5. SÖZLEŞMENİN YÜRÜTÜLMESİ
5.17. HİZMETİN DURDURULMASI
1. Qual a proporção das diferentes espécies do complexo C. parapsilosis em animais saudáveis?
2. Qual o perfil de sensibilidade antifúngica desses isolados?
3. Estas leveduras apresentam diferenças na produção de atributos de virulência in vitro?
4. HIPÓTESES
1. C. parapsilosis stricto sensu corresponde a espécie mais frequente do Complexo Candida parapsilosis em animais saudáveis;
2. Os organismos do Complexo Candida parapsilosis isolados da microbiota de animais saudáveis apresentam diferentes perfis de sensibilidade a drogas antifúngicas;
3. Os organismos do Complexo Candida parapsilosis isolados da microbiota de animais apresentam variação quanto à produção de atributos de virulência in vitro.
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5. OBJETIVOS
5.1 Objetivo Geral
O objetivo deste trabalho foi realizar a identificação molecular de cepas do complexo C. parapsilosis isoladas de fontes veterinárias e mantidas em nossa micoteca, com posterior análise do perfil de sensibilidade a antifúngicos e de seus atributos de virulência in vitro.
5.2 Objetivos específicos
1- Confirmar a identificação fenotípica de isolados do complexo C. parapsilosis de origem animal mantidos em banco de culturas fúngicas;
2- Realizar a identificação molecular dos isolados do complexo C. parapsilosis por meio da análise de restrição do gene SADH;
3- Determinar o perfil de sensibilidade dos isolados in vitro;
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6. CAPÍTULO 1
Complexo Candida parapsilosis e sua sensibilidade antifúngica e atributos de virulência
Candida parapsilosis complex from animals and its antifungal susceptibility and virulence attributes
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Candida parapsilosis complex from animals and its antifungal susceptibility and virulence attributes
Raimunda Sâmia Nogueira Brilhanteª, Terezinha de Jesus Santos Rodriguesª, André Jalles
Monteiroc, Débora de Souza Collares Maia Castelo-Brancoª, Carlos Eduardo Cordeiro
Teixeiraª, Ramila de Brito Macedoª, Silviane Praciano Bandeiraª, Rossana de Aguiar
Cordeiroª, Tereza de Jesus Pinheiro Gomes Bandeiraa,d, José Júlio Costa Sidrimª, Marcos
Fábio Gadelha Rochaa,b
a Department of Pathology and Legal Medicine, College of Medicine, Postgraduate Program
in Medical Microbiology, Specialized Medical Mycology Center, Federal University of
Ceará, Fortaleza, Ceará, Brazil.
b College of Veterinary Medicine, Postgraduate Program in Veterinary Sciences, State
University of Ceará, Fortaleza, Ceará, Brazil.
c Department of Statistics and Applied Mathematics, Federal University of Ceará, Fortaleza,
Ceará, Brazil.
d School of Medicine, Christus College - UNICHRISTUS, Fortaleza, Ceará, Brazil
CorrespondingAuthor: R.S.N. Brilhante. Rua Barão de Canindé, 210; Montese. CEP: 60.425-
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Abstract
Yeasts of the Candida parapsilosis complex have been identified as agents of
infections and as components of the microbiota of animals. The objectives of this study were
to perform the molecular identification of strains of the C. parapsilosis complex isolated from
veterinary sources and to assess their in vitro antifungal susceptibility and virulence attributes.
We used 28 isolates of C. parapsilosis (lato sensu) recovered from dogs, psittacines, raptors
and prawns and maintained in our fungal collection. Initially, the strains were phenotypically
characterized, based on the analysis of their morphological and biochemical features, which
confirmed their identity as C. parapsilosis (lato sensu). The molecular identification of the
species was performed by PCR-REA. Then, the susceptibility of the strains to amphotericin
B, itraconazole, fluconazole, voriconazole and caspofungin was assessed through broth
microdilution, according to CLSI (M27-A3). Additionally, the ability of the strains to produce
phospholipases, proteases and biofilm was analyzed. Genotypical analysis showed thirteen C.
parapsilosis (stricto sensu), ten C. orthopsilosis and five C. metapsilosis strains. In vitro
resistance to fluconazole was observed in three strains of C. parapsilosis (stricto sensu) and
two of C. metapsilosis, while high caspofungin MICs (2 μg/mL) were observed in one strain of C. pa rapsilosis (stricto sensu) and five C. orthopsilosis. Additionally, 23/28 isolates
presented protease production, while none were able to produce phospholipases. All tested
strains were able to form biofilms, out of which twenty were moderate producers, seven were
strong producers and one was a weak producer. Our data indicate that the antifungal
susceptibility and the virulence traits vary among the species of the C. parapsilosis complex.
Keywords: Candida parapsilosis. Animals. Molecular identification. Antifungals. Virulence.
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7. CONCLUSÕES
1. As cepas previamente identificadas como pertencentes ao complexo Candida parapsilosis, isoladas de fontes veterinárias e mantidas na micoteca do Centro Especializado em Micologia Médica tiveram sua identificação original confirmada, por análises morfológica e bioquímica
2. A análise de restrição do gene SADH se mostrou eficaz para distinguir as três espécies pertencentes ao complexo C. parapsilosis e revelou que das 28 cepas analisadas, 13 eram C. parapsilosis stricto sensu, 10 C. orthopsilosis e cinco C. metapsilosis. C. pa rapsilosis stricto sensu foi a espécie predominante entre as cepas oriundas de cães, enquanto que C. orthopsilosis foi predominante entre aquelas isoladas de psitacídeos.
3. A avaliação da sensibilidade antifúngica in vitro detectou resistência a fluconazol em cepas de C. parapsilosis stricto sensu e C. metapsilosis. Ademais, foram observadas concentrações inibitórias mínimas elevadas para caspofungina, especialmente em C. orthopsilosis.
4. Nenhuma cepa do complexo C. parapsilosis secretou fosfolipases, mas 82,1% apresentaram atividade proteolítica e todas as cepas foram capazes de formar biofilme.
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8. PERSPECTIVAS
Com o avanço das técnicas moleculares e a consequente detecção de diferenças genéticas entre microrganismos fenotipicamente indistinguíveis, novas espécies fúngicas tem sido propostas. No entanto, ainda não se sabe ao certo a relevância clínico-epidemiológica dessas distinções de espécies. Nesse contexto, a presente pesquisa visou buscar diferenças fenotípicas entre as espécies do complexo Ca ndida parapsilosis, com destaque para a sensibilidade antifúngica e para a produção de atributos de virulência in vitro. Dentre as cepas avaliadas, observaram-se algumas diferenças entre as espécies do complexo quanto à colonização de diferentes classes animais, ao perfil de sensibilidade antifúngica e à produção de proteases. Portanto, torna-se necessário realizar mais estudos nessa área, visando à inclusão de um maior número de cepas de origem veterinária e à realização de estudos in vivo para averiguar se essas diferenças in vitro estão associadas às diferenças na patogenicidade e na resposta terapêutica entre as três espécies do complexo C. parapsilosis.
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