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As curvas de sobrevida global foram feitas através do método de Kaplan-Meier. Com o objetivo de procurar por correlações entre a presença do polimorfismo e sobrevida global foram realizadas categorizando os pacientes como selvagens ou polimórficos (heterozigostos e homozigotos).

Observou-se que os pacientes selvagens para o polimorfismo Val12Met tiveram tendência a uma pior sobrevida (sobrevida mediana de 14,1 meses) em relação aos pacientes polimórficos (sobrevida mediana não atingida; =0,089 – Teste de Log-rank, Figura 14).

Meses 50.0 40.0 30.0 20.0 10.0 0.0 S o b re v id a G lo b a l A c u m u la d a 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 V / M ou M / M Censurado V / V Censurado V / M ou M / M V / V ABCG2 Sobrevida Global N = 5 N = 60 P = 0,089; Log Rank

Figura 14: Curvas de sobrevida de Kaplan-Meier em pacientes com carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço classificados de acordo com a presença do polimorfismo Val12Met.

Já os pacientes selvagens para o polimorfismo Gly141Lys tiveram tendência a uma pior sobrevida (sobrevida mediana de 15,8 meses) em relação aos pacientes polimórficos (sobrevida mediana de 25,6 meses; = 0,16 – Teste de Log-rank); enquanto não houve correlação entre a presença do polimorfismo Val417Ile e sobrevida, conforme mostram as figuras 15 e 16. Meses 50.0 40.0 30.0 20.0 10.0 0.0 S o b re v id a G lo b a l A c u m u la d a 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 _{G / L ou L / L Censurado} G / G Censurado G / L ou L / L G / G ABCG2 Sobrevida Global N = 11 N = 53 P = 0,16; Log Rank

Figura 15: Curvas de sobrevida de Kaplan-Meier em pacientes com carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço classificados de acordo com a presença do polimorfismo Gly141Lys.

Meses 50.0 40.0 30.0 20.0 10.0 0.0 S o b re v id a G lo b a l A c u m u la d a 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 V / I ou I / I Censurado V / V Censurado V / I ou I / I V / V ABCC2 Sobrevida Global N = 26 N = 39 P = 0,635 ; Log Rank

Figura 16: Curvas de sobrevida de Kaplan-Meier em pacientes com carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço classificados de acordo com a presença do polimorfismo Val417Ile.

De acordo com o nosso estudo não encontramos correlação entre os polimorfismos Gly141Lys, Val12Met e Gly126stop do gene ABCG2 e Val417Ile, Ser789Phe e Ala1450Thr do gene ABCC2 e resposta à quimioterapia com cisplatina.

Todas as frequências gênicas encontradas neste estudo estavam em equilíbrio de Hardy – Weinberg, porém chamou a atenção o fato das freqüências do Val12Met e Gly141Lys (10% e 16%, respectivamente) estarem bem abaixo das descritas na literatura em indivíduos normais japoneses (35% e 50%) e mais próxima a de pacientes de câncer de pulmão caucasianos (8% e 28%) (Kobayashi ., 2005; Muller ., 2009).

Para o gene ABCG2 encontramos somente um paciente com o polimorfismo Gly126stop, frequência que está de acordo com a literatura em indivíduos normais sem câncer da população japonesa (Kobayashi ., 2005; Hirouichi ., 2004). Apesar de ser pouco freqüente (aproximadamente 1%), achamos que polimorfismo Gly126stop merece um estudo numa população maior, uma vez que este alelo produz um códon de parada, gerando uma proteína truncada podendo diminuir a quantidade da proteína na célula, resultando em hipersensibilidade de células normais para agentes anti-câncer (Sugimoto ., 2005). Acreditamos ser importante o estudo deste polimorfismo, apesar da baixa frequência, visto o impacto que esta alteração pode ter na proteína, além de não haver nenhum relato na literatura sobre essa freqüência na população brasileira e poucos trabalhos da população em geral, sendo a maioria deles de origem japonesa.

Quanto ao polimorfismo Val12Met do gene ABCG2, acreditamos que a significância estatística não foi atingida, talvez, devido ao pouco número de polimórficos (n=7) em relação aos pacientes selvagens (n=61), pois 6 dos 7 (85,7%) pacientes Val12Met responderam ao tratamento enquanto no grupo selvagem apenas 35 dos 61 (57,3%) pacientes responderam ao tratamento (p=0,23). Quanto à curva de sobrevida, nenhum dos pacientes polimórficos desta análise morreu, enquanto o grupo selvagem teve sobrevida mediana de 18,7 meses (p=0,084, log rank). Mizuarai e colaboradores (2007) mostraram que a presença desta alteração resultou em aumento do acúmulo de droga & e perda de resistência celular para um grande número de drogas, entre eles o topotecam, doxorrubicina, mitoxantrone e vincristina. Eles também mostraram a perda da localização na membrana em células LLC-PK1 transfectadas com cDNA carregando esta mutação. Por outro lado, não foi encontrada relação entre a presença do Val12Met e resistência às drogas SN38, SN35 e SN 398 (análogos de camptotecina) em linhagens de células Flp-In transfectadas com este polimorfismo (Tamura ., 2007).

Em relação ao polimorfismo Gly141Lys, encontramos uma tendência de menor sobrevida dos pacientes com genótipo selvagens (sobrevida mediana de 15,8 meses) comparado aos pacientes que possuem este polimorfismo (sobrevida mediana não atingida, p = 0,13, Log Rank); dados estes que vão de acordo com Muller e colaboradores de 2009, que também não conseguiu correlacionar a presença do polimorfismo com resposta ao tratamento, mas observou menor sobrevida dos pacientes selvagens em

relação aos polimórficos em pacientes com câncer de pulmão de pequenas e não – pequenas células com tratamento a base de platina.

O fato dos pacientes que possuíam polimorfismos que provocam déficit de função no ABCG2 não apresentarem melhor resposta ao tratamento, mas terem maior sobrevida que os pacientes com a variante normal deste gene, em nosso estudo, indica que o gene pode estar envolvido em outros processos da célula tumoral além do efluxo de drogas. Este gene é muito expresso em uma grande variedade de células – tronco, podendo ter importância na manutenção de indiferenciação de células progenitoras, por expelir da célula o fator de indução de diferenciação DIF-1 (Zhou ., 2001). Além disso, a sua alta atividade está diretamente relacionada à sobrevivência celular em situação de hipóxia devido a sua capacidade de exportar da célula agentes tóxicos, entre eles a heme – porfirina, que em grande quantidade gera radicais livres danosos ao DNA (Krishnamurthy ., 2004 e Susanto ., 2008).

Um trabalho recente mostrou em linhagens celulares DU145 e A549 que a inibição do ABCG2 por RNA de interferência e inibidores químicos levava a inibição da proliferação celular. O mecanismo proposto foi o de que a supressão deste gene leva a parada celular na fase G0/G1, associado com uma diminuição da expressão de ciclina D3, aumento da expressão de p21 e aumento de número de células que entram em apoptose (Chen ., 2009).

Com base nestes dados da literatura, podemos especular que este gene não está associado apenas à resistência a drogas, mas também a

processos celulares importantes para a sobrevivência das células tumorais,

sendo necessários mais estudos funcionais para elucidar estes processos. Para o gene ABCC2, não encontramos pacientes com os

polimorfismos Ser789Phe e Ala1470Ala já o Val417Ile foi mais frequente neste grupo (38%) em relação às populações, sem câncer, de origem japonesa (10,9%) e judia (22,7%) (Wada ., 2006).

Não encontramos relação com resposta ao tratamento e nem com sobrevida para o SNP Val417Ile. Resultados similares aos de Hirouchi . (2004), que não encontrou efeito funcional deste polimorfismo na proteína, e de Sun . (2009) que não encontrou correlação entre a presença desta alteração e resposta à quimioterapia a base de platina em pacientes com câncer de pulmão de células não – pequenas. Fujita . (2008) mostrou que em pacientes com câncer colorretal metastático tratados com irinotecam tiveram uma menor curva tempo – concentração quando possuíam o alelo alterado, tendo maior resistência a esta droga. Não há um consenso na literatura quanto ao papel deste polimorfismo no resultado final da ação protéica e na resistência aos fármacos; o fato dele se localizar na porção transmembrânica da proteína, região mais associada à especificidade do substrato do que com a atividade transportadora, não fornece qualquer informação de como esta alteração possa modular a eficiência da proteína, indicando que ele provavelmente não exerça influência na resistência de drogas.

Resumindo, nosso trabalho foi o primeiro a correlacionar estes polimorfismos em genes codificadores de transportadores de cisplatina com

resposta ao tratamento em pacientes com carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço. Embora não tenhamos encontrado nenhuma correlação significativa, achamos que dos polimorfismos estudados, Val12Met e Gly141Lys e o gene ABCG2 merecem ser melhor estudados.

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