Renkli Görmenin Böcekler Arasındaki Durumu ve Evrimi

Apoptose, ou morte celular programada, possui como características a condensação da cromatina, fragmentação do DNA, formação de prolongamentos na membrana celular e retração celular, e pode ser induzida pelas vias intrínseca e extrínseca (GHAVAMI et al., 2009). Dentro da via extrínseca podemos destacar os fatores: Apaf-1, TNFα-R1 e Fas/FasL, os quais participam da indução da apoptose, culminando na ativação da cascata das caspases (GRIVICICH et al., 2007)

Muitos vírus que infectam mamíferos quando estimulados podem ser associados com apoptose celular, de forma a induzir ou suprimir este evento. Os vírus possuem vários mecanismos bioquímicos e genéticos responsável pela invasão e/ou indução da modulação da apoptose através de várias proteínas virais (GRIFFIN et al., 2010).

Na família Herpesvirus, a modulação da apoptose parece ser uma etapa chave para sua patogênese (GRIFFIN et al., 2010). Como exemplo, o

Herpesvirus Anatide tipo 1 (AHV-1) induz a apoptose em células fibroblásticas

embrionárias de pato e também o Herpesvirus simples tipo 2 (HSV-2) ativa a apoptose de células T (GUO et al., 2009). E apesar de muitos estudos sobre a subfamília Alphaherpesvirinae e sua atividade anti e pró-apoptótica, a associação destes com o BoHV-5 é completamente desconhecida (DUFOUR et al., 2011).

Com isso, a análise dos resultados deste estudo demonstra que a infecção por BoHV-5 é capaz de ativar a cascata da apoptose pela via extrínseca (ativação da caspase-8 e -9) através de receptores de morte celular como TNFα-R1 e Fas/FasL e, posteriormente, a via intrínseca pela liberação do citocromo c.

Muitos vírus são capazes de rapidamente ativar a morte celular via receptores de via extrínseca (STLOUIS et al., 2007). No caso do BoHV-5, a indução da apoptose envolveu o aumento da expressão de todos os fatores relativos a via extrínseca, como observamos na Figura 5A, quando comparada aos valores expressos na Figura 5B.

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A expressão de Fas/FasL aumentou principalmente após a adsorção viral (24 hpi), sendo que após este período houve uma queda dos valores. Com relação ao TNFα-R1, após a adsorção viral houve também um aumento gradativo e expressivo, que se manteve até às 48 hpi, como podemos observar na Figura 5, mostrando o aumento na expressão do mRNA no grupo infectado comparado ao não infectado.

A ativação da apoptose via Fas/FasL e TNFα-R1 também demonstrou que houve ativação da via intrínseca, constatada pelo aumento na expressão do citocromo c e do Apaf-1 após 48 hpi. (Figura 5A). Assim, após liberado no citosol, o citocromo c auxilia o Apaf-1 a recrutar e ativar a pró-caspase-9. Estes achados confirmam o resultados observados por De Martino et al. (2010) de que na maioria dos casos de apoptose induzida por vírus, ocorre uma sinalização cruzada entre a via extrínseca e intrínseca da apoptose.

Em estudo similar desenvolvido por Xu et al. (2012) com BoHV-1 também foi possível observar a atividade apoptótica do vírus, ou seja, tanto o BoHV-1 quanto o BoHV-5 deflagram a apoptose via receptores de morte celular e mitocondrial em células MDBK.

A apoptose pode ser induzida pela replicação viral, como descrita por Xu et al. (2005) para o BoHV-1, onde a penetração do vírus em células MDBK desencadeou o processo de morte celular, mas não ativou o mecanismo intrínseco de reconhecimento celular. No presente estudo, observamos que a apoptose ocorreu devido à replicação viral, como podemos observar na Figura 6, onde houve um aumento progressivo no título viral (72 hpi, Figura 6B) condizendo com a formação sincicial (Figura 6A), a qual evidenciou o efeito citopático provocado pela replicação viral, em consequência da ativação da apoptose.

Apesar da atividade apoptótica, outros estudos demonstram que o BoHV-5 é capaz de manipular fatores anti e pró-apoptóticos, demonstrando que a viabilidade celular prolongada pode ser benéfica ao vírus.

Garcia et al. (2013), observou que nos primeiros estágios de replicação do BoHV-5 em células mesenquimais bovinas (24-48 hpi), houve um aumento

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da expressão de Bcl-2, coincidente com o aumento do título viral. O Bcl-2, localizado na membrana nuclear, retículo endoplasmático e na membrana externa da mitocôndria, juntamente com Bax, presente na membrana mitocondrial, são proteínas repressoras e indutoras da apoptose, respectivamente, e sua expressão está relacionada à infecção viral (OHTA e NISHIYAMA, 2011).

Baseados no fato de mais de 130 espécies de Herpesvirus terem sido identificados e categorizados, possuindo um amplo espectro de hospedeiros, a ativação e controle de alguns mediadores anti e pró-apoptóticos que permitam a sobrevivência celular parecer ser crucial para a replicação viral (GRIFFIN et al., 2010).

Sendo assim, embora haja muitos estudos sobre as vias apoptóticas ativadas durante a replicação viral, os mecanismos moleculares de ação e ativação destas vias pelo BoHV-5 ainda não são completamente compreendidos, fazendo-se necessário mais estudos sobre o tema, a fim de elucidar os mecanismos envolvidos e sua relação com a infecção viral.

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