur unsere Untersuchungen verwendeten wir altere gelagcrte Scrumproben. Diese stammten von dcfinierten chronischen Alkoholikem (9) und wiesen ein Lagcrungsalter von bis zu 3 Iahren auf. Bei
einer Lagerungstemperatur von -20°C waren sie im Laufe der Zeit fur andere Untersuchungen mehrmals
aufgetaut und wieder eingefroren worden.
Adli Tlp Derg., 7, 23 -25 (1991)
ADL
İ TIP DERGİSİ
Journal of Forensic Medicine
Adli Tıp Dergisi 1991; 7(1-2): 23-25
W. HUCKENI3ECK, W. BONTE, V. ST A!~CU
Die
D
arstellung
d
er
G
c-Subtypen erfolgte
n
ach dem nachfolgen
d
en Schema:
-
V
er
d
unnung der Proben 1
:25
i
n 6M Harnstoff
-Autbringung der
P
robe
n
1 cm von der Kathode entfernt
24
-
I
soe
le
kt
r
ische
F
okussierung im
rehydratisiertem
Gel:
I
mmob
il
ine
p
H 4,5-5,4
(Pharmac
i
a); 2500 Vo
l
t, 5
rn
A,
10 W tiber 3 Stundcn
.
-Passiv-Blot tibe
r
20 Minuten au
f
Nitrocellulose
(Anti-Gc, Verdunnung 1:300, Anti-
G
oat)
-2.
Antikorper (peroxidase
l
abeled anti-goat immunoglobulinc, 1: 1000)
-
F
arbung m
i
t Carbazo
l
(20 mg 3-Amino-9-Ethy1carbazol in 2,5 ml Aceton,
0,05 M Acetatpuffer p
H
5 auf 50 mI, 0.0025 m
l
30 %
H
ydrogcnperoxidase)
.
Abbildung 1. Gc-Subtypen; von links nach rcchts: 2-IS, IF-IS, 2-IS, IS, IS, 2-IF, 2-IS, IS,
IF-IS, ... .
25 Ein Modifiziertes Verfahrcn zur Darstellung des Gc-Polymorphismus
ERGEBNISSE und
DISKUSSION
Die Ergebnisse unserer Darst
ellungstechnik
zeigt die Abbildung
1.
AUe Gc-Subtypen
stellen sich
kim
dar
und sind leieht
zu
idcntifizieren. Insbes
onde
re
die
Typen
I
S und IF
sind leieht
zu djfferenzieren. Aueh
wenn
der sc1tene IF-Typ ungWeklieherweise nur von
reincrbigen
Ge*2
umrahmt ware,
dUrften
keinc Se
hwierigkei
ten
be
i
der Identifikation
au[tretcn.
Interessanterweise traten bei
insgesam
t
10
0
un
tersueht
en
Proben trotz des
naehgewiescncn Alkoholismus
(7
)
keine sog. "Sauferbalken" auf, die zu
Fehlinterpretationen fUhrcn kOnnten. Aufgrund dieser Befu
nde
und erster Versuche mit
selbstgegosscnen Immobiline-Gelen halten wir den
Einsatz dcr vorgesteUtcn
Tcc
hnik
aueh
in
der Spurcnkunde fUr sinnvoll.
LITERA TURVERZEICHNIS
1 Cleve, II., Constans, I. (1978) Vox Sang., 54,215·225.
2 Cleve, H., Constans, I., Berg, S., Hoste, B., Ishimoto, II., Spees, E.K., Weber, W. (1981) llum.
Genet.,57,312-316.
3 Cleve, II., Weidinger, S., Gurtler, L.G., Deinhardt, F. (1978) Hum. Genet., 44, 117. 4 Cleve, I!. (1966) lIum. Genet., 2, 355-362.
5 Cleve, II. (1973) 1. Med. Sci., 9, 1133-1146. 6 Cleve, II. (1988) Naturwiss., 72,519-526.
7 Huekenbeck, W. (1990) Postervortrag, World Police Medical Officers Conference, Auckland, Neuseeland, 5.-9.11.
8 Kuhnl, 1'. (1980) Elektrofokussierung in der Blutgruppenkunde, Habilitation, Frankfurt am Main. 9 Lesch, O.M. (1988) Chronischer Alkoholismus, Typen und ihr Verlauf-eine Langzeitstudie,
Stuttgart, Georg Thieme Verlag.
10 Patzclt, D., Nagai, T., Schroder, II., Hennann, II.J. (1983) Z. Rechtsmed., 90, 45-52. 11 Pflug, W. (1987) Electrophoresis, 7, 273 -278.
12 Pflug, W., Laczko, B. (1987) Electrophoresis, 8,247-248.
13 Rand, S., Ritter, P., Kohfahl, A., Brinkmann, B. (1987) Z. Rechtsmed., 98. 175-180. 14 Scheibe, E., Streubel, U. (1987) Krim. Forens. Wiss., 65/66, 100-102.
15 Scheil, II. G., Dricsel, A. J., Rohrbom, G. (1980) Z. Rechtsmed., 84,95. 16 Sebatan, LM., Sagisaka, K. (1988) Forensic Sci. Int., 37, 33-36. 17 Thomas, A.S., Ansford, A.I. (1989) 1. Forensic Sci. Soc., 29, 197-205.
Korrcspondcnz:
Dr. med. Wolfgang Huckenbcck Institut fur Rechtsmedizin, Moorenstraee 5, 4000 Dusseldorf, Deutschland
