Literatürde satışçı performansına ilişkin çalışmalar

Para o desenvolvimento desta pesquisa, foram recrutados ciquenta e quatro (54) adolescentes (de ambos os gêneros) obesos do programa de intervenção interdisciplinar do GEO/CEPE UNIFESP, iniciado em 2004, conforme exemplificado abaixo na Figura 7.

Trinta e nove (39) adolescentes completaram até o final à Intervenção Interdisciplinar. Para o presente estudo, foram selecionados dezoito (18) adolescentes, os quais exibiram perda de massa gorda maior que 5%.

Critérios de inclusão

Adolescentes com idade entre 13 a 19 anos, pós-púberes, com o IMC acima do Percentil 95 proposto pelas curvas do “Centers for Disease Control and Prevention” (CDC) (2000), estágio puberal V segundo os critérios de Tanner (Tanner et al, 1976), além da assinatura do termo de consentimento pelos familiares dos participantes do estudo.

Critérios de não inclusão

Como critérios de não inclusão foram selecionados os seguintes itens: limitações músculo- esqueléticas que impeçam a intervenção, doença genética, hormonal ou metabólica, uso crônico de álcool, usuário de drogas e outras causas de esteatose como hepatite viral B e C, hepatite auto-imune e doenças metabólicas como hemocromatose.

Este estudo foi realizado de acordo com os princípios da declaração de Helsinki e foi previamente aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade Federal de São Paulo - Escola Paulista de Medicina sob o número (#0135/04). Os voluntários foram incluídos no estudo após consentimento assinado.

Descrição da Intervenção Interdisciplinar para o tratamento da obesidade

Após os exames diagnósticos, os adolescentes obesos foram submetidos à Intervenção Interdisciplinar para o tratamento da obesidade, de acordo com o modelo preconizado pelo Grupo de Estudo da Obesidade (GEO), desenvolvido no Centro de Estudos em Psicobiologia e Exercício (CEPE), do Departamento de Psicobiologia da UNIFESP/EPM e Programa de Pós Graduação em Nutrição.

O Protocolo baseia-se em intervenção Interdisciplinar em longo prazo (1 ano), incluindo a triagem, os exames e o desenvolvimento da pesquisa. Para isto, todos os voluntários tiveram acompanhamento nutricional e psicológico semanais; clínico (consultas mensais com o endocrinologista); treinamento físico combinado (exercício aeróbio e treinamento de força).

Protocolo de Exercício

Durante 48 semanas de intervenção Interdisciplinar os adolescentes obesos foram submetidos ao programa de exercícios combinados três vezes por semana, consistindo em 30 minutos de exercícios aeróbios por sessão de treinamento (bicicleta ergométrica e esteira ergométrica) e treinamento de força adotando os seguintes exercícios: elevação lateral, supino sentado, puxador costas, remada baixa, abdominais, hiperextensão lombar, leg press, flexão de joelhos, flexão de panturrilha e rosca direta. Todos os sujeitos foram familiarizados com o protocolo de treinamento, durante 2 semanas, antes de iniciarem o programa. Os exercícios aeróbios foram realizados na intensidade do esforço referente ao limiar ventilatório 1, determinado por análise direta de gases. O treinamento de força foi orientado seguindo os princípios para controle da carga e do volume do treinamento propostos por Kraemer et al (2006). A periodização do treinamento de força utilizou o modelo não linear (ondulatório) proposto por Kraemer et al (1997), desta forma, o protocolo consistiu na alteração semanal da carga, dividido em semana de cargas altas (5 a 7-repetições máximas, RM) e semana de cargas moderadas (10 a 12- RM). Os sujeitos realizaram 18 séries por sessão, distribuídas em 3 séries para cada exercício. O intervalo entre as séries dependeu da carga adotada na sessão de treinamento, tendo intervalos de 2 minutos para as semanas com cargas altas e intervalos de 1 minuto para as semanas com cargas moderadas. Os voluntários realizaram o protocolo de treinamento de força após os 30 minutos de exercício aeróbio.

Avaliação e Intervenção Nutricional

Uma vez por semana os adolescentes receberam aulas de educação nutricional em pequenos grupos, abrangendo temas como pirâmide alimentar, dietas da moda, rotulagem nutricional, diferentes tipos de gordura, alimentação de fast food, aprendendo a montar um lanche saudável entre outros. Ressalta-se que também foram oferecidas consultas nutricionais individuais.

A avaliação alimentar foi realizada no início, e ao término da intervenção por meio do registro alimentar de três dias não consecutivos, incluindo dois dias da semana e um do final de semana. A nutricionista orientou os pais e voluntários sobre o preenchimento do registro alimentar de três dias.

As porções foram relatadas em termos de medida caseira por referência de um Atlas de porções alimentares. Os dados alimentares obtidos foram analisados por meio do software Nutwin (UNIFESP, 2002).

Avaliação e Intervenção Psicológica

Para o atendimento psicológico os adolescentes foram divididos em pequenos grupos. A intervenção psicológica consistiu em dinâmicas, aulas e sessões terapêuticas uma vez por semana, compreendendo temas como auto-estima, imagem corporal, depressão, ansiedade, transtornos alimentares, questões familiares, entre outros. Ressalta-se que a intervenção psicológica também consiste em consultas individuais, conforme a anuência do paciente.

Análises sanguíneas Parâmetros Bioquímicos:

As análises sanguíneas foram realizadas através de punção periférica da veia do antebraço, após jejum noturno de 12 horas.

Para dosagem das adipocinas (Adiponectina, IL-6, IL-10 e TNF-α; R&D System, Inc., Minneapolis, USA), endotoxina (LONZA Cologne GmbH, Suiça) e insulina (Millipore, 290 Concord Road, Billerica, MA 01821) foi utilizado o método enzyme-linked immunoabsorbent assay (ELISA) de captura. Este ensaio foi realizado em amostras de soro, proveniente da situação basal e após 1 ano de terapia interdisciplinar. Placas com 96 poços foram sensibilizadas com 100 µL de anticorpo monoclonal anti-humano (Adiponectina, IL-6, IL-10, TNF-α, insulina e endotoxina) (anticorpo de captura) e incubadas por 2h em temperatura ambiente. Após este período, os poços foram lavados por 3 vezes com tampão para lavagem (0,05% Tween 20 em PBS, pH 7,2 – 7,4). Posteriormente, a placa foi bloqueada para evitar ligações inespecíficas com 300 µL de solução de bloqueio (1% BSA em PBS, pH 7,2 – 7,4, 0,2 µm filtrado) e incubada por 1 hora em temperatura ambiente. Findo este prazo, os poços foram lavados novamente como descritos acima.

Após o bloqueio, foram adicionados 100 µL por poço das amostras e dos padrões diluídos previamente em reagente de diluição (1% BSA em PBS, pH 7,2 – 7,4, 0,2 µm filtrado), e cobertos com fita adesiva . Em dois poços foram colocados somente o reagente de diluição para caracterização do branco. A placa foi incubada por 2 horas em temperatura ambiente. Após este período, os poços foram lavados por 3 vezes com tampão de lavagem (0,05% Tween 20 em PBS, pH 7,2 – 7,4).

Após as lavagens, adicionou 100 µL do anticorpo de detecção (Anticorpo anti-Humano Adiponectina, IL-6, IL-10, TNF-α, insulina e endotoxina Biotinilado) diluídos previamente em reagente de diluição (1% BSA em PBS, pH 7,2 – 7,4, 0,2 µm filtrado) na concentração estabelecida, cobertos com fita adesiva e incubado por 2 horas em temperatura ambiente. Os poços foram novamente lavados como descrito acima. Posteriormente, adicionou-se 100 µL de Streptoavidina-HRP (1:250) por poço, que foram cobertos com papel laminado e incubados por 30 minutos, à temperatura ambiente. Findo este prazo, os poços foram novamente lavados como descrito acima. Posteriormente, a solução de substrato (mistura dos reagentes de cores A - H2O2 e B - Tetrametilbenzidina) foi adicionada na diluição de 1:1 por poço, seguido de incubação por 30 minutos à temperatura ambiente, evitando-se contato direto da placa com a luz. A reação foi interrompida com 50 µL de H2SO4 30% por poço sob agitação lenta. A leitura foi feita em leitor de ELISA (Power Wave, Bio-tek), utilizando- se filtro de 450 nm.

Para dosagem da glicemia de jejum, foi utilizado Kit Glicose PAP Liquiform (Labtest Diagnostica S.A), por método colorimétrico, sendo a mistura da amostra com reagente incubado por 15 minutos em temperatura a 37°C. O princípio da reação foi: A glicose oxidase (GOD) catalisa a oxidação da glicose de acordo com a seguinte reação:

Glicose + O2 + H2O GOD Ácido Glucônico + H2O2

O peróxido de hidrogênio formado reage com 4-aminoantipirina e fenol, sob ação catalisadora da peroxidase, através de uma reação oxidativa de acoplamento formando uma antipirilquininimina vermelha cuja intensidade de cor é proporcional à concentração de glicose da amostra. A leitura foi feita em leitor de ELISA (Power Wave, Bio-tek), utilizando-se filtro de 520 nm.

Análise estatística do modelo clínico

A distribuição dos dados foi checada pelo teste de variança de Bartlett, e os dados expressos em média ± desvio padrão. Os valores outliers estatísticos foram identificados utilizando um teste de Grubbs (GraphPad Software, San Diego, CA) e subseqüente removidos. Todos os dados que permaneceram foram analisados pelo programa GraphPad Prism (version 5.00). As diferenças entre as situações para todos os parametros foram analisadas pelo teste “t de student”. O teste de Pearson foi aplicado para verificar possiveis correlações entre as variaveis. O nível de significância fixado foi de p<0,05.