Histeroskopide Enstrümantasyon

A determinação de resíduos de pesticidas em amostras alimentares é bastante laboriosa, pois o nível de concentração destes analitos, geralmente, estão à níveis traços, devendo as amostras serem submetidas a etapas de extração e/ou pré-concentração dos analitos nas matrizes a serem estudadas (STOCKA; BIZIUK; NAMIESNIK, 2016; PRESTES et al, 2009), uma vez que a matriz somente pode ser submetida à análise no equipamento, após a limpeza e isolamento dos analitos para que os resultados gerados sejam confiáveis, minimizando assim os possíveis erros (NASCIMENTO et al, 2016; JARDIM, 2010).

Normalmente, este tipo de análise em matrizes alimentares é complexo devido à presença de constituintes e de suas características na própria amostra, o que dificulta a quantificação destes analitos. Neste contexto, muitas técnicas de preparo de amostra foram desenvolvidas, em grande parte, utilizando solventes orgânicos para a extração, gerando longo tempo no processo ou empregando instrumentos para a automação (PRESTES; ADAIME, ZANELLA, 2011).

Um método ideal de preparo de amostra deve apresentar pequeno número de etapas, ser de fácil operação, ter um custo relativamente baixo e dispender o mínimo de tempo possível na sua realização. Ademais, utilizar pequenas quantidades de solventes, com baixa toxicidade, alta sensibilidade e possibilitar altos valores de recuperação dos analitos (SKOOG et al, 2013; PRESTES; ADAIME, ZANELLA, 2011).

Muitas técnicas de preparo de amostra foram desenvolvidas, nos últimos anos, dentre elas, o método QuEChERS, proposto por Anastassiades et al, em 2003. Este método vem sendo empregado na determinação de pesticidas em matrizes alimentares, pois seu desenvolvimento buscou suprir as limitações de métodos multirresíduos já existentes.

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2.5.1 Método QuEChERS

O método QuEChERS, nome formado pelas iniciais dos seguintes termos em inglês, (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe), é um método de preparo de amostra vantajoso por ser considerado: rápido, fácil, econômico, efetivo, robusto e seguro (PRESTES; et al, 2009).

Este método envolve três etapas: extração, partição e limpeza (clean-up). Na etapa de extração utiliza-se como solvente extrator a acetonitrila (MeCN). Na etapa de partição utiliza-se uma mistura dos sais, sulfato de magnésio anidro (MgSO4) e cloreto de sódio

(NaCl). E por fim a etapa da limpeza, o clean-up, considerada a mais importante, pois confere ao analito o isolamento dele da matriz (ANASTASSIADES et al, 2003; PRESTES et al, 2009).

Com o método QuEChERS, foi também introduzido outro método de clean-up, o D-SPE (Dispersive Solid Phase Extraction) ou extração em fase sólida dispersiva (EFSD), a qual dispensa o uso de cartuchos e utiliza um sorvente combinado com o (MgSO4) anidro

(ANASTASSIADES et al, 2003; PRESTES et al, 2009).

Primeiramente, antes da aplicação do método de preparo da amostra, amostras sólidas, como alimentos, necessitam de uma pré-etapa que possibilite a homogeneização deste alimento, para uma melhor representatividade da amostra (SKOOG et al, 2013).

O método QuEChERS utiliza apenas 10 g da amostra, o que conforme a literatura torna-o ideal quando comparado com outros métodos que utilizam de 15g a 100g. Segundo este método, 10g é uma quantidade representativa para a realização da análise (ANASTASSIADES et al, 2003).

2.5.1.1 Etapa de extração

Na etapa de extração a acetonitrila (MeCN) foi o escolhida como solvente extrator, por proporcionar a extração de uma faixa grande de pesticidas com polaridades diferentes, além de ser compatível com o uso das técnicas cromatográficas e extrair menores quantidades de coextrativos com características lipofílicas (ANASTASSIADES et al, 2003; PRESTES et al, 2009).

Neste método são utilizados 10 mL de MeCN para os 10 g da amostra, isto indica que a extração ocorre numa proporção de 1:1 (1mL de MeCN para 1g de amostra). Mesmo sendo consideradas pequenas quantidades, para as técnicas cromatográficas aplicadas e os agrotóxicos analisados, em sua maioria, atualmente, tais quantidades são apropriadas (PRESTES et al, 2009).

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2.5.1.2 Etapa de partição

Para a segunda etapa, conforme o método original, são utilizados a adição de sais, como o (MgSO4) anidro, e cloreto de sódio (NaCl), que promovem o efeito salting out, isto é,

promovem a liberação dos analitos polares para a fase orgânica, além de diminuírem a quantidade de água no meio (ANASTASSIADES et al, 2003; PRESTES et al, 2009).

O MgSO4 anidro sofre hidratação através de uma reação exotérmica, o que

promove a redução na quantidade de água no meio. Este sal também, quando comparado com outros já utilizados em outros métodos, remove grandes quantidades de água (ANASTASSIADES et al, 2003). O NaCl possibilita a liberação de analitos apolares por ligar-se mais efetivamente com a água, no meio, disponibilizando assim estes analitos para a fase orgânica.

2.5.1.3 Etapa de limpeza

Por fim a etapa da limpeza, o clean-up, considerada a mais importante, confere ao analito o isolamento dele da matriz, o sorvente utilizado é a amina primária secundária ou (PSA- Primary Secundary Amine) para a remoção de interferentes na amostra. O uso de PSA remove interferentes através do seu efeito quelantes pela presença dos grupos amino. Por conta disso, remove açucares, ácidos graxos e outros compostos polares, possíveis interferentes na amostra. No entanto, não é considerado eficiente na remoção de gorduras (CABRERA et al, 2012).

O uso do MgSO4 anidro promove a remoção de água residual, enquanto a limpeza

dos analitos é realizada (CABRERA et al, 2012). Este método de limpeza buscou obter um extrato da matriz com o mínimo de interferentes. Por fim, o extrato final pode ser analisado (ANASTASSÍADES et al, 2003; PRESTES et al, 2009).

Algumas alterações para o método QuEChERS original foram propostas na literatura, baseadas especialmente nas propriedades de alguns pesticidas, devido alguns destes analitos apresentaram baixa recuperação ou mostraram-se instáveis em determinadas faixas de pH da própria matriz. Baseando-se nisto algumas modificações foram aplicadas a este método conforme Anastassíades et al (2003) e González-Curbelo et al (2015).

De acordo com González et al, (2015), três grandes modificações foram realizadas: a primeira utilizando um tampão de citrato e acetato, originando assim o método QuEChERS citrato e o método QuEChERS acetato, respectivamente. Estes tampões forneceram um pH em torno de 5 para estas modificações do QuEChERS (LEHOTAY;

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MASTOVSKA; LIGHTFIELD, 2005). A segunda foi na D-SPE, nas quantidades do PSA e na utilização de octadecilsilano (C18) para promover uma melhor limpeza do extrato da matriz (ANASTASSÍADES et al, 2007; LEHOTAY et al, 2010). O uso de C18 promove uma maior limpeza em matrizes que contêm lipídios (GONZÁLEZ-CURBELO et al, 2015; LEHOTAY et al, 2010).

A terceira modificação seria no uso do carbono grafitizado (GCB), ele adsorve compostos planares, como pigmentos de vegetais, que provocariam um desgaste do sistema cromatográfico ao longo das análises (GONZÁLEZ-CURBELO et al, 2015). Esta adsorção ocorre, possivelmente, por interações na superfície do GCB, que apresenta grande área planar. Interações estas do tipo pi-stacking que ocorrem entre compostos aromáticos ou compostos que tenham ligações do tipo π, isto pode explicar a forte interação por compostos planares (MARTINEZ; IVERSON, 2012). Além disto, a retenção de pigmentos pelo uso do GCB pode ocorrer pela presença de resíduos de grupos polares que promoveriam ligações de hidrogênio (CABRERA et al, 2016). Este vem sendo o grande problema do uso do GCB na análise de pesticidas em alimentos, pois provoca uma baixa recuperação em pesticidas com estruturas planares (LEHOTAY et al, 2010; MARTINEZ; IVERSON, 2012).