Koordinasyon, sorumlu ve ilgili kurumlar

As hibridizações com as sondas de tecidos utilizadas neste trabalho sugeriram nove transcritos com perfil de expressão tecido-específico, ou seja, com sinal de hibridização detectado em um único tecido (Tabela 10). A função biológica predita foi utilizada para confirmar este padrão de expressão, mas outros métodos de quantificação precisariam ser empregados para descartar a hipótese de serem falso-positivos. Na verdade, os transcritos de pouca abundância e estes tecido-específicos muito provavelmente não estão representados nos microarranjos ou, caso estejam, devem estar diluídos abaixo do limite do potencial de detecção do microarranjo. Também existe a possibilidade de terem ocorrido perdas do material genético preso às membranas, após as sucessivas lavagens que permitiram a reutilização do arranjo. Ainda assim, os nove transcritos tecido-específicos foram investigados, porque foram detectados como abundantes em apenas um dos tecidos e estes resultados podem ser indicativos de suas respectivas funções biológicas. A ausência de sinal nos outros quatro tecidos pode estar representando um nível de expressão abaixo do detectável ou a perda do DNA pela reutilização. Tabela 10 - Transcritos tecido-específicos identificados nos microarranjos, números LOC

identificadores no NCBI e função biológica correspondente

Tecido Clone LOC BlastN contra o genoma do frango

ME* GGEZLB1020G11 LOC418353 Similar a nNOS-DHHC zinc finger23 GGEZEB1017B08 LOC395214 Molécula orientadora de axônio, RGM-A GGEZSM1031G08 Similar a ORF 25 do cromossomo 2

CB* GGEZLB1024D02 - -

GGEZLB1015B02 LOC415947 Similar a proteína 5 de ligação a RNA GGEZSM1006G04 LOC423861 Similar a proteína hipotética

CR* GGEZEM1003A08 Gga.15014 -

PL* GGEZSM1029H08 LOC422149 Receptor 23 acoplado a proteína G FG* GGEZLB1015B06 LOC419658 Similar ao domínio BSD * ME – Musculatura esquelética, CR – coração, CB – cérebro, PL – pele e FG – fígado.

Foram identificados três transcritos com padrão músculo-esquelético-específicos. O transcrito nNOS-DHHC zinc finger23 foi associado ao direcionamento da sintetase de óxido nítrico para os locais apropriados nos neurônios (nNOS), mediada por interações com os domínios PDZ-LIM (SAITOH et al., 2004). A molécula orientadora de axônio (RGM-A), também sugerida como músculo-esquelético-específica, foi identificada com funções na orientação da formação das projeções de neurônios em crescimento (MONNIER et al., 2004). O terceiro transcrito músculo-específico ainda não foi caracterizado. Embora sejam transcritos aparentemente representantes do tecido nervoso, estes níveis de expressão quantificados e os padrões de expressão obtidos por hibridização in situ vêm sugerindo possíveis papéis para DHHC

zinc finger e RGM-A também no sistema muscular. Em zebrafish, o domínio DHHC zinc finger

foi identificado em um fator de transcrição denominado zisp, com padrão de expressão similar a MyoD nos somitos de embriões em desenvolvimento (NAGAYA et al., 2002). Sendo MyoD um fator de transcrição determinante de fenótipo muscular, este padrão de expressão contribuiu para sugerir uma função biológica para este domínio nesse sistema. A família dos orientadores de axônio RGM é composta por três membros (RGM-A, RGM-B e RGM-C), todos também detectados nos somitos de camundongos (SCHMIDTMER; ENGELKAMP, 2004). Portanto, estes transcritos foram identificados com padrão de expressão nas estruturas embrionárias responsáveis pela formação da musculatura esquelética dos organismos e também quantificados como altamente expressos na musculatura esquelética de aves com 21 dias de idade por este trabalho. Estes resultados sugeriram um papel biológico para estes transcritos durante o desenvolvimento muscular. A função fisiológica do sistema muscular é dependente dos sinais provenientes do sistema nervoso, não apenas para promover a contração muscular, mas também para determinar o tipo de fibra (de contração rápida ou lenta) a ser formada (ZHANG; McLEMANN, 1998; NIKOVITS et al., 2001; BUCKINGHAM et al., 2003). Outros papéis para a conexão entre os sistemas nervoso e muscular devem ainda ser investigados. Este trabalho selecionou o candidato músculo esquelético-específico RGM-A para ser funcionalmente investigado no sistema muscular em embriões de frango por ensaios de hibridização in situ e super-expressão. Os resultados obtidos serão apresentados a seguir nesta tese (item 4.6).

Também foram identificados três transcritos “cérebro-específicos”. Um deles foi a proteína 5 de ligação ao RNA, que é uma proteína associada à supressão tumoral, atuando como reguladora negativa do progresso do ciclo celular (RINTALA-MAKI; SUTHERLAND, 2004). A

outra foi uma proteína hipotética ainda não caracterizada, mas que apresentou em sua estrutura um domínio conhecido como MelB, presente nos transportadores do íon Na+ e de carboidratos. A terceira proteína “cérebro-específica” também não foi caracteriza. A função biológica da proteína de ligação ao RNA e o domínio MelB parecem ser coerentes com a fisiologia do sistema nervoso, mas nenhuma especificidade havia sido descrita até o momento.

O transcrito identificado como “coração-específico” foi similar a um consenso do

Unigene do NCBI (Gga.15014), ainda não caracterizado. O receptor 23 acoplado a proteína G

(LOC422149) foi identificado como “pele-específico”. Estes receptores são da família de purinoreceptores P2Y, que foram identificados como expressos em diversos tipos celulares, atuando como receptores para os fatores 2, 4 e 7 de diferenciação do endotélio dos vasos sangüíneos (Edg-2, 4 e 7) (NOGUCHI; ISHII, SHIMIZU, 2003). Por fim, foi identificado como “fígado-específico” um transcrito hipotético, apresentando em sua estrutura um domínio BSD, de função desconhecida. Para estes três casos, a função biológica não contribuiu para determinar a coerência dos resultados dos microarranjos. Todos os nove transcritos identificados como tecido- específicos são candidatos sugeridos por este estudo para serem funcionalmente caracterizados em outros sistemas.

4.5.4 Validação da indicação dos transcritos diferencialmente expressos entre os tecidos de