癌症是由於基因的缺損而造成不正常的增生而成﹐在臨床上﹐針對癌細胞的化學療法﹐大都是由影響細 胞週期的分子調控著手﹐冀望能因此影響 DNA 完整性﹐進而造成細胞週期停滯,誘發癌細胞的凋 亡 (apoptosis) 。臨床上的化療藥物卻有令人詬病的副作用﹐嚴重影響到病患的生活品質 (quality of l ife) 。本研究是針對人類大腸癌細胞 colo205﹐ 經由篩選臨床上已安全地使用於非治療大腸癌的藥 物﹐希望能找到藥物在體外誘導大腸癌細胞的凋亡。本研究是由四個部分所組成: DNA 裂解及梯 度 (DNA fragmentation and laddering) 、細胞生長曲線 (cell growth curve) 、細胞週期及凋亡體 (apopt otic body) 偵測,及西方墨蹟法 (Western Blot assay) 。有 15 項藥品被選用於初步的篩選﹐再與培養 的 colo205 細胞作用後﹐以電泳方式觀察有無 DNA laddering 現象 ( 此為凋亡之特有性表徵 ) ,接著 將篩選出的藥品﹐依濃度梯度與培養的 colo205 細胞作用一至三天﹐並於每天計算細胞總個數以求 出細胞生長曲線。再以流式細胞儀 (Flow cytometer) 分析在細胞週期中﹐各細胞週期佔所有細胞的 比率及凋亡體 (apoptotic body) 發生之比率。電泳的結果顯示﹐僅有經 Cyprohepatadine 處理過的 Col o205 細胞﹐產生 DNA laddering 的現象﹐而且其電泳結果的 laddering 清晰度隨著藥物劑量的增加而 增加。細胞生長曲線的結果亦顯示﹐即使是 20mM 的 Cyprohepatadine﹐ 也能成功地在體外抑制大 腸癌細胞的增生﹐而 80mM 以上的 Cyprohepatadine 更能在 24 小時的時間內就已完全誘殺 Colo 205 細胞。在流式細胞儀的分析結果中﹐ Sub-G1 峰的 apoptotic body 隨著 Cyprohepatadine 劑量的增加 而增加﹐ G1 峰的比例隨著 Cyprohepatadine 劑量的增加而增加 , 這顯示出 Colo205 被誘導進入停滯 於 G1 細胞週期 , 形成 apoptotic body 而進入凋亡。 Western blot assay 顯示 p53,p27, cytochrome C, c aspase, Bad,Bax, 及 PARP 隨著 Cyprohepatadine 劑量的增加而增加 , 這暗示出 Colo205 是經由 p27 抑制 cyclin E-cdk2 , 以抑制其促進 G1 轉向 S 期 , 被誘導進入停滯於 G1 細胞週期 ; 經由 p53 路徑 , 間接或直接促 mitochondria 釋放出 cytochrome c, 啟動 caspase pathway, 進而形成 apoptotic body 而進 入凋亡。本研究的結果顯示﹐ Cyprohepatadine 確可在體外誘發大腸癌細胞的凋亡。此結果可做為 日後發展化療藥物的參考。
Cyprohepatadine 誘發人類大腸癌細胞凋亡及細
胞週期停滯分子機制之研究