Spermanın Alınması

(1)

Spermanın Alınması

• Çipurada gamet toplamak için 2 yaşlı ortalama 1,2 kg olan erkekler ve 3 yaşlı ortalama 3,5 kg olan dişiler

seçilmektedir.

• Konuldukları tankların sıcaklığı 19˚C±1 olarak ayarlanır ve 125mg/l MS-222 (Sigma) ile anasteziye alındıktan sonra abdominal masaj yapılarak uçsuz enjektöre aspire

edilirler.

• Çipurada spermanın osmolaritesi 363-408 mOsm/kg ve

motilite %75-100 arasıdır.

(2)

Spermanın Alınması

• Levrekte gamet toplamak için 1,5–3,0 kg ağırlığındaki erkekler ve 2-5 kg ağırlığındaki dişiler bir tanka konulur.

• Cinsiyet oranı 2/3 (erkek/dişi) olmak üzere 10kg/m

³

yoğunluğunda konur.

• Tank debisi ise bir saatte tank haciminin %15’i olarak ayarlanır.

• Hergün diledikleri şekilde pelet ve taze balıkla beslenen

levrekler 13-22

^o

C’de ve 8 saat ışık, 16 saat karanlıkta tutulur.

(3)

Spermanın Alınması

• Balıklar elle alınmadan önce 100–120g/m

³

fenoksi etanol ile anestizeye alınır.

• Genital bölge kurulandıktan sonra testis ve kanallara hafif basınç yapılarak şırınga (2ml) ile sperma çekilir.

• Gaita ve idrar karışmamasına dikkat edilir.

• Spermalar kullanılana kadar 4

^o

C’de buz üzerinde

muhafaza edilir.

(4)

!!!

• Spermaya idrar karışması;

• Spermatozoonun

Motilitesini,

Hızını,

Dölleme kapasitesini

Donma kabiliyetini olumsuz etkilemektedir.

• Spermanın idrar veya mukusla karışması osmolaritenin ve

(5)

Yumurtanın sağılması

• Dişiler ise 13

^o

C’deki tanklarda beslenir.

• Dişilerde yumurta alımı için ise LHRHa’nın tek

enjeksiyonda 10 µg/kg dozunda verildikten 72 saat sonra

sağılarak elde edilir

(6)

Suni Tohumlama

• Spermatozoon yoğunluğu ortalama 50 × 10

⁹

spz / ml olan levrek sperması, yaklaşık olarak 100000 yumurtayı

(yaklaşık 100 ml) dölleyebilmektedir.

• Tohumlama için öncelikle 2 ml (ortalama 2000 adet) yumurta 10 ml’lik behere alınır.

• 20 µl taze sperma BSA ile zenginleştirilmiş aktive

etmeyen medyum ile istenilen oranda sulandırılır ve

yavaşca karıştırılır.

(7)

Suni Tohumlama

• Son olarak spermatozoonların aktivasyonu ve

yumurtaların şişmesi için 1 ml %37’lik filtre edilmiş deniz suyu eklenir.

• Spermatozoonların yumurtaları döllemesi için 3 dk beklenir.

• 100 ml cam şişlerde deniz suyu içerisinde erken

embriyonik dönem geçirmesi sağlanır.

(8)