Köpeklerin merkezi sinir sisteminde aB-kristallin dağılımının immünohistokimyasal teknikle belirlenmesi

KÖPEKLERÝN MERKEZÝ SÝNÝR SÝSTEMÝNDE aB-KRÝSTALLÝN DAÐILIMININ ÝMMÜNOHÝSTOKÝMYASAL TEKNÝKLE BELÝRLENMESÝ

Immünohistochemical Determination of aB-Crystallin Distribution in the Dog Central Nervous System

Giriþ

Polipeptid protein yapýsýnda olan aB-kristallin (22 kDa), lensin ana bileþenlerinden a-kristallin iki alt ünitesinden (aA ve aB) birisidir (Quax-Jeuken ve ark., 1985; Iwaki ve ark., 1990). Isý stresi proteini (heat shock protein) olarak da sýnýflandýrýlan aB-kristallin lens dýþýndaki bazý dokularda da bulunur. Ýmmünoblot, Western ve Northern blot analizleri ile kalp, iskelet kasý, siyatik sinir, böbrek, dalak, plasenta, beyin ile akciðer dokusunda aB-kristallin varlýðý gösterilmiþtir (Dubin ve ark., 1989; Iwaki ve ark, 1990).

Sýçan beyninde yapýlan bir araþtýrmada; aB- kristallin'in, beyinde özellikle ak maddede daðýlým gösterdiði ortaya konulmuþtur. aB-Kristallin ekspresyonu oligodendrositlerde ve düþük düzeyde de astrositlerde gözlenmektedir (Iwaki ve ark., 1992).

Ancak, Alzheimer ve Creutzfeldt-Jakob gibi nörodejeneratif hastalýklara sahip insanlarda, sýnýrlýda olsa nöronal aB-kristallin ekspresyonu görüldüðü rapor edilmektedir (Iwaki ve ark, 1992). Reaktif astrositlerde de aB-kristallin up-regüle olmaktadýr (Dabir ve ark., 2004). Ayrýca insanlarýn Alexander hastalýðýnda astrositlerde biriken ve Rosenthal fibrilleri olarak adlandýrýlan inklüzyon cisimciklerinin ana bileþeninin de aB-kristallin olduðu gösterilmiþtir (Iwaki ve ark, 1993).

Moleküler þaperon aktivesi gösteren aB- kristallin'in, hücresel yaþam faaliyetlerinin sürdürülmesinde, özellikle de hücresel streste önemli düzenleyici rolü vardýr (Klemenz ve ark., 1991). aB- Kristallin, proteinlerin kümelenmesini ve hatalý katlanmalarýný önler (Hortwitz, 1992). Isý toleransýnýn

Özet: Polipeptid yapýsýnda olan aB-Kristallin, lensin ana bileþenlerinden multimerik protein a-kristallin iki alt ünitesinden (aA ve aB) birisidir.

aB-Kristallin, moleküler þaperon ve ýsý þok proteini olarak protein katlanmalarýndaki yanlýþlarý önler ve anti-apoptotik özellikleri vardýr.

Bu çalýþmada, aB-kristallinin köpek merkezi sinir sistemi (MSS)’ndeki ekspresyonu; beyin, beyincik, bulbus olfaktorius, hipofiz, medulla oblongata, ammon boynuzu, hipotalamus ve servikal omurilikten alýnan doku örneklerinde immünohistokimyasal teknikle incelendi. aB- kristallin ekspresyonuna, hipofiz hariç incelenen tüm MSS bölgelerinde glial hücrelerde rastlandý. Nöronlarda ise pozitif reaksiyon gözlenmedi. aB-Kristallin/ 2',3'-siklik nükleotid 3'-fosfodiesteraz (CNPase) ikili immünohistokimyasal boyamada, immünoreaktif glia hücrelerinin CNPase pozitif oligodendrositler olduklarý belirlendi ve kristallin immünoreaktivitesine özellikle ak madde ve boz maddenin ak maddeye yakýn katmanlarýndaki oligodendrositlerde rastlandý. Omurilik beyaz ve boz maddesinde oldukça fazla sayýda aB-kristallin pozitif oligodendrositler saptanýrken; ak maddede oldukça sýnýrlý sayýda aB-kristallin pozitif, CNPase negatif glia hücreleri gözlendi. aB- Kristallin immünoreaktivitesi hücrelerin sitoplazmalarýnda yoðun, çekirdeklerinde ise daha zayýftý. Bu çalýþmada, normal köpek MSS'nde özellikle oligodendrositlerde saptanan aB-kristallin'in, myelin temel proteini gibi oligodendrositler tarafýndan yoðun olarak sentezlenen fonksiyonel proteinlerin yapýsýnýn korunmasýnda görev alabileceði sonucuna varýldý.

Anahtar Kelimeler: aB-kristallin, köpek, merkezi sinir sistemi, oligodendrosit, immünohistokimya

Summary: aB-Crystallin is one of two subunits of multimeric protein a-crystallin (aA and aB), which is a major component of the lens.

As a molecular chaperon and heat shock protein, aB-Crystallin prevents false protein folding and has anti-apoptotic properties. In this study, aB-crystallin expression was investigated in the central nervous system (CNS) using the tissues collected from the cerebrum, cerebellum, olfactory bulb, pituitary gland, medulla oblongata, cornu ammonis, hypothalamus and cervical spinal cord. Except in the pituitary, aB-crystallin immunolocalized in glial cells in all nervous tissues investigated. No immunoreactivity was observed in neurons.

In double staining of aB-crystallin and 2',3'-cyclic nucleotide 3'-phosphodiesterase (CNPase), the immunoreactive glial cells were determined to be CNPase positive as oligodendrocytes. Immunoreactive oligodendrocytes located mainly the in the white matter and the layers of the gray matter adjacent to the white matter. However, the spinal cord had numerous aB-kristallin positive oligodendrocytes both in the white and gray matters. In the white matter of the spinal cord, a limited number of glial cells were positive for aB-crystallin, but negative for CNPase. aB-Crystallin immunoreactivity was weak in cytoplasm but very light in the nucleus. As observed in oligodendrocytes of normal dog CNS tissues, aB-crystallin may have roles in anti-apoptotic process of oligodendrocytes and prevention false folding of proteins such as myelin basic protein, which is synthesized intensively by oligodendrocytes.

1 Kýrýkkale Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Histoloji ve Embriyoloji Bilim Dalý, 71451 Yahþihan, Kýrýkkale TÜRKÝYE 2 Ondokuz Mayýs Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Patoloji Anabilim Dalý, 55139 Kurupelit Samsun TÜRKÝYE Key Words: aB-crystallin, central nervous system, dog, immunohistochemistry, oligodendrocyte

Siyami Karahan¹ Tolga Güvenç²

Geliþ Tarihi: 07.12.2007 Kabul Tarihi: 31.01.2008

oluþmasýný saðlayan aB-kristallin'in ýsý ve ozmotik basýnçtan kaynaklanan stres durumunda arttýðý görülür (Klemenz ve ark., 1991). Hücre iskeleti elemanlarýyla iliþki kurarak hücrenin yapýsal stabilitesini saðlar (Djabali ve ark., 1997). Mikrotubulus iliþkili protein aracýlýðý ile mikrotubuluslara baðlanýr ve ayrýþmalarýný önler (Xi ve ark., 2006). Diðer taraftan aktin, dezmin filamanlarý, glial fibriler asidik protein, vimentin ve filensin/phakinine baðlanabildiði de bildirilmiþtir (Bennardini ve ark., 1992; Djabali ve ark., 1997). aB- Kristallin, aktin ile birlikte pinositoz iþleminin sürekliliðini saðlar (Singh ve ark., 2007). aB-Kristallin’in bölünen hücrelerin sentrozomlarý (Inaguma ve ark., 2001) ve Golgi Matriks 130 proteini ile eþ yerleþim göstermesinin, mitoz sýrasýnda organellerin reorganizasyonunda rol alabileceði yönünde yorumlanmaktadýr (Gangalum ve ark., 2004).

aB-Kristallin’in en önemli özelliklerinden birisi de kaspaz-3 üzerinden antiapoptik aktivite göstermesidir (Ikeda ve ark., 2006). Aktive olan kaspaz-3 e baðlanarak bu enzimin aktivitesini engeller (Kamradt ve ark., 2002). aB-Kristallin oksidatif stres ile indüklenmiþ apoptozis sýrasýnda pro-apoptotik bir protein olan mitokondrial p53’ün translokasyonunu da engeller (Liu ve ark., 2007). Ayrýca TNF- a reseptörlerine baðlanarak bir seri protein iliþkisi sonucu, prokaspaz-8’i aktive eder (Garrido ve ark., 2001).

Aktive olan kaspaz-8, prokaspaz-3’ü keser ve p24 ara molekülünü þekillendirir. aB-Kristallin ayný zamanda, hücrede apoptozisin tetiklenmesi için gerekli olan kaspaz-3’ün oluþumunda gerekli olan otoproteolitik reaksiyonu baskýlar (Duvanel ve ark., 2004).

aB-kristallin’in gerek normal hücre fonksiyonlarýnda, gerekse nörodejeneratif deðiþiklikler esnasýndaki koruyucu ve düzenleyici iþlevleri nedeniyle, MSS’deki varlýðý önemlidir. Köpeklerin MSS’inde aB-kristallin ekspresyonuna ve daðýlýmýna ait bilimsel veriler oldukça sýnýrlýdýr. Bu çalýþmada, köpek MSS’in sistematik olarak farklý bölgelerinden alýnan sinir dokularýnda aB-kristallin ekspresyonunun belirlenmesi amaçlanmýþtýr.

Materyal Metot

Araþtýrmanýn materyalini; Kýrýkkale Üniversitesi Veteriner Fakültesi kliniklerine travma anamnezi ile getirilen ancak merkezi sinir sisteminde travma belirtisi olmayan veya nekropsisinde makroskobik herhangi bir hastalýk bulgusu göstermeyen 1-3 yaþlarýnda melez ýrklý 7 köpek oluþturdu. Her bir köpekten, beyin korteksinin frontal, parietal, temporal, oksipital loblarý, beyincik, hipofiz, hipotalamus, bulbus olfaktorius, ammon boynuzu, medulla oblongata ve servikal omurilik'ten doku örnekleri alýndý. Dokular, 48 saat

süreyle %10’luk nötral formol solüsyonunda tespit edildi, etanol ve ksilol serilerinden geçirildikten sonra parafine bloklandý ve bloklaradan 5 µm kalýnlýðýnda kesitler alýndý. Hematoksilen & eozin ile boyanan doku kesitleri, yapýlan histolojik inceleme sonucunda normal histolojik yapýnýn korunduðu gözlendikten sonra diðer seri kesitler aB-kristallin ekspresyonunu belirlemek amacýyla immünohistokimyasal çalýþmada kullanýldý.

Ýmmünohistokimyasal Ýncelemeler: Doku kesitlerinin immünohistokimyasal boyanmasýnda streptavidin-biotin-peroksidaz (Zymed, Histostain Plus Kit, California, USA) tekniði kullanýldý. Bir gece 37

•'3fC’de tutulan parafini eritilen kesitler, ksilol serilerinden geçirilerek deparafinize edildi ve yüksekten düþük dereceye doðru alkol serilerinden geçirilerek rehidre edildi ve distile suya gelindi. Antijeni açýða çýkarmak amacýyla sitrat tampon solüsyonunda (pH 6.0), 600 W’lýk mikrodalga fýrýnda 2 dk süreyle ýsýtýldý.

Absolü metanolde taze hazýrlanan %3’lük hidrojen peroksit içinde 5 dk tutularak dokudaki endojen peroksidaz inaktive edildi ve PBS (pH 7.4)’le yýkandýktan sonra kesitler non-spesifik baðlanmalarý engellemek için normal keçi serumu ile muamele edildi. Sonrasýnda, 60 dk monoklonal anti-aB-kristallin (SPA-222, Stressgen, Victoria, Canada) antikoru ile inkübe edilerek PBS’le yýkandý. Takiben kesitler biotin ile konjuge geniþ spektrumlu sekonder antikor (85- 9043, Zymed, California, USA) 10 dk muamele edildi.

Kromojen olarak, amino etil karbazol (AEC) ya da 3,3’- diaminobenzidin (DAB) kullanýlarak oda sýcaklýðýnda peroksidaz (HRP) demonstre edildi.

Mayer's hematoksilen ile 1 dk boyanan kesitler, çeþme suyunda yýkandý, su bazlý yapýþtýrýcý ile kapatýldý ve ýþýk mikroskobunda incelendi. Test sýrasýnda, negatif kontrol amacýyla bir kesitte primer antikor, diðerinde ise sekonder antikor yerine PBS kullanýldý.

Ýmmünohistokimyasal boyamanýn ikinci aþamasýnda ikili immün boyamaya geçildi; yukarýda tanýmlanan prosedürün kromojen (AEC) aþamasýndan sonra, Mayer’s Hematoksilen uygulanmadan tekrar PBS ile yýkandý. Ýkinci primer antikor olarak, olgidendrosit iþaretleyicisi olarak da kullanýlan (Yarim ve Kabakci, 2004) monoklonal anti-2',3'-siklik nükleotid 3'-fosfodiesteraz (CNPase) antikoru (Sigma) ile oda sýcaklýðýnda 60 dk süreyle inkübe edildi. Sekonder antikor ve mikroskopta izlenerek yapýlan kontrollü DAB inkübasyon aþamalarýndan geçirilen kesitler, sonra Mayer's hematoksilen ile boyanýp lamel ile kapatýldý.

Bulgular

aB-Kristallin antijen daðýlýmý, beyin korteksinin farklý bölgelerinden alýnan kesitlerde birbirine oldukça benzerdi. Beyin korteksinin boz maddesindeki KARAHAN, GÜVENÇ

immünoreaktif hücreler çoðunlukla ak maddeye yakýn stratum polimorfikum katmanýnda görüldü (Þekil 1 ve 2). Str. molekülare ve Str. piramidale katmanlarýnda ise immünoreaktif hücrelere oldukça az sayýda veya hiç rastlanmadý. aB-Kristallin immünoreaktif hücrelere ak maddede yoðun olarak rastlandý (Þekil 3). Ýkili immünoperoksidaz boyama uygulanan kesitlerde aB- kristallin pozitif hücreler ayný zamanda CNPase pozitifti, dolayýsýyla bu hücrelerin aB-kristallin aktivitesi gösten hücreler olduklarý kesinleþtirildi (Þekil 4 ve 5).

Yalnýzca omurilik ak maddesindeki sýnýrlý sayýdaki aB- kristallin immünoreaktif fakat CNPase negatif hücreler hariç merkezi sinir sisteminin diðer bölgelerinden alýnan kesitlerdeki aB-kristallin pozitif hücrelerin de oligodendrosit olduklarý belirlendi.

Beyincikte aB-kristallin immünoreaktif hücreler, boz maddenin stratum molekülare katmanýnda yok denecek kadar az sayýda, stratum gangliosumda Purkinje hücrelerinin çevresinde ve stratum gangliosum katmanýnda oldukça sýnýrlý sayýda görüldüler (Þekil 6-8). Beyinciðin ak maddesinde ise yoðun olarak oligodendrosit boyanmasý görüldü (Þekil 6 ve 8). Bulbus olfaktoriusun glomerüler ve mitral hücre katmanlarýnda immünopozitif boyanma görülmezken, internal granüler hücre katmanýnda oldukça sýnýrlý sayýda immünopozitivite tespit edildi (Þekil 9). Ammon boynuzu nöronlarýnda her iki antikora spesifik pozitif reaksiyon gözlenmediði halde nöronlar arasýndaki oligodentrositlerde pozitif reaksiyon dikkati çekti (Þekil 10). Benzer þekilde, medulla oblongata (Þekil 11) ve hipotalamustaki (Þekil 12) oligodendrositlerde de immünopozitivite gözlendi.

Adenohipofiz ve nörohipofizde kristallin aktivitesine rastlanmadý (Þekil 13). Omurilikte hem boz hem de ak maddede yoðun hücre boyanmalarý þekillendi (Þekil 14 ve 15). Boz maddedeki immünoreaktif oligodendrositler özellikle ventral kornuda yoðundu (Þekil 14). Omuriliðin ak maddesinde oldukça sýnýrlý sayýda aB-kristallin pozitif, CNPase negatif glia hücresi görüldü (Þekil 16). Bu hücreler morfolojik olarak ta astrosit olarak deðerlendirildi.

aB-Kristallin immünolokalizasyonu yoðun olarak sitoplazmada, çok daha az yoðunlukta ise çekirdekte görüldü (Þekil 7,11 ve 15).

Tartýþma ve Sonuç

Isý þok proteinleri ailesinin bir üyesi ve moleküler þaperon olarak deðerlendirilen aB-kristallin, anti- apoptotik ve hatalý protein katlanmasýný önleme özelliklerine sahiptir (Klemenz ve ark., 2001; Ikeda ve ark., 2006). Özellikle sinir sistemi gibi rejenerasyon kapasitesi oldukça sýnýrlý olan dokularda bulunmasý, bu dokularýn bütünlüklerinin korunmasýnda önemli rolleri olduðunu ortaya koymaktadýr (Iwaki ve ark., 1992; Duvanel ve ark., 2004). Bu çalýþmada, köpek

MSS'nden alýnan sistematik doku örneklerinde aB- kristallinin varlýðý, immünohistokimyasal metotla araþtýrýlmýþtýr. Hipofiz bezi dýþýnda, test edilen beyin korteksinin farklý bölgeleri, beyincik, ammon boynuzu, hipotalamus, medulla oblangata, bulbus olfaktorius ve omurilikte aB-kristallin lokalizasyonu görülmüþtür.

Daha önceki çalýþmalarda da sýçanlarýn hipofiz bezinde, aB-kristallin lokalizasyonunun olmadýðý bildirilmiþtir (Iwaki ve ark., 1990).

aB-Kristallin normal MSS dokularýnda çoðunlukla ak ve boz maddedeki glial hücrelerde görülmektedir.

Yapýlan morfolojik deðerlendirmede bu hücrelerin çoðunlukla oligodendrosit ve sýnýrlý sayýda ve daha az yoðunlukta astrositler olduðu belirlenmiþtir (Iwaki ve ark., 1990 ve 1992). Köpek MSS dokularýnda yapýlan bu çalýþmada aB-kristallin immünoreaktif hücrelerin hemen hepsi oligodendrosit iþaretleyicisi olarak kullanýlan CNPase için immünopozitif reaksiyon gösterdiler. Sadece, omuriliðin ak maddesinde oldukça sýnýrlý sayýdaki glial hücrenin aB-kristallin pozitif, fakat CNPase negatifdi. Bu hücrelerin morfolojik olarak astrosit olduklarý deðerlendirildi. aB-kristallin immünoreaktif oligodendrositler çoðunlukla MSS’nin ak maddesinde ve daha az sýklýkta da boz maddenin ak maddeye yakýn katmanlarýnda görüldü. Dolayýsýyla aB-kristallinin yanlýþ protein birikimi ve katlanmasýný engelleyici þaperon aktivitesi (Klemenz ve ark., 1991;

Xi ve ark., 1999; Duvanel ve ark., 2004) göz önüne alýndýðýnda, oligodendrositlerin en önemli fonksiyonel proteini olan miyelin bazik protein (MBP)’in bütünlüðünün korunmasýnda rol alabileceði söylenebilir. Ratlarda oluþturulan antikor-aracýlý demiyelinasyon modelinde aB-kristallinin upregüle olmasý, aB-kristallin'in akson kýlýflarýnýn miyelinizasyonunda görevi olabileceðini düþündürmüþtür (Duvanel ve ark., 2004). Köpek MSS korteksinin farklý bölgeleri, hipotalamus, bulbus olfactorius, ammon boynuzu, medulla oblongata ve servikal omurilikte aB-kristallin ekspresyonunun ortaya konulmasýyla özellikle köpek gençlik hastalýðý, yaþlý köpek ensefalitis’i ve yaþlýlýða baðlý nörodejeneratif bozukluklarda, oligodendrositlerin fizyopatolojik rollerinin anlaþýlmasýnda büyük avantaj saðlanabilecektir. Bu tür hastalýklarda, miyelin kýlýfta yýkýmlanma ve myelin sentezi bozukluklarýyla birlikte, damar duvarlarýnda anormal protein birikimleri görülmesi de bu öneriyi destekler niteliktedir.

Normal MSS dokularýnda aB-kristallin immünoreaktivitesi, nöronlar ve mikroglia hücrelerinde görülmez (Iwaki ve ark, 1992). Ancak patolojik durumlarda, bu hücrelerde eksprese edilmektedir (Iwaki ve ark, 1992; Duvanel ve ark., 2004). Bu çalýþmada test edilen köpek MSS dokularýnýn hiç birinde nöron boyanmasýna rastlanmadý. Medulla spinalis ak maddesinde sýnýrlý sayýda görülen aB-

KARAHAN, GÜVENÇ

kristallin pozitif fakat CNPase negatif hücreler, morfolojik olarak mikrogliadan çok astrositlere benzemekteydi. Normal sinir dokusu ve subpial astrositlerde zayýf bir boyanma olduðu ve patolojik durumlarda aB-kristallinin upregüle olabileceði bilinmektedir (Iwaki ve Ark., 1992). Sunulan çalýþmada da, benzer þekilde servikal omuriliðin ak maddesinde kristallin pozitif astrositler gözlendi; ancak bunlarýn subpial bölgeden çok ak maddenin orta kýsýmlarýnda lokalize olduklarý dikkati çekti.

aB-Kristallin sitoplazmik boyanma özelliðine sahiptir (Iwaki ve ark., 1992). Ancak, bu çalýþmada da bildirildiði gibi, daha az yoðunlukta da olsa çekirdek boyanmasý göstermektedir (Duvanel ve ark., 2004).

Son yýllarda yapýlan moleküler çalýþmalarda;

sitoplazmada sentezlenen aB-kristallinin çekirdeðe taþýndýðý ve “nuclear SC35 speckle” olarak adlandýrýlan spesifik nükleer yapýlara baðlanarak görev yaptýðý ortaya konulmuþtur (van Rijk ve ark., 2003).

Interkromatin granül kümeleri olarak da bilinen “nuclear SC35 speckle” yapýlarý çekirdekteki“recycling” ve

“splicing” faktörlerinin depolandýðý yerlerdir (Lamond and Spector, 2003) . aB-Kristallin’in “recycling” ve

“splicing” faktörleri ve söz konusu hücresel olaylarla iliþkisi araþtýrýlan güncel konular arasýndadýr (del Engelsman, 2005).

Sonuç olarak, bu çalýþmada köpek MSS’de baþlýca oligodendrositlerde aB-kristallin lokalizasyonu tespit edilmiþtir ve immünopozitivite özellikle ak ve boz maddenin ak maddeye yakýn kýsýmlarýnda yoðundur. Bulgulara dayanýlarak aB-Kristallin'in, oligodendrositler tarafýndan sentezlenen miyelin bazik protein’in etkin yapýsal özelliklerini ve oligodendrositleri apoptozisden koruyan bir role sahip olduðu sonucuna varýlmýþtýr.

Þekil 1. Beyin korteksininin boz maddesinde aB- kristallin daðýlýmý. aB-Kristallin immünoreaktif hücreler genellikle ak maddeye yakýn stratum polimorfikum katmanýnda görüldü.

Ýmmünoperoksidaz test ve Mayer’s hematoksilen zýt boyama. Büyütme çizgisi= 140 µm

Þekil 2. Korteksteki aB-kristallin immünoreaktif glia hücreleri (oklar) ve negatif nöronlar (ok baþlarý).

Ýmmünoperoksidaz test ve Mayer’s hematoksilen zýt boyama. Büyütme çizgisi= 30 µm

Þekil 3. Korteksin ak maddesindeki aB-kristallin immünoreaktif hücreler. Ýmmünoperoksidaz test ve Mayer’s hematoksilen zýt boyama. Büyütme çizgisi= 65 µm

Þekil 4. Korteksin boz maddesinde aB-kristallin

(AEC kromojen) ve CNPase (DAB kromojen)

immünoreaktif oligodendrositler (ok) ve negatif

nöronlar (ok baþý). Ýkili immünoperoksidaz test ve

Mayer’s hematoksilen zýt boyama. Büyütme

çizgisi= 40 µm

Köpeklerin Merkezi Sinir...

Þekil 5. Korteksin ak maddesinde aB-kristallin ve CNPase immünoreaktif oligodendrositler (oklar). Ýkili immünoperoksidaz test ve Mayer’s hematoksilen zýt boyama. Büyütme çizgisi= 65 µm

Þekil 6. Beyincikte aB-kristallin immünoreaktif o l i g o d e n d r o s i t l e r. Ý m m ü n o r e a k t i f oligodendrositler boz maddenin stratum molekülare katmanýnda yok denecek kadar az sayýda, stratum gangliosumda purkinje hücrelerinin çevresi 1-2 ve stratum gangliosum katmanýnda oldukça sýnýrlý. Ýmmünoperoksidaz test ve Mayer’s hematoksilen zýt boyama.

Büyütme çizgisi= 250 µm

Þekil 7. aB-Kristallin negatif Purkinje hücrelerinin (ok baþlarý) yakýnlarýnda az sayýdaki immünoreaktif oligodendrositler (oklar). Ýmmünoreaktif oligodendrositlerde yoðun sitoplazmik fakat çok daha az yoðunlukta çekirdek boyanmasý.

Ýmmünoperoksidaz test ve Mayer’s hematoksilen zýt boyama. Büyütme çizgisi=

Þekil 8. Beyincik ak maddesinde aB-kristallin i m m ü n o r e a k t i f o l i g o d e n d r o s i t l e r.

Ýmmünoperoksidaz test ve Mayer’s hematoksilen

zýt boyama. Büyütme çizgisi= 140 µm

Þekil 9. Bulbus olfaktoriusun internal granüler hücre katmanýnda oldukça sýnýrlý sayýdaki immünopozitif hücreler. Ýmmünoperoksidaz test ve Mayer’s hematoksilen zýt boyama.

Büyütme çizgisi= 65 µm

Þekil 10. Ammon boynuzu, nöronlar arasýndaki aB-kristallin immünoreaktif oligodentrositler.

Ýmmünoperoksidaz test ve Mayer’s hematoksilen zýt boyama. Büyütme çizgisi= 30 µm

Þekil 11. Medulla oblongata, nöronlar (ok baþý) arasýndaki aB-kristallin immünoreaktif oligodentrositler (ok). Ýmmünoperoksidaz test ve Mayer’s hematoksilen zýt boyama.

Büyütme çizgisi= 30 µm

Þekil 12. Hipotalamus, aB-kristallin immünoreaktif oligodentrositler.

Ýmmünoperoksidaz test ve Mayer’s hematoksilen zýt boyama. Büyütme çizgisi=

65 µm

Köpeklerin Merkezi Sinir...

Þekil 13. aB-kristallin immünonegatif hipofiz. Ýmmünoperoksidaz test ve Mayer’s hematoksilen zýt boyama.

Büyütme çizgisi= 65 µm

Þekil 14. Servikal omurilik, gri ve ak maddede yoðun hücre boyanmalarý. Ýmmünoperoksidaz test ve Mayer’s hematoksilen zýt boyama.

Büyütme çizgisi= 140 µm

Þekil 15. Servikal omurilik, akson demetleri arasýndaki aB-kristallin immünoreaktif oligodentrositler. Ýmmünoperoksidaz test ve Mayer’s hematoksilen zýt boyama. Büyütme çizgisi= 65 µm

Þekil 16. Omuriliðin ak maddesinde oldukça

sýnýrlý sayýda aB-kristallin immünopozitif (AEC

kromojen) ve CNPase (DAB kromojen) negatif

glia hücreleri (oklar). Ok baþý oligodendrositi

göstermektedir (kristallin ve CNPase

immünopozitif). Ýkili immünoperoksidaz test

ve Mayer’s hematoksilen zýt boyama. Büyütme

çizgisi= 65 µm

Kaynaklar

1. Bennardini, F., Wrzosek, A., Chiesi, M. (1992). aB- crystallin in cardiac tissue. Association with actin and desmin filaments. Circ Res., 71, 2, 288-294.

2. Dabir, D.V., Trojanowski, J.Q., Richter-Landsberg, C., Lee, V.M., Forman, M.S. (2004). Expression of the small heat-shock protein ?B-crystallin in tauopathies with glial pathology. Am J Pathol., 164, 1, 155-166.

3. den Engelsman, J., Gerrits, D., de Jong, W.W., Robbins, J., Kato, K., Boelens, W.C. (2005) Nuclear import of aB-crystallin is phosphorylation-dependent and hampered by hyperphosphorylation of the myopathy-related mutant R120G. J Biol Chem., 280, 44, 37139-37148.

4. Djabali, K., de Néchaud, B., Landon, F., Portier, M.M. (1997). aB-crystallin interacts with intermediate filaments in response to stress. J Cell Sci., 110, Pt 21, 2759-2769.

5. Dubin RA, Wawrousek EF, Piatigorsky J (1989).

Expression of the murine a B-crystallin gene is not restricted to the lens. Mol Cell Biol., 9, 3,1083-1089.

6. Duvanel, C.B., Monnet-Tschudi, F., Braissant, O., Matthieu, J.M., Honegger, P. (2004). Tumor necrosis factor-a and aB-crystallin up-regulation during antibody- mediated demyelination in vitro: a putative protective mechanism in oligodendrocytes. J Neurosci Res., 78, 5, 711-722.

7. Gangalum, R.K., Schibler, M.J., Bhat, S.P. (2004).

Small heat shock protein aB-crystallin is part of cell cycle-dependent Golgi reorganization. J Biol Chem., 279, 42, 43374-43377.

8. Garrido, C., Gurbuxani, S., Ravagnan, L., Kroemer, G. (2001). Heat shock proteins: endogenous modulators of apoptotic cell death. Biochem Biophys Res Commun., 286, 3, 433-442.

9. Ikeda, R., Yoshida, K., Ushiyama, M., Yamaguchi, T., Iwashita. K., Futagawa, T., Shibayama, Y., Oiso, S., Takeda, Y., Kariyazono, H., Furukawa, T., Nakamura, K. Akiyama,S, Inoue, I.Yamada, K. (2006).

The small heat shock protein aB-crystallin inhibits differentiation-induced caspase 3 activation and myogenic differentiation. Biol Pharm Bull., 29, 9, 1815- 1819.

10. Inaguma, Y., Ito, H., Iwamoto, I., Saga, S., Kato, K. (2001). aB-crystallin phosphorylated at Ser-59 is localized in centrosomes and midbodies during mitosis.

Eur J Cell Biol., 80, 12, 741-748.

11. Iwaki, T., Iwaki, A., Tateishi, J., Sakaki, Y., Goldman, J.E. (1993). aB-crystallin and 27-kd heat shock protein are regulated by stress conditions in the central

nervous system and accumulate in Rosenthal fibers.

Am J Pathol., 143, 2, 487-495.

12. Iwaki, T., Kume-Iwaki, A., Goldman, J.E. (1990).

Cellular distribution of aB-crystallin in non-lenticular tissues. J Histochem Cytochem., 38, 1, 31-39.

13. Iwaki, T., Wisniewski, T., Iwaki, A., Corbin, E., Tomokane, N., Tateishi, J., Goldman, J.E. (1992).

Accumulation of aB-crystallin in central nervous system glia and neurons in pathologic conditions. Am J Pathol., 140, 2, 345-356.

14. Kamradt, M.C., Chen, F., Sam, S., Cryns, V.L.

(2006). The small heat shock protein aB-crystallin inhibits differentiation-induced caspase 3 activation and myogenic differentiation. Biol Pharm Bull., 29, 9, 1815-1819.

15. Klemenz, R., Fröhli, E., Steiger, R.H., Schäfer, R., Aoyama, A. (1991). aB-crystallin is a small heat shock protein. Proc Natl Acad Sci U S A., 88, 9, 3652- 3656.

16. Lamond, A.I., Spector, D.L. (2003) Nuclear speckles: a model for nuclear organelles. Nat Rev Mol Cell Biol., 4, 8, 605-612.

17. Liu, S., Li, J., Tao, Y., Xiao, X. (2007). Small heat shock protein aB-crystallin binds to p53 to sequester its translocation to mitochondria during hydrogen peroxide-induced apoptosis. Biochem Biophys Res Commun., 354, 1, 109-114.

18. Quax-Jeuken, Y., Quax, W., van Rens, G., Khan, P.M., Bloemendal, H. (1985). Complete structure of the aB-crystallin gene: conservation of the exon-intron distribution in the two nonlinked alpha-crystallin genes.

Proc Natl Acad Sci U S A., 82, 17, 5819-5823.

19. Singh, B.N., Rao, K.S., Ramakrishna, T., Rangaraj, N., Rao, ChM. (2007). Association of aB-crystallin, a small heat shock protein, with actin: role in modulating actin filament dynamics in vivo. J Mol Biol., 366, 3, 756-767.

20. van Rijk, A.E., Stege, G.J., Bennink, E.J., May, A., Bloemendal, H. (2003). Nuclear staining for the small heat shock protein aB-crystallin colocalizes with splicing factor SC35. Eur J Cell Biol., 82, 7, 361-368.

21. Xi, J.H., Bai, F., McGaha, R., Andley, U.P. (2006).

Alpha-crystallin expression affects microtubule assembly and prevents their aggregation. FASEB J., 20, 7, 846-857.

2 2 . Ya r i m , M . , K a b a k c i , N . ( 2 0 0 4 ) . Neurosteroidogenesis in oligodendrocytes and Purkinje neurones of cerebellar cortex of dogs. Anat Histol Embryol., 33, 3, 151-154.

BOÞ SAYFA