Pro-apoptotik ve Anti-apoptotik Genlerin Ekspresyonu

SBV’nin Vero hücrelerinde apoptozisi indüklediği DNA fragmentasyonu, fosfatidilserin eksternalizasyonu ve kaspaz aktivasyonu ile belirlendikten sonra, hücrelerde enfeksiyonu takip eden süreçte pro-apoptotik ve anti-apoptotik genlerdeki

ekspresyon değişimleri analiz edildi. Hücrelerde pro-apoptotik genlerden Bak, Bax, ve Puma genleri, anti-apoptotik genlerden ise Bcl-2 ve Bcl-XL genleri incelendi.

Ekspresyon analizi için normalizasyonda GAPDH geni referans gen olarak seçildi.

SBV 0,1 MOI ile enfekte olan hücrelerde Bak geninin ekspresyon seviyelerinin enfeksiyon saatleri arasında istatistiksel olarak farklılık gösterdiği belirlendi. Enfeksiyondan 2 ve 6 saat sonraki örneklerin 48. ve 72. saat örnekleriyle, 12. saatin 18., 24. ve 72. saat örnekleriyle, 18. ve 24. saatin 12., 48. ve 72. saat örnekleriyle aralarında istatistiksel olarak anlamlılık belirlendi. SBV enfekte 36. saat örneği 48. ve 72. saat örnekleriyle, 48. saat örneği 2, 6, 18, 24, 36 ve 72 saat örnekleriyle, 72. saatin ise tüm örneklerle istatistiksel olarak anlamlı farklılık olduğu saptandı (p<0,05). SBV 0,01 MOI ile enfekte olan hücrelerde Bak geninin ekspresyon seviyelerinin 2., 18., 24. ve 36. saatlerde 12., 48. ve 72. saat örnekleriyle, 6. saatin yalnızca 72. saatle, 12. ve 48. saatlerde 2., 18., 24., 36. ve 72. saat örnekleriyle aralarında anlamlı farklılık belirlenirken 72. saat örneği tüm örneklerle anlamlı farklılık gösterdi (p<0,05). SBV’nin 0,1 ve 0,01 MOI ile arasında Bak geninin ekspresyonunun değişmesi bakımından yalnızca 36. saat örneğinde anlamlı farklılık belirlenmedi (Şekil 3.15).

Bak geninde, 48. saatte 0,1 MOI’de 0,93 kat, 0,01 MOI’de 1,41 kat ekspresyon değişimi oluştuğu belirlendi. Enfeksiyonun 72. saatinde ise Bak geni ekspresyonunda 0,1 MOI’de 3,54 kat, 0,01 MOI’de 4,87 kat artış gözlendi (Şekil 3.15).

Şekil 3.15. SBV ile enfekte Vero hücrelerinde saatlere göre Bak geni ekspresyonundaki değişimler. NK: Negatif kontrol hücre grubu. * istatistiksel anlamlı farklılık (p<0,05)

SBV ile 0,1 MOI ile enfekte olan hücrelerde Bax geninin ekspresyon seviyeleri yalnızca 72. saat örneğinin diğer örneklerle arasında anlamlı farklılık belirlendi (p<0,05). SBV ile 0,01 MOI ile enfekte olan hücrelerde ise Bax geninin ekspresyon seviyelerinin 2., 12., 18. ve 36. saatlerde 48. ve 72. saat örnekleriyle, 6.

saatin 24.,48. ve 72. saat örnekleriyle, 24. saatin 6., 48. ve 72. saat örnekleriyle aralarında anlamlı farklılık belirlenirken 48. ve 72. saat örneklerinin tüm örneklerle anlamlı farklılık gösterdiği saptandı (p<0,05). SBV’nin 0,1 ve 0,01 MOI titreleri arasında Bax geninin ekspresyonunun değişmesi bakımından tüm saatlerde anlamlı farklılık belirlendi (Şekil 3.16).

SBV 0,1 MOI ile enfekte hücrelerde Bax geni ekspresyonunda 24. saatte 2,39 kat artış gözlenirken, 36. saatte azalma (0,68 kat değişim) belirlendi. Enfeksiyonun 48. saatinde ise 1,48 kat değişim ile tekrar artış gösterdiği saptandı. En yüksek Bax geni ekspresyonu değişimi ise enfeksiyonun 72. saatinde 14,18 kat artış olarak belirlendi. SBV 0,01 MOI ile enfekte hücrelerde Bax geni ekspresyonunun 24. saat

haricindeki tüm enfeksiyon saatlerinde artış gösterdiği belirlendi. En yüksek kat artışı ise 4,87 kat değişimi ile 72. saatte belirlendi (Şekil 3.16).

Şekil 3.16. SBV ile enfekte Vero hücrelerinde saatlere göre Bax geni ekspresyonundaki değişimler. NK: Negatif kontrol hücre grubu. * istatistiksel anlamlı farklılık (p<0,05)

SBV ile 0,1 MOI ile enfekte olan hücrelerde Bcl-2 geninin ekspresyon seviyeleri, enfeksiyondan 2 ve 12 saat sonraki örneklerin 6., 18., 24., 36.,48. ve 72.

saat örnekleriyle, 6., 18., 24., 36. ve 48. saat örneklerinin 2., 12. ve 72. saat örnekleriyle, 72. saatin ise tüm örneklerle istatistiksel olarak anlamlı farklılık gösterdiği saptandı (p<0,05). SBV ile 0,01 MOI ile enfekte olan hücrelerde Bcl-2 geninin ekspresyon seviyelerinin 2., 36. ve 48. saatlerin 12., 18. ve 72. saat örnekleriyle, 6. ve 24. saatin 12. ve 72. saatle, 12. saatin 2., 6., 24., 36., 48. ve 72.

saatlerle, 18.saat örneğinin 2., 36., 48. ve 72. saatlerle aralarında anlamlı farklılık belirlenirken 72. saat örneği tüm örneklerle anlamlı farklılık gösterdi (p<0,05).

SBV’nin 0,1 ve 0,01 MOI titreleri arasında Bcl-2 geninin ekspresyonunun değişmesi

bakımından yalnızca 36. ve 72. saat örneklerinde anlamlı farklılık belirlenmedi (Şekil 3.17).

SBV 0,1 MOI ile enfekte hücrelerde Bcl-2 geni ekspresyonunda sadece 72.

saatte 2,96 kat artışı gözlenirken, diğer enfeksiyon saatlerinde ise genin azaldığı belirlendi. SBV 0,01 MOI ile enfekte hücrelerde ise 12. saatte 1,03 kat değişimi ile kontrol hücre grubu seviyesine yükselirken, 72. saatte Bcl-2 geninde 2,85 kat artış belirlendi. Diğer enfeksiyon saatlerinde ise azalma olduğu saptandı (Şekil 3.17).

Şekil 3.17. SBV ile enfekte Vero hücrelerinde saatlere göre Bcl-2 geni ekspresyonundaki değişimler. NK: Negatif kontrol hücre grubu. * istatistiksel anlamlı farklılık (p<0,05)

SBV ile 0,1 MOI ile enfekte olan hücrelerde Bcl-XL geninin ekspresyon seviyeleri 2. saatte 18., 24., 48. ve 72. saatlerle, 6. ve 36. saatlerde 18., 48. ve 72. saat örnekleriyle, 12. saatte 48. ve 72. saatlerle, 18. saatte 2., 6., 36., 48. ve 72. saat örnekleriyle, 24. saatte 2., 48. ve 72. saat örnekleriyle, 48. ve 72. saatlerin ise tüm örneklerle istatistiksel olarak anlamlı farklılık gösterdiği saptandı (p<0,05). SBV ile 0,01 MOI ile enfekte olan hücrelerde Bcl-XL geninin ekspresyon seviyelerinin 2., 6.,

18., 24., ve 36. saatlerde 12., 48. ve 72. saat örnekleriyle, 12. ve 48. saatin 2., 6., 18., 24., 36. ve 72. saatle, 72. saat örneğinin ise tüm örneklerle arasında anlamlı farklılık gösterdiği belirlendi (p<0,05). SBV’nin 0,1 ve 0,01 MOI titreleri arasında Bcl-XL geninin ekspresyonunun değişmesi bakımından yalnızca 48. saat örneğinde anlamlı farklılık belirlenmedi (Şekil 3.18).

SBV 0,1 MOI ile enfekte hücrelerde Bcl-XL geni ekspresyonunda 48. saatte 1,30 kat; 72. saatte 3,96 kat artışı belirlendi. Diğer enfeksiyon saatlerinde ise Bcl-XL geninde azalma olduğu saptandı. SBV 0,01 MOI ile enfekte hücrelerde 12. saatte 1,65 kat; 48. saatte 1,36 kat ve 72. saatte 2,51 kat artışı belirlenirken diğer enfeksiyon saatlerinde Bcl-XL geninde azalma belirlendi (Şekil 3.18).

Şekil 3.18. SBV ile enfekte Vero hücrelerinde saatlere göre Bcl-XL geni ekspresyonundaki değişimler. NK: Negatif kontrol hücre grubu. * istatistiksel anlamlı farklılık (p<0,05)

SBV ile 0,1 MOI ile enfekte olan hücrelerde Puma geninin ekspresyon seviyelerinin yalnızca 48. ve 72. saatte alınan örneklerin diğer örneklerle arasında

anlamlı farklılık gösterdiği belirlendi (p<0,05). SBV ile 0,01 MOI titrede enfekte olan hücrelerde ise Puma geninin ekspresyon seviyeleri arasında sadece 72. saatte tüm örneklerle anlamlı farklılık gösterdiği saptandı (p<0,05). SBV’nin 0,1 ve 0,01 MOI titreleri arasında Puma geninin ekspresyonunun değişmesi bakımından yalnızca 2. saatte anlamlı faklılık belirlenmedi (Şekil 3.19).

Puma geni, SBV 0,1 MOI ile enfekte hücrelerde enfeksiyon saati ilerledikçe artış göstererek 48. saatte 11,98 kat; 72. saatte 23,80 kat artış belirlendi. SBV 0,01 MOI ile enfekte hücrelerde Puma geni ekspresyonu 12., 18., 36. ve 72. saatlerde artış gösterirken diğer saatlerde azaldığı belirlendi. Enfeksiyonun 36. saatinde 10,91 kat;

72. saatinde ise 71,97 kat artış saptandı (Şekil 3.19).

Şekil 3.19. SBV ile enfekte Vero hücrelerinde saatlere göre Puma geni ekspresyonundaki değişimler. NK: Negatif kontrol hücre grubu. * istatistiksel anlamlı farklılık (p<0,05)