Denetçi Olabilecekler

Muitos laboratórios vêm utilizando o modelo de defeito de tamanho crítico na calvária para testar a capacidade osteogênica de diferentes tipos de enxertos e biomateriais no reparo ósseo, sendo diversas as vantagens. Entre essas vantagens podemos citar o fácil acesso ao local da cirurgia (ACCORSI-MENDONÇA et al., 2011), a não interferência de outros fatores mecânicos ou mesmo da ação mecânica do tecido muscular (BOSCH; MELSEN; VARGERVIK, 1998), a fácil obtenção de imagens radiográficas (AALAMI et al., 2004), além da relevância na resposta fisiológica, pois o enxerto ocorre em sítio ortotópico (COOPER et al., 2010).

Diversos estudos foram realizados (KAWAI; URIST, 1989; MARSHAL; URIST, 2009; URIST; STRATES, 2009) com o objetivo de investigar se a resposta osteoindutora era semelhante na calvária e no subcutâneo. Foi verificado que a resposta inicial celular, bem como o tecido de reparo sintetizado eram diferentes. Na calvária ocorreu diferenciação de células mesenquimais diretamente em osteoblastos, enquanto que no subcutâneo as células mesenquimais se diferenciaram em condroblastos, dando inicio a ossificação endocondral (WANG; GLIMCHER, 1999b).

Os defeitos de tamanho crítico na calvária são muito grandes para serem regenerados. Segundo Schmitz e Hollinger (1986b), o defeito de tamanho crítico é definido como “a ferida intraósseoa de menor tamanho em um determinado osso e espécie de animal, que não cicatrizará espontaneamente durante o tempo de vida

do animal”. Sendo assim, foi estabelecido que o tamanho crítico para defeitos em calvária de ratos é de 8 mm (SCHMITZ et al., 1990) e para camundongos é de 5 mm (KREBSBACH et al., 1998).

Porém, Gosain et al. (2000) defende que o tempo de duração das pesquisas não se estende tanto quanto o tempo de vida do animal, concluindo que um defeito ósseo deveria ser considerado de tamanho crítico, quando este não for capaz de sofrer reparo ósseo durante o período máximo do experimento. Dessa forma, Cestari et al. (2009) mostrou que defeitos com 9 milímetros de diâmetro na calvária de cobaias tratados somente com coágulo não foram capazes de reparar com tecido ósseo espontaneamente em nenhum período estudado (0, 30, 90 e 180 dias), sendo observado somente formação óssea nas bordas do defeito, enquanto o centro foi preenchido por tecido fibroso. Corroborando com os resultados de Cestari et al. (2009), Accorsi-Mendonça et al. (2011), utilizando o mesmo modelo de defeito na calvária de ratos com coágulo, mostrou que não ocorreu reparo com tecido ósseo espontaneamente, nem mesmo até o período de nove meses (270 dias). Além disso, o trabalho de Conz, Granjeiro e Soares (2011) prova que defeitos de 8 milímetros em calvaria de ratos não são capazes de reparo ósseo espontâneo, mesmo após 6 meses (180 dias). Já o trabalho de Martins et al. (2010) mostrou que em defeitos de 8 milímetros de diâmetro em calvarias de ratos, o reparo ósseo só foi possível até o período de 6 meses (180 dias) devido a utilização de enxerto autógeno. Assim, de acordo com os trabalhos mencionados neste parágrafo, o defeito com 8 milímetros de diâmetro realizado na calvária dos ratos utilizados nesta dissertação, não teriam condições de reparar com tecido ósseo espontaneamente até os 42 dias somente com a presença de coágulo, constituindo, dessa forma, um bom modelo experimental para avaliar enxertos ósseos.

Outro fator relevante a ser discutido é a idade dos animais. Alguns trabalhos têm demonstrado que quanto mais jovem o animal, maiores as chances de reparo ósseo no defeito (PAIGE et al., 2006; KWAN et al., 2011). A principal razão seria o grande potencial osteogênico apresentado pelas células indiferenciadas da dura- mater nos animais jovens, que adquirem características de células “osteoblast-like”, expressando osteocalcina, colágeno, fosfatase alcalina, apresentando a capacidade de formar tecido ósseo mineralizado, enquanto que estas características destas

células indiferenciadas da dura-mater são perdidas em animais adultos (GREENWALD et al., 2000; GOSAIN et al., 2003; AALAMI et al., 2004).

Embora os animais utilizados nesta dissertação apresentassem 90 dias de idade (aproximadamente 3 meses) no dia da cirurgia, não poderiam ser considerados animais adultos. Sua estrutura óssea ainda não completou o desenvolvimento, ocorrendo, portanto, grande atividade osteogênica de osteoblastos oriundos de células indiferenciadas, que no caso deste trabalho, vieram dos tecidos adjacentes ao defeito, como periósteo da borda do defeito, o tecido conjuntivo, bem como a dura-mater. Porém, ainda assim, os animais do grupo controle tratados somente com coágulo não foram capazes de reparar o osso espontaneamente, sendo 46,2 % a densidade de volume do osso neoformado contra 53,80% de tecido conjuntivo aos 42 dias no grupo CTL COAG, evidenciando a formação de tecido fibroso ao centro do defeito. Isso mostra que o reparo ósseo não seria completo mesmo depois do período de 42 dias.

Outro ponto a ser debatido é o número de defeitos e a posição em que são realizados. Segundo Mardas, Kostopoulos e Karring (2002), a regeneração óssea em defeitos na calvária envolvendo áreas de sutura cranial em indivíduos em fase de crescimento é questionável. Assim, Bosch, Melsen e Vargervik (1998) defende que dois defeitos bilaterais na calvária, com 5 mm de diâmetro cada, possibilita um design pareado para o experimento, evitando a inclusão da sutura sagital no defeito ósseo, além de minimizar a morbidade e evitar danos ao sino médio-sagital.

Entretanto, Cestari et al. (2009); Accorsi-Mendonça et al. (2011); Patel et al. (2008); Oliveira et al. (2008) e Park et al. (2009) vêm utilizando outro modelo cirúrgico para realização do defeito crítico. Este outro modelo consiste em substituir os dois defeitos de 5 mm por apenas um de 8 mm de diâmetro, localizado na região sagital-média do crânio. A intenção é evitar a co-influência entre os defeitos, eliminando dessa forma mais um viés na pesquisa. Além disso, a realização de dois defeitos localizados muito próximos pode confluir em um único defeito com o dobro do tamanho esperado, alterando, ou até inviabilizando a pesquisa.

O tamanho e a posição do defeito na calvária certamente influenciam o reparo ósseo, porém, a presença da dura-máter e do periósteo da parietal são aspectos importantes que devem ser levado em consideração durante a realização de defeitos na calvária (COOPER et al., 2010). Estudos mostraram que tanto a dura-

máter quanto o periósteo influenciam o reparo ósseo fornecendo suprimento sanguíneo para a cortical óssea bem como células osteoprogenitoras (GOSAIN et al., 2003; WANG; GLIMCHER, 1999a).

Levando em consideração o que já foi exposto, optou-se neste estudo, pela utilização do modelo de um único defeito crítico de 8 mm por rato, que já vem sendo realizado em diversos trabalhos de nosso laboratório.