TUNEL Boyama Sonuçları - GEREÇ VE YÖNTEM - N-metil N-nitrözüre ile oluşturulan retinitis pigmen

2. GEREÇ VE YÖNTEM

3.1. TUNEL Boyama Sonuçları

Apoptotik hücrelerin belirlenmesi için yapılan TUNEL boyamanın ışık mikroskopi altında incelenmesi sonucu; diğer gruplar kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, diğer tüm gruplarda TUNEL boyama indeksi istatistiksel olarak anlamlı derecede artmıştı (p<0.05). Sham 1 (PBS 3.gün) ile karşılaştırıldığında TUNEL pozitifliği sham 2 (PBS 7.gün)’de istatistiksel olarak anlamlı derecede artmıştı (p<0.05). Sham 1 (PBS 3.gün) ile karşılaştırıldığında TUNEL pozitifliği Edaravon 3. günde istatistiksel olarak anlamlı derecede azalmıştı (p<0.05). Sham 1 (PBS 3.gün) ile karşılaştırıldığında TUNEL pozitifliği Ellajik asit 3.günde istatistiksel olarak anlamlı derecede azalmıştı (p<0.05). Sham 2 (PBS 7.gün) ile karşılaştırıldığında TUNEL pozitifliği Edaravon 7.günde istatistiksel olarak anlamlı derecede azalmıştı (p<0.05). Sham 2 (PBS 7.gün) ile karşılaştırıldığında TUNEL pozitifliği Ellajik asit 7.günde istatistiksel olarak anlamlı derecede azalmıştı (p<0.05). Edaravon 3.gün ile karşılaştırıldığında TUNEL pozitifliğinde Edaravon 7.günde istatistiksel olarak anlamlı bir fark yoktu (p>0.05). Ellajik asit 3.gün ile karşılaştırıldığında TUNEL pozitifliğinde Ellajik asit 7.günde istatistiksel olarak anlamlı bir fark yoktu (p>0.05). Edaravon 3.gün ile karşılaştırıldığında TUNEL pozitifliğinde Ellajik asit 3.günde istatistiksel olarak anlamlı bir fark yoktu (p>0.05). Edaravon 7.gün ile karşılaştırıldığında TUNEL pozitifliğinde Ellajik asit 7.günde istatistiksel olarak anlamlı bir fark yoktu (p> 0.05).

64 Tablo 2. Apoptotik İndeks (%)

Grup Ort SD ± SD Kontrol 0,57 ± 0,53 Sham 1 (PBS-3.gün) 6,85 ± 0,89a* Sham 2 (PBS-7.gün) 19,57 ± 1,61a*b* Edaravon-3.gün 1,71 ± 0,48a*b* Edaravon-7.gün 2,42 ± 0,78a*c*

Ellajik Asit-3.gün 1,42 ± 0,53a*b*

Ellajik Asit-7.gün 2,42 ± 1,13a*c*

Değerler ortalama ± standart sapma olarak verilmiştir.

a _{Kontrol grubuna göre karşılaştırıldığında,} b

Sham1 (PBS 3.gün)’e göre karşılaştırıldığında,

c _{Sham2 (PBS 7.gün)’e göre karşılaştırıldığında} d _{Edaravon 3.gün’e göre karşılaştırıldığında,} e _{Edaravon 7.gün’e göre karşılaştırıldığında,} f _{Ellajik asit 3.gün’e göre karşılaştırıldığında,}

g _{Ellajik asit 7.gün’e göre karşılaştırıldığında anlamlı farklılığı göstermektedir.}

(*p<0.05)

Şekil 26. Gruplara göre apoptotik indeks yüzdelerinin karşılaştırılması 3.2. Retinal Hematoksilen-Eozin ile Boyanma Sonuçları 3.2.1. Dış Nükleer Tabaka Kalınlık Ölçümleri

Yapılan Hematoksilen – Eozin boyamanın ışık mikroskopi altında incelenmesi sonucu; retina dokusu kontrol grubunda normal görünümdeydi.

Şekil 27. Kontrol grubu Hematoksilen-Eozin boyanması

Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında diğer tüm gruplarda retinal dış nükleer tabaka kalınlığı istatistiksel anlamlı derecede incelmişti (p<0.05).

Şekil 28. Sham 1 Hematoksilen-Eozin boyanması

Sham 1 (PBS 3.gün) ile karşılaştırıldığında sham 2 (PBS 7.gün)’de retinal dış nükleer tabaka istatistiksel olarak anlamlı derecede incelmişti (p<0.05).

Sham 1 (PBS 3.gün) ile karşılaştırıldığında Edaravon 3.günde dış nükleer tabaka istatistiksel olarak anlamlı derecede kalındı (p<0.05). Sham 1 (PBS 3.gün) ile karşılaştırıldığında Ellajik asit 3.günde dış nükleer tabaka kalınlığında artış olmasına rağmen, bu artış istatistiksel olarak anlamlı değildi (p>0.05).

Şekil 29. Ellajik asit 3.gün Hematoksilen-Eozin boyanması

Sham 2 (PBS 7.gün) ile karşılaştırıldığında Edaravon 7.günde dış nükleer tabaka istatistiksel olarak anlamlı dercede kalındı (p<0.05).

Şekil 30. Edaravon 7.gün Hematoksilen-Eozin boyanması

Sham 2 (PBS 7.gün) ile karşılaştırıldığında Ellajik asit 7.günde dış nükleer tabaka kalınlığında artış olmasına rağmen, bu artış istatistiksel olarak anlamlı değildi (p>0.05). Edaravon 3.gün ile karşılaştırıldığında Edaravon 7.günde dış nükleer tabaka kalınlığı istatistiksel olarak anlamlı derecede incelmişti (p<0.05). Ellajik asit 3.gün ile karşılaştırıldığında Ellajik asit 7.günde dış nükleer tabaka kalınlığı istatistiksel olarak anlamlı derecede incelmişti (p<0.05). Edaravon 3.gün ile karşılaştırıldığında Ellajik asit 3.günde dış nükleer tabaka kalınlığı istatistiksel olarak anlamlı derecede incelmişti (p<0.05). Edaravon 7.gün ile karşılaştırıldığında Ellajik asit 7.günde dış nükleer tabaka kalınlığı istatistiksel olarak anlamlı derecede incelmişti (p<0.05).

68 Tablo 3. Dış Nükleer Tabaka Kalınlığı (µm)

Grup Ort SD ± SD Kontrol 48,84 ± 2,08 Sham 1 (PBS-3.gün) 33,66 ± 3,65a* Sham 2 (PBS-7.gün) 24,39 ± 2,88a*b* Edaravon-3.gün 39,81 ± 0.67a* b* Edaravon-7.gün 37.05 ± 0.90 a*c*d*

Ellajik Asit-3.gün 35,22 ± 2.87 a*d*

Ellajik Asit-7.gün 26.13 ± 1,39 a*e*f*

Değerler ortalama ± standart sapma olarak verilmiştir.

a _{Kontrol grubuna göre karşılaştırıldığında,} b

Sham1 (PBS 3.gün)’e göre karşılaştırıldığında,

g _{Ellajik asit 7.gün’e göre karşılaştırıldığında anlamlı farklılığı göstermektedir.}

(*p<0.05)

Şekil 31. Gruplara Göre Dış Nükleer Tabaka Kalınlıklarının Karşılaştırılması 3.2.2. Dış Nükleer Tabaka/ Total Retinal Kalınlık Oranı

Yapılan Hematoksilen – Eozin (H&E) boyamanın ışık mikroskopi altında incelenmesi sonucu; dış nükleer tabaka kalınlığı (DNTK) / total retinal kalınlık(TRK) ölçümleri sonucunda; kontrol grubu ile karşılaştırıldığında tüm gruplarda DNTK/TRK oranı istatistiksel olarak anlamlı derecede düşüktü (p<0.05).

Şekil 32. Dış Nükleer Tabaka/ Total Retinal Kalınlık Ölçümü

Sham 1 (PBS 3.gün) ile karşılaştırıldığında sham 2 (PBS 7.gün)’de DNTK/TRK oranı istatistiksel olarak anlamlı derecede düşüktü (p<0.05). Sham 1 (PBS 3.gün) ile karşılaştırıldığında Edaravon 3.günde DNTK/TRK oranı istatistiksel olarak anlamlı derecede yüksekti (p<0.05). Sham 1 (PBS 3.gün) ile karşılaştırıldığında Ellajik asit 3.günde DNTK/TRK oranında artış olmasına rağmen, bu artış istatistiksel olarak anlamlı değildi (p>0.05). Sham 2 (PBS 7.gün) ile karşılaştırıldığında Edaravon 7.günde DNTK/TRK oranı istatistiksel olarak anlamlı yüksekti (p<0.05). Sham 2 (PBS 7.gün) ile karşılaştırıldığında Ellajik asit 7.günde DNTK/TRK oranında artış olmasına rağmen, bu artış istatistiksel olarak anlamlı değildi (p>0.05). Edaravon 3.gün ile karşılaştırıldığında Edaravon 7.günde DNTK/TRK oranı istatistiksel olarak anlamlı düşüktü (p<0.05). Ellajik asit 3.gün ile karşılaştırıldığında Ellajik asit 7.günde DNTK/TRK oranı istatistiksel olarak anlamlı düşüktü (p<0.05). Edaravon 3.gün ile karşılaştırıldığında Ellajik asit 3.günde DNTK/TRK oranı istatistiksel olarak anlamlı düşüktü (p<0.05). Edaravon 7.gün ile karşılaştırıldığında Ellajik asit 7.günde DNTK/TRK oranı istatistiksel olarak anlamlı düşüktü (p<0.05).

Tablo 4. DNT/Total Retinal Kalınlık Yüzdesi (%)

Grup Ort SD ± SD Kontrol %28,23 ± 1,50 Sham 1 (PBS-3.gün) %21,83 ± 2,19a* Sham 2 (PBS-7.gün) %15,55 ± 1,97a*b* Edaravon-3.gün %24,48 ± 1,06 a*b* Edaravon-7.gün %23,39 ± 3,23 a*c*d*

Ellajik Asit-3.gün %22,01 ± 2,18 a*d*

Ellajik Asit-7.gün %17,43 ± 1,38 a*e*f*

Değerler ortalama ± standart sapma olarak verilmiştir.

a _{Kontrol grubuna göre karşılaştırıldığında,} b

Sham1 (PBS 3.gün)’e göre karşılaştırıldığında,

g _{Ellajik asit 7.gün’e göre karşılaştırıldığında anlamlı farklılığı göstermektedir.}

(*p<0.05)

Şekil 33. Gruplara Göre Dış Nükleer Tabaka/ Total Retinal Kalınlık Oranlarının Karşılaştırılması

Belgede N-metil N-nitrözüre ile oluşturulan retinitis pigmentosa modeline edaravon ve ellajik asit'in antioksidan etkisi / The antioksidant effect of edaravone and ellajic acid on N- methyl-N-nitrosourea induced retinitis pigmentosa model (sayfa 79-86)