DERS PLANLARI

2.2.3.1 – As amostras

Classificação dos méis comerciais do estado de São Paulo por RMN de 1_{H – Neste estudo foram analisados 39 méis, sendo 13 de eucalipto (Euc1 a Euc13);} 12 de laranjeira (Lar1 a Lar12) e 14 silvestres (Silv1 a Silv14), adquiridos comercialmente e de alguns apicultores do estado de São Paulo, conforme está descrito na tabela 2.2-1 (página 31).

Discriminação dos méis de assa-peixe, cana-de-açúcar e adulterados

com relação aos méis autênticos do estado de São Paulo – Neste estudo foram

analisados dois méis de assa-peixe (AP1 e AP2); um produzido pela alimentação da colméia com sacarose (Açu1) e dois coletados em plantações de cana-de-açúcar (Açu2 e Açu3) conforme está descrito na tabela 2.2-1 (página 31). Estes méis não são produzidos com muita frequência, e conseqüentemente, um número pequeno de amostras foi adquirido. Por isso, não foram incluídos no estudo de classificação, mas foram comparados aos méis autênticos utilizando-se a análise por componentes principais (PCA). Além disto, foram analisados dois méis adquiridos no mesmo local, mas vendidos como tipos diferentes, eucalipto (Euc14) e laranjeira (Lar13), mas que mostraram-se muito semelhantes na análise dos mesmos pela técnica SNIF-NMR.

Estudo da influência da regionalidade sobre os méis por RMN de 1H –

Foram analisados 14 méis da região Sul (Euc16, Lar15, Silv15 a Silv24, Jatai3 e Glu1); 12 do Centro-Oeste (Silv25 a Silv34, Jatai1 e Jatai2); seis do Nordeste (Silv35 a Silv40); dez do Norte (Silv41 a Silv50) e 33 do Sudeste (Euc1 a Euc7 e Euc14, Lar1 a Lar13, Silv1 a Silv12), totalizando-se 75 amostras, que estão descritas na tabela 2.2-1 (página 31).

Discriminação dos méis por RMN de 13C – Foram analisados quatro

36

dez silvestres (Silv1 a Silv8, Sil15 e Silv16), em um total de 20 amostras, cuja descrição está mostrada na tabela 2.2-1 (página 31).

2.2.3.2 – Medidas espectroscópicas

As amostras foram preparadas em triplicata, diluindo-se 150 mg de mel em 450 µL de D2O. Em seguida, adicionou-se uma gota de uma solução do sal trimetilsilil-2,2,3,3-d4-propionato de sódio (TMSP) em D2O (0,16%), cujo deslocamento químico é δ 0,0, para ser utilizado como referência interna dos sinais de ressonância nos espectros.

A seqüência de pulsos utilizada na aquisição dos espectros de RMN de 1_{H foi a zgcppr (nomenclatura Bruker), com a qual se faz a supressão do sinal dos} hidrogênios da água. Em seguida, os espectros foram processados aplicando-se uma transformada de Fourier utilizando-se 32768 pontos e um LB de 0,3 Hz.

Os espectros de RMN de 13C foram adquiridos utilizando-se a seqüência de pulsos zgpg30 (nomenclatura Bruker), com a qual se faz a aquisição dos sinais dos núcleos de carbono-13 com o desacoplamento dos núcleos de hidrogênio e com NOE, usando pulsos de 30 graus. O processamento foi feito aplicando-se um LB de 1,0 Hz, e transformadas de Fourier utilizando-se 32768 e 65536 pontos, respectivamente, para verificar qual dos dois processamentos forneceria a melhor discriminação dos tipos de méis.

Os parâmetros utilizados na aquisição dos espectros de RMN de 1_{H e} 13_{C estão apresentados na tabela 2.2-3.}

TABELA 2.2-3. Parâmetros de aquisição dos espectros de RMN de 1H e 13C (Bruker)

RMN de 1_{H RMN de} 13_C

Tempo de aquisição (AQ) 7,0 s 1,4 s

Tempo de espera antes de cada aquisição (D1) 1,5 s 100,0 ms

Número de aquisições (NS) 64 11264

Largura de pulso de 90º (P1) 8,5 µs 6,0 µs

Atenuação da potência para supressão da água (PL9) 60 dB ---

Ganho do receptor (RG) 32 16384

Janela espectral (SW) 4664 Hz 27027 Hz

37

Em todos os espectros, a fase e a linha de base foram ajustadas de forma mais uniforme possível, tanto dentro de cada um quanto entre eles. Os espectros resultantes foram salvos como arquivos no formato ASCII para se fazer, em seguida, a análise quimiométrica dos dados.

2.2.3.3 – Tratamento quimiométrico

Todas as matrizes de dados foram construídas usando-se o programa Origin versão 5.0, e o tratamento quimiométrico foi realizado utilizando-se o programa Pirouette versões 3.11 e 4.0 (InfoMetrix, Woodinville, Washington, USA).

Os parâmetros e a seleção de variáveis em todos os estudos foram otimizados a partir das análises exploratórias dos dados por PCA e, em seguida, foram utilizados nas análises por HCA e nos métodos de classificação. As transformações usadas foram a divisão pela norma um e a primeira derivada, enquanto que o pré-processamento foi o autoescalamento. A distância métrica utilizada no HCA foi a Euclidiana e a conexão incremental. No KNN também foi usada a distância Euclidiana.

Classificação dos méis comerciais do estado de São Paulo por RMN de 1_{H – A matriz de dados analisada foi composta por 4644 variáveis (dispostas nas} colunas) e 117 espectros (dispostos nas linhas – 39 amostras analisadas em triplicata, que estão indicadas pelas letras a, b e c nos gráficos de scores e dendrogramas). A este conjunto de dados foram acrescentados os espectros médios das triplicatas (indicados pela letra M) dos méis de eucalipto, laranjeira e silvestres, somando-se mais 39 espectros.

Na aplicação dos métodos de classificação, as amostras foram divididas em três conjuntos, ou seja, aquelas utilizadas na construção dos modelos (amostras de treinamento), na validação externa dos mesmos (amostras com características conhecidas pelo analista, mas desconhecidas pelos modelos, sendo chamadas de amostras teste), e na previsão das classes (amostras comerciais).

Na construção dos modelos foram utilizadas cinco amostras autênticas de cada tipo de mel. Já na validação externa foram usadas duas amostras de cada tipo. Para a previsão das classes das amostras comerciais foram analisados seis méis comerciais de eucalipto, cinco de laranjeira e sete silvestres, conforme está mostrado na tabela 2.2-4 (página 38).

38

TABELA 2.2-4. Classe e número de amostras usadas na construção e na validação

externa dos modelos de classificação e na previsão das classes dos méis comerciais do estado de São Paulo

Classe Construção Validação externa Previsão

Silvestre 1 5 2 7

Eucalipto 2 5 2 6

Laranjeira 3 5 2 5

Discriminação dos méis de assa-peixe, cana-de-açúcar e adulterados

com relação aos méis autênticos do estado de São Paulo – A matriz de dados

analisada foi composta por 4644 variáveis (dispostas nas colunas) e 66 espectros (dispostos nas linhas – 22 amostras analisadas em triplicata).

Estudo da influência da regionalidade sobre os méis por RMN de 1H –

A matriz de dados foi composta por 4636 variáveis (dispostas nas colunas) e 225 espectros (dispostos nas linhas – 75 amostras feitas em triplicata).

Discriminação dos méis por RMN de 13C – As matrizes de dados foram

compostas por 20 espectros (dispostos nas linhas) e 4589 e 9093 variáveis (dispostas nas colunas), quando os espectros foram processados com 32768 e 65536 pontos, respectivamente.