VİSİON BİYOTEKNOLOJİ ARAŞTIRMA GELİŞTİRME LABORATUVAR SİSTEMLERİ SANAYİ VE TİCARET LİMİTED ŞİRKETİ
VISION COVID-19 MULTIPREP-FAST REAL TIME PCR TEST KİTİ KULLANIM KLAVUZU
Yayın Tarihi: 22/07/2020
Bu ürünün kullanmadan önce bu kılavuz dikkatlice ve tamamen okunmalıdır. Herhangi bir sorunla karşılaşırsanız, lütfen yardım için Teknik Servis Merkezimizle iletişime geçiniz.
Adres: Merdivenköy Dis. Dikyol Sk. Business İstanbul B blok Kat 6, 58-59-60 Kadıköy, İstanbul 34732 Türkiye
1 Roche Light Cycler 480 Instrument II, Applied
Biosystem 7500 Fast, Bio rad CFX96 Realtime PCR, BioMolecular Systems Bio 4 - Channel+HRM ile kullanım için
"Vision Covid19 Multiprep Kit" Real-Time RT-PCR tanı paneli, 2019- ncov'u tespiti ve tanısında kullanılan ve nükleik asitlerin amplifikasyon teknolojisinden yararlanan moleküler in-vitro tanı testidir. Panel içeriğinde; oligonükleotid primerler, ikili etiketlenmiş hidroliz probları (TaqMan®) ve solunum yolu örneklerinde 2019-nCoV RNA'nın in-vitro kalitatif tespiti için rRT-PCR'de kullanılan kontrol materyal bulunur.
1-Real-Time PCR Çalışma Prensibi
Real-time tespit prensibi florojenik 5' Nükleaz yöntemine dayanır. Probun 5’
ucunda bir reporter boya ve 3’ ucunda da bir quencer boya bulunur. DNA polimeraz prob hedef DNA bölgesine hibridize olduğunda probun 5’ ucundaki reporter boyayı 3’ ucundaki quencer boyadan ayırır. Bu ayrılma sonucunda PCR Saptama Sistemi tarafından algılanan reporter boyanın floresan ışıması kayıt edilir. PCR döngüslerinde ilk tespit edilen ışıma döngüsü (Ct) kullanılan PCR ürünü miktarı ile doğru orantılıdır. Real Time boyunca floresan yoğunluğunun ölçülmesi amplifikasyonun ardından reaksiyon tüplerinin yeniden açılmasına gerek kalmadan biriken ürünlerin tespit edilmesini sağlar.
Ürün Açıklaması
11 Ocak 2020'de, Çin sağlık yetkilileri, Çin'in Hubei Eyaleti, Wuhan şehrinde incelenen pnömoni salgınında yeni korona virüsü enfeksiyonu bulunduran ilk olarak 40 kişiden fazla insan tespit etti. Çin sağlık yetkilileri yeni tip korona virüs (yeni korona virüs, 2019-nCoV olarak adlandırılır) tespit ettiler.
Korona virüsler, bazıları insanlarda hastalığa neden olan ve diğerleri develer, kediler ve yarasalar gibi hayvanları etkileyen büyük bir virüs familyasıdır. 2019-nCoV yeni bir korona virüstür. Bu kitte kullanılan primer ve problar yeni korona virüs türlerine uygun olarak dizayn edilmiştir (2019-Kasım) (Gene Bank katılım: MN908947) 6 2019-n CoV türün DNA dizilerini de kapsar (EPI_ISL_402119, EPI_ISL_402120,EPI_ISL_402121,EPI_ISL_402122,EPI_ISL_40212 3, EPI_ISL_402124). kit, gerçek zamanlı PCR sisteminde Ters Transkripsiyon Polimeraz Zincir Reaksiyonu (RT-PCR) ile Yeni Koronavirüsün (2019-nCoV) tespiti için özel bir kullanıma hazır sistem içerir. Master karışımı , virüs RNA'sının spesifik amplifikasyonu için bir Oligo Mix içerir. Reaksiyon, tek aşamalı gerçek zamanlı RT-PCR'de yapılır. İlk adım, virüs RNA'sının cDNA'ya kopyalandığı bir ters Transkripsiyondur (RT). Daha sonra, polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yoluyla spesifik gen fragmanlarını amplifiye etmek için termostabil bir DNA polimeraz kullanılır. .PCR sırasında floresan ışımaları emilir Floresans, PCR sırasında gerçek zamanlı sistem optik birim olarak ölçülür. Virüsün amplifiye DNA fragmentlerin tespitini FAM ve Cy5 florometre kanallarında yapar.
Kit Depolama
* Tüm reaktifler -20°C'de saklanmalıdır. +4°C'de depolama önerilmez.
* Tüm reaktifler, kit etiketinde belirtilen son kullanma tarihine kadar kullanılabilir.
* Tekrarlanan çöz-don (> 3x) işleminden kaçınılmalıdır, çünkü bu testin etkinliğini azaltabilir.
* Çalışma adımları sırasında tüm reaktifler soğukta tutulmalıdır.
3. Gerekli Malzemeler ve Cihazlar
* Biyolojik Güvenlik Kabini
* Vortex
* Mikro santrifüj
* Mikropipetler (2-10 µL, 10-100 µL ve 100-1000 µL)
* 1.5 mL mikrosantrifüj tüpleri için çok kanallı mikropipetler (5-50 µl) raflar
* 2 x 96-well -20°C soğuk bloklar, Roche LightCycler 480 Instrument II, Applied Biosystems 7500 Fast, Biorad CFX96 Realtime PCR, BioMolecular Systems Bio 4- Channel+HRM.
* Ekstraksiyon sistemleri veya test kitleri
• 10 % Çamaşır suyu (1: 10 seyreltme ticari 5.25-6.0 % hipoklorit ağartıcı)
* Tek kullanımlık pudrasız eldiven ve cerrahi önlükler
* Filtreli pipet uçları
* 1.5 mL mikrosantrifüj tüpleri (DNAz / RNAz içermez)
* 96 kuyu plakaları veya 0,1 / 0,2 ml strip
* Kuyucuklu Plak
4. Uyarılar ve Önlemler
* Laboratuvarda teşhis içindir (IVD).
* Sadece acil kullanım içindir.
* Standart önlemlere uyun. Tüm hasta örnekleri ve pozitif kontroller potansiyel olarak bulaşıcı olarak düşünülmeli ve buna göre ele alınmalıdır.
* Reaktiflerin ve insan örneklerinin işlendiği yerlerde yemek yemeyin, içmeyin, sigara içmeyin, kozmetik uygulamayın veya kontakt lens kullanmayın.
* Güvenli laboratuvar prosedürlerini kullanarak tüm örnekleri bulaşıcı gibi ele alın. 2019-nCoV ile ilişkili örneklerin işlenmesi ve işlenmesi için geçici laboratuvar Biyogüvenlik yönergelerine bakın
https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/lab-biosafety-kurallar.html.
* Halk sağlığı makamları tarafından önerilen mevcut klinik ve epidemiyolojik tarama kriterlerine dayanarak 2019-nCoV ile enfeksiyon şüphesi varsa, örnekler uygun enfeksiyon kontrol önlemleri ile toplanmalıdır.
* Performans özellikleri, solunum yolu enfeksiyonu belirtileri ve semptomları olan insan hastalarından insan üst solunum yolu örnekleri ve alt solunum yolu örnekleri ile belirlenmiştir.
* Sınıf II (veya daha yüksek) biyolojik güvenlik kabininde (BSC) canlı virüs örneklerinin uygulamalarını gerçekleştirin.
* Bu testi uygulama sırasında örnekleri, reaktifleri ve diğer ekipmanları kullanırken eldiven, göz koruma ekipmanı, ve lab önlüğü gibi koruyucu ekipman kullanın.
* PCR gibi amplifikasyon teknolojileri, önceki çalışmalardan ürünlerin bulunması durumunda hassaslık gösterir. Amplifikasyon ürününün (amplikon) yanlışlıkla amplifikasyon aşamasında kullanılan klinik örneğe veya reaktiflere karışması sonucunda yanlış sonuçlar elde edilebilir. Laboratuvardaki iş akışı tek yönlü bir şekilde ilerlemelidir.
* Nükleik asit çalışmaları için ayrı alanlar bulundurun.
* Tüm manuel sıvı transferleri arasında filtreli pipet uçlarını değiştirin.
Numune toplama, depolama ve taşıma numune toplama, paketleme ve Depolama
*Numunelerin yetersiz veya uygun olmayan bir şekilde toplanması, Depolanması ve taşınması muhtemelen yanlış test sonuçlarına yol Açacaktır. Numune toplama eğitimi, numune kalitesinin önemi Nedeniyle şiddetle tavsiye edilir. CLSI MM13-a uygun bir kaynak Olarak başvurulabilir.
2
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A MPF MPF MPF MPF MPF MPF MPF MPF MPF MPF MPF MPF B
C
D E F G
Şekil 1: MPF: Multiprep-fast
Örnek Toplama
* Uygun toplama yöntemleri için numune toplama cihazı üreticisinin talimatlarına uyun.
* Örnek toplamak için naylon veya Dacron° gibi sentetik uçlu ve alüminyum veya plastik şaftlı swaplar kullanılmalıdır. Kalsiyum aljinat swapları kabul edilemez ve ahşap şaftlı pamuklu çubuklar önerilmez.
Tamponları hemen 2-3 ml viral taşıma ortamı içeren steril tüplere yerleştirin.
Depolama Örnekleri
* Numuneler toplandıktan sonra 72 saate kadar 2-8°C'de saklanabilir.
* Ekstraksiyonda bir gecikme bekleniyorsa, numuneleri -70°C veya daha düşük bir sıcaklıkta saklayın.
*Ekstrakte edilen nükleik asit -70 ° C veya daha düşük sıcaklıkta saklanmalıdır.
9.
Prosedür
Sample Preparation
Vision Viral Transport Media kullanmanızı tavsiye ederiz.VIS-VTS
numuneyi toplama ve taşıma içindir.
9.1
RT-PCR Protokolü
Reaksiyon Karisimi 1,5 ml
Negatif kontrol MPF 50 ul
Pozitif Kontrol MPF 50 ul
Şekil 2: Kit İçeriği
1.Nükleik asit örnek tüplerini yaklaşık 5 saniye en düşük seviyede vortexleyin.
2.Tüpün altındaki içeriği toplamak için 5 saniye santrifüj edin.
Santrifüjden sonra, ekstrakte edilmiş nükleik asit numune tüplerini soğuk rack yerleştirin.
3. PCR cihazlarında değişik göstermekle birlikte 96 numune çalışılıcak bir denemede 95 ve 96 numaralı kuyucuklara sırasıyla negatif ve pozitif kontrol eklenmelidir.
4. Her test için, eklenecek her reaktifin miktarını hesaplayın. Her reaksiyon karışımı (N = reaksiyon sayısı).
5.Reaktifleri her bir tüpe 1,5 mL dağıtın. Reaktiflerin eklenmesinden sonra, reaksiyon karışımlarını pipetleyerek karıştırın yukarı ve aşağı şekilde.VORTEKS YAPMAYIN.
6.Tüpün altındaki içeriği toplamak için 5 saniye santrifüj edin.
Santrifüjden sonra, ekstrakte edilmiş nükleik asit numune tüplerini soğuk rack yerleştirin.
7. Reaksiyon strıp tüplerini 96 kuyucuklu soguk racka yerleştirin 8-1,5 mL reaksiyon karışımını, aşağıda gösterildiği gibi sıra boyunca uzanan uygun kuyulara dağıtın (Şekil 2)
9. Hasta numuneleri işleme alanına taşınmadan önce Negatif Kontrol ve pozitif kontrolü hazırlayın. Negatif kontrol için H11'i seçerseniz, pozitif kontrol için H12 kullanmalısınız.
Şekil 3: Örnek ve kontrol Kurulum örneği
Nükleik Asit Şablonunun Eklenmesi
1.Nükleik asit örnek tüplerini yaklaşık 10 saniye en düşük seviyede vortexleyin.
2. Örneklerin kuyucuklarını kayıt ederek dağıtabilirsiniz. Negatif kontrol için H11 seçerseniz pozitif kontrol için H12 kullanmalısınız. Örnekler, şekilde gösterildiği gibi yerleştirilmiiştir
3. İlk numunenin 5.0 µl'sini, bu numune için etiketlenmiş tüm kuyulara dikkatlice pipetleyin (yani, örnek “S1” aşağı sütun #2). Ek sırasında diğer numune kuyularını kapalı tutun. Her eklemeden sonra ipuçlarını değiştirin.
4.Çapraz Kontaminasyonu önlemek ve numunenin izlenmesini sağlamak için numunenin eklendiği sütunu güvenli bir şekilde kapatın.
5.Kontaminasyonu önlemek için eldivenleri sık sık ve gerektiğinde değiştirin.
8.Kalan örnekler için #4 ve #5 numaralı adımları yineleyin.
9.Tüm reaksiyon plakasını örtün ve reaksiyon plakasını pozitif kontrol işleme alanına taşıyın.
10. Kalite kontrol: negatif kontrol ve pozitif kontrol doğru yapılmalıdır, aksi takdirde örnek sonuçlar geçersizdir.
Assay Kontrol Solutions
1. Sütun 1 numune kuyularına 5 µL pozitif kontrol pipetleyin (Şekil 3).
Kontrol RNA'sını ekledikten sonra kuyuları güvenli bir şekilde kapatın. Not:
8 tüplü şeritler kullanılıyorsa, numunenin konumunu belirtmek için her şeridi
yazı bölgesini işaretleyin.
2.12. Reaksiyon tüpü şeritlerini 10-15 saniye santrifüj edin. Santrifüjden sonra soğuk rafa geri dönün. Not: 96 kuyu plakaları kullanılıyorsa, 500 x g, 4°C'de 30 saniye santrifüj edin.
Real-time PCR Döngüsü Programmı
VISION COVID19 MULTIPREP Temp.
°C Duration Cycles
Reverse Transcription 90 3 Min. 1
Initial activation 60 5 Min. 1
Denaturation 95 5 Sec. 40
Annealing/Extension* 55 30 Sec.
Şekil 4: Vision Covid19 Multiprep Fast Real-time-PCR Kurulum
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 B S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 C S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 D S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 E S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 F S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 G S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 H S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 S1 NC PC
3 Negatif Kontrol (NTC)
NTC, RNA yerine rRT-PCR reaksiyonlarında nükleaz bulundurmayan distile sudur. Tüm he karışımları için NTC reaksiyonları, eşik çizgisini geçen floresan büyüme eğrileri göstermemelidir. NTC reaksiyonlarında ışıma grafiğinin eşik değer çizgisini geçmesi durumunda çalışmada kontaminasyon meydana gelmiş olabilir. Çalışmayı geçersiz kılın ve kurallara sıkı sıkıya bağlı kalarak testi tekrarlayın.
Pozitif Kontrol (nCoVPC)
NCoVPC, in-vitroda transkripte olmuş RNA'dan oluşur.
N RP Expected
Ct Values Positive
Control
Positive Positive >35.00 Negative
Control
Negative Negative Tespit edilmemiş.
(<35.00 Ct) Şekil 5: Kontrollerin beklenen performansı
Yukarıdaki kontrollerden herhangi biri açıklandığı gibi beklenen performansı göstermezse, test yanlış ayarlanmış ve/veya çalıştırılmış olabilir veya reaktif veya ekipman arızası meydana gelmiş olabilir.
Çalıştırmayı geçersiz kılın ve yeniden test edin.
RNase P (Ekstraksiyon Kontrol’ü)
*Tüm klinik örneklerin RNAse P reaksiyonu, 40 döngü (<35.00 Ct) içinde eşik çizgisini geçen ve böylece insan RNAse P geninin varlığını gösteren floresan büyüme eğrisine sahip olmalı. Herhangi bir klinik örnekte RNAse P 'yi tespit edememek şunları gösterebilir:
* Nükleik asidin klinik materyallerden yanlış ekstraksiyonu, RNA kaybına ve / veya RNA bozulmasına neden olur.
* Yetersiz örnek veya numune bütünlüğünün kaybı nedeniyle yeterli insan hücresel materyalinin olmaması.
* Yanlış analiz kurulumu ve yürütülmesi.
*Reaktif bozulması veya ekipman arızası.
İnsan klinik örneklerinde RP geninde ışıma olmadığında, aşağıdaki gibi yorumlayın:
*2019-n CoV N ‘in pozitif olması durumunda pozitif bir RP olmasa bile sonuç geçerli kabul edilmelidir. Bazı örneklerin orijinal klinik örnekte düşük hücre sayıları nedeniyle Rnaz p büyüme eğrileri gösterememesi mümkündür. Negatif bir RP sinyali, bir klinik örnekte 2019-nCoV virüsü RNA'nın varlığını engellemez. Tüm 2019-nCoV belirteçleri ve RNAse P proteini negatif ise, sonuç numune için geçersiz kabul edilmelidir.
Ekstraksiyon prosedürünü tekrarlayın ve testi tekrarlayın. Yeniden testten sonra tüm işaretleyiciler negatif olursa, sonuçları geçersiz olarak bildirin ve mümkünse yeni bir örnek toplanmalıdır.
2019-nCoV Markörü (N)
* Tüm kontroller beklenen performansı gösterdiğinde, 40 döngüsü olan bir çalışmada 2019-nCoV belirteci (n geni) büyüme eğrisi eşik çizgisi üstünde <35.00 Ct değerinde değilse ve RNase P büyüme eğrisi <35.00 Ct değerindeyse bu örnek negatif olarak kabul edilir.
*Tüm kontroller beklenen performansı gösterdiğinde, 40 döngüsü olan bir çalışmada 2019-nCoV belirteci (n geni) büyüme eğrisi eşik çizgisi üstünde <35.00 Ct değerindeyse ve RNase P büyüme eğrisi
<35.00 Ct değerinde olabilir veya olmayabilir bu pozitiftir , RNAse P ye bakılmaksızın 2019-nCoV sonucu poiztif sayılır.
*Tüm kontroller beklenen performansı gösterdiğinde, 40 döngüsü olan bir çalışmada 2019-nCoV belirteci ve RNase P işaretçisi için büyüme eğrileri eşik çizgisi üstünde >35.00 Ct veya negatif değerinde ise sonuç geçersizdir. Test tekrarlanmalıdır. RNA mevcut değilse, ekstraksiyon işlemini tekrarlayın. Test edilen numune N ve Rnaz P için negatif ise, sonuç geçersizdir ve hastadan yeni bir numunenin alınması dikkate alınmalıdır.
Sonuçları Yorumlama Kılavuzu
Aşağıdaki tabloda 2019-n CoV RT-PCR teşhis paneli için beklenen sonuçlar listelenmiştir. Bir laboratuvar test kontrolleri için beklenmedik
sonuçlar elde ederse veya yetersiz sonuçlar elde edilirse testin tekrarı önerilir.
Tekrar sonuçların aynı olması durumunda istişare ve olası örnek sevki için Sağlık Bakanlığı ile iletişime geçin.
N RP Result Interpretation Actions
+ ± 2019-nCoV
Tespit edildi.
Raporlanabilir.
± -
Testi tekrarla aynı sonuç olması durumunda ekstraksiyonu tekrarla
- + 2019-nCoV
Tespit edilmedi
Raporlanabilir. Başka solunum yolları virüsü dikkate alınabilir.
- - Geçersiz sonuç. Ekstraksiyonu ve testi tekrarla.
Sonuçların tekrar yetersiz olması durumunda hastadan örneğin alınması tekrarlanır.
Şekil 6: 2019-nCoV RT-PCR teşhis paneli sonuçları yorumlama kılavuzu
Kalite Kontrolü
Kalite kontrol gereklilikleri yerel yönetmeliklere veya akreditasyon gerekliliklerine ve kullanıcının laboratuvarının standart kalite kontrol prosedürlerine uygun olarak yapılmalıdır.
* Kalite kontrol prosedürleri reaktiflerin ve test performansını incelemek için tasarlanmıştır.
* Tüm reaktiflerin ve kit bileşenlerinin düzgün çalıştığından emin olmak için örneklerin her yeni kit lotuyla çalıştırmadan önce pozitif kontrolleri test edin.
*İyi laboratuvar uygulaması, nükleik asit izolasyonu çalışmasına bir pozitif örnek de ekstraksiyon çalışmasına dâhil edilmesini önerir.
* Her zaman çalışmaya bir negatif kontrol (NTC) ve bir pozitif kontrol (nCoVPC) ekleyin. Tüm klinik numuneler, numune kalitesini ve ekstraksiyonunu kontrol etmek için insan RNAse P geni için test edilmelidir.
KISITLAMALAR
* Vision Covid19 Multiprep Real-Time PCR test kiti, Roche LightCycler 480 Instrument II Biosystems 7500 Fast, Bio rad CFX96 Realtime PCR, BioMolecular Systems Bio 4-Channel + HRM üzerinde çalışan tam kan, nazofaringeal veya sorofaringeal smear örnekleri ile kullanım için doğrulanmıştır
* Tüm kullanıcılar, analistler ve teşhis sonucunu raporlayacak kişiler, bu prosedürü tecrübeli bir eğitmen tarafından eğitilmelidir. Testi bağımsız olarak uyguladıktan sonra testi yapmalı ve sonuçları yorumlamalıdır.
4
CDC 2019-nCoV Real-Time RT-PCR tanı panelinin çalışması kan ve üst, alt solunum örneklerinde (nazofaringeal veya orofaringeal swablar, balgam, alt solunum yolu aspiratları, bronkoalveolar lavaj ve nazofaringeal yıkama/aspirat veya burun aspiratı gibi) yapılmıştır.
• Negatif sonuçlar 2019-nCoV enfeksiyonunu önlemez ve tedavi veya diğer hasta kontrolü kararları için tek temel olarak kullanılmamalıdır.
2019-nCoV 'un neden olduğu enfeksiyonlar sırasında en yüksek viral seviyelerin pik zamanı ve optimum örnek tipleri belirlenmemiştir.
Virüsü tespit etmek için aynı hastadan birden fazla numunenin (tipleri ve zamanı) toplanması gerekebilir.
* Bir numunenin yanlış toplanması, taşınması veya işlenmesi durumunda yalancı negatif sonuçlar oluşabilir. Numunede amplifikasyon inhibitörleri varsa veya numunede yetersiz sayıda organizma varsa yanlış negatif sonuçlar da ortaya çıkabilir.
* Pozitif ve negatif tahmini değerler prevalansa büyük ölçüde bağlıdır.
Yanlış negatif test sonuçları, hastalığın yaygınlığı yüksek olduğunda daha olasıdır. Yaygınlık orta ila düşük olduğunda yanlış pozitif test sonuçları daha olasıdır.
* Son kullanma tarihinden sonra herhangi bir reaktifi kullanmayın.
* Virüs qRt-PCR hedef bölgesinde mutasyona uğrarsa, 2019-nCoV tespit edilemez veya daha az tahmin edilebilir şekilde tespit edilebilir.
İnhibitörler veya diğer tipteki interferanslar yalancı negatif sonuç verebilir. Soğuk algınlığı ilaçlarının etkisini değerlendiren bir interferans çalışması yapılmamıştır.
* 2019-ncov'un neden olduğu enfeksiyonun epidemiyolojisi ve klinik spektrumu tam olarak bilinmediğinden test performansı etkilenebilir.
Örneğin, klinisyenler ve laboratuvarlar, enfeksiyon sırasında toplanması gereken en uygun örnek türlerini ve hemen teşhis konulabilecek viral RNA içeren bu örnekleri bilemeyebilir.
* Viral RNA'nın saptanması, enfeksiyon virüsün varlığını veya 2019- ncov'un klinik semptomlar için etken madde olduğunu göstermeyebilir.
• Bu testin performansı, 2019-nCoV enfeksiyonunun tedavisini izlemek için uygulanmaz.
• Bu test, 2019-ncov'un varlığı için kan veya kan ürünlerinin taranmasında kullanılmaz.
• Bu test, diğer bakteriyel veya viral patojenlerin neden olduğu hastalıkları dışlamaz.
Performans Değerlendirmesi
Vision Covid19 Multiprep Test Kiti performans değerlendirmesi Roche LightCycler 480 Instrument II Biosystems 7500 Fast, Biorad CFX96 Realtime PCR, BioMolecular Systems Bio 4- Channel+HRM cihazlarında analitik duyarlılığı olarak yapılmıştır.
Analitik Sensivitesi
Tespit limiti (LoD), en az %95'ini güvenilir bir şekilde tespit edilebilen en düşük analit konsantrasyonu olarak tanımlandı. İlk olarak, European Virus Archive-Global (Cat: 026N-03889) tarafından sağlanan artan miktarda SARS-CoV-2 tüm viral RNA'nın SARS-2 için negatif orofaringeal matrikse eklenmesiyle hazırlanan beş sınırlayıcı dilüsyonun test edilmesiyle deneysel LOD tespit edildi. LOD; Roche LightCycler 480 Instrument II Biosystems 7500 Fast, Biorad CFX96 Realtime PCR, BioMolecular Systems Bio 4- Channel+HRM cihazlarında 20 ekstraksiyon eluatlarının tek kopyalarının test edilmesiyle doğrulandı:
Roche LightCycler 480 II Real-Time PCR Sistemi
SARS-CoV2 Ortalama Konsantrasyon (kopya/µl)
Toplam Ortalama Konsantrasyon (kopya/rx n)
Positive calls/Total no.
Sonuçlar analize dahil edldi.
% Replicate Detectio n
Ortalam a Cq
Cq Standart Sapma
0.35 2.60 20/20 100 32 0.98
Şekil 7: Roche LightCycler 480 II cihazı Vision Covid19 Multiprep Real-time PCR Test Kit sensivitesi
Alternatif enstrüman testi geçici LoD, Roche LightCycler 480 Instrument II, Applied Biosystems 7500 Fast, Bio rad CFX96 Realtime PCR, BioMolecular Systems Bio 4 - Channel+HRM'DE 20 kopyanın test edilmesiyle de doğrulandı.
LightCycler 480II (Roche®)
BioMolecular Systems Bio 4- Channel+HRM
CFX96 (BioRad®) SARS-CoV-2
Mean Concentration
(copies/µl)
% Saptanan Kopya
0.33 100% (20/20) 100% (20/20) 100% (20/20)
