MATERYAL VE METOD
FERROLAKTAT' IN ÇEŞİTLİ DOZLARININ 72 ± 4 SAATLİK UYGULAMALAR
DİSTİLE SU 1 mM EMS 0.005 FERROLAKTAT 0.015 FERROLAKTAT 0.025 FERROLAKTAT mwh/flr3
93
Şekil 4.2. Ferrolaktat, Distile su ve EMS uygulamalarının Drosophila melanogaster ergin bireylerinin kanatlarında meydana getirdiği sınıflandırılmış klonların karşılaştırılması
94
Şekil 4.3 Ferrolaktat, Distile su ve EMS uygulamalarının Drosophila melanogaster ergin bireylerinin kanatlarında meydana getirdiği toplam klon sayıları ve toplam frekans sayılarının karşılaştırılması
95
4.2. 72 ± 4 Saatlik Oregon R+ Genetik Soyundan Larvalara Ferrolaktat’ ın Derişimleri, Distile Su ve Etil Metan Sülfonat’ ın (EMS) 24 Saatlik Uygulanması ve Drosophila Comet Yöntemi İle Elde Edilen Sonuçlar
72 ± 4 saatlik Drosophila melanogaster’ in Oregon R+ genetik soyundan larvalara, ferrolaktat’ ın çeşitli konsantrasyonlarını (0.005, 0.015, 0.025 (g/ml)) içeren besiyerlere 24 saat maruz bırakılması ve 96±4 saatlik larvaların hemositlerinin izole edilerek uygulanan kimyasalın genotoksik etkisinin ve tek iplik DNA hasarının tespit edilmesi amaçlanmış, uygulama sonucunda elde edilen sonuçlar Tablo 4.2 ’de gösterilmiştir.
Ferrolaktat’ ın genotoksik etkisi ve tek iplik DNA hasarına neden olup olmadığı konusunda yapılan inceleme esnasında: 72±4 saatlik larvaların 24 saat süreyle ferrolaktat’ın üç konsantrasyonu (0.005, 0.015, 0.025 (g/ml)), pozitif kontrol grubu ve negatif kontrol grubunu içeren besiyerlere maruz bırakıldıktan sonra her bir uygulama grubu için ayrı ayrı olmak üzere Oregon R+ genetik soyundan 96 ± 4 saatlik larvalardan yaklaşık 40’ ar tanesinin larva hemositi izole edilmiş, uygulanan kimyasalların genotoksik etkisinin ve tek iplik DNA hasarının tespit edilmesinde comet assay test sistemi uygulanmış, Değerlendirme parametresi olarak negatif kontrol grubuna ait Distile suya ait çalışmadan elde edilen kuyruk yoğunluğu (%), kuyruk momenti (µm) ve kuyruk uzunluğu (µm) verilerinin istatiksel olarak karşılaştırılması ve değerlendirilmesiyle yapılmıştır.
Yapılan tüm uygulama sonucunda elde edilen veriler test sistemlerinin bulunduğu sonuçların otomatik olarak hesaplandığı SPSS paket programı (versiyon 15.0) kullanılmıştır. Comet Assay testi ile yapılan tüm uygulamalara ait Kolmogrov-Simirnov (K-S) testi sonucunda Z değeri P > 0.05 olarak elde edildiğinden ve sonuçların normal dağımım gösterdiği anlaşıldığından, uygulamalarda elde edilen veriler parametrik bir test sistemi olan Paired-Samples t-testi ile değerlendirmeye tabi tutulmuş, İstatistiksel olarak önem düzeyi % 5 olarak ele alınmıştır. Elde edilen sonuçlar Tablo 4.2 ’de gösterilmiştir.
96
72±4 saatlik Drosophila melanogasterin Oregon R+ genetik soyundan larvaların, ferrolaktat’ ın 0.005 (g/ml) içeren besiyerlere 24 saat maruz bırakılması ve 96±4 saatlik larvaların hemositlerinin izole edilerek comet assay test sistemi ile DNA hasarının ve genotoksik etkinin tespit edilmesi amacıyla yapılan karşılaştırma sonucunda; elde edilen veriler ile negatif kontrol grubuna ait uygulama sonucunda elde edilen verilerin karşılaştırılmasında, ferrolaktat’ ın 0.005 (g/ml)’ lik derişiminin distile su uygulmasına göre kuyruk yoğunluğu (%), kuyruk momenti (µm) ve kuyruk uzunluğu (µm) ortalamaları arasında Paired Samples T Testine göre (P>0,05 den büyük bir değer çıktığı tespit edildiğinden) istatistiksel anlamda bir fark olmadığı tespit edilmiştir (Tablo 4.2.).
72±4 saatlik Drosophila melanogaster’ in Oregon R+ genetik soyundan larvaların, ferrolaktat kimyasalının 0.015 (g/ml) içeren besiyerlere 24 saat maruz bırakılması ve 96±4 saatlik larvaların hemositlerinin izole edilerek comet assay test sistemi ile DNA hasarının ve genotoksik etkinin tespit edilmesi amacıyla yapılan karşılaştırma sonucunda; ferrolaktat’ ın 0.015 (g/ml)’ lik derişiminin; distile su ve ferrolaktat’ ın 0.005 (g/ml)’ lik derişimi uygulamasına göre kuyruk yoğunluğu (%), kuyruk momenti (µm) ve kuyruk uzunluğu (µm) ortalamalarında belirgin bir artış gösterdiği ancak, ferrolaktat’ ın 0.015 (g/ml)’ lik derişiminden elde edilen veriler ile negatif kontrol grubuna (distile su) ait uygulama sonucunda elde edilen verilerin Paired Samples T Testi karşılaştırmasına göre (P>0,05 den büyük bir değer çıktığı tespit edildiğinden) aralarında istatistiksel anlamda bir fark olmadığı tespit edilmiştir (Tablo 4.2.).
72±4 saatlik Drosophila melanogaster’ in Oregon R+ genetik soyundan larvaların, ferrolaktat’ ın 0.025 (g/ml) içeren besiyerlere 24 saat maruz bırakılması ve 96±4 saatlik larvaların hemositlerinin izole edilerek comet assay test sistemi ile DNA hasarının ve genotoksik etkinin tespit edilmesi amacıyla yapılan karşılaştırma sonucunda; ferrolaktat’ ın 0.025 (g/ml)’ lik derişiminin; distile su ile ferrolaktat’ ın 0.005 (g/ml) ve 0.015 (g/ml)’ lik derişimi uygulamasına göre kuyruk yoğunluğu (%), kuyruk momenti (µm) ve kuyruk uzunluğu (µm) ortalamalarında belirgin bir artış gösterdiği, ferrolaktat’ ın 0.025 (g/ml)’ lik derişiminden elde edilen veriler ile negatif kontrol grubuna (distile su) ait uygulama sonucunda elde edilen verilerin Paired Samples T Testi karşılaştırmasına göre (P<0,05 den büyük bir değer çıktığı tespit edildiğinden) aralarında istatistiksel açıdan anlamlı bir fark olduğu tespit ediliştir (Tablo 4.2.).
97
Ferrolaktat’ ın 0.025 (g/ml) derişimi ile kontrol grubuna ait kuyruk yoğunluğu (%), kuyruk momenti (µm) ve kuyruk uzunluğu (µm) ortalamalarına ait sonuçları DNA hasarının ve genotoksik etkinin tespit edilmesi amacıyla yapılan karşılaştırma sonucunda ferrolaktat’ ın 0.005 (g/ml)’ lik ve 0.015 (g/ml)’ lik derişimlerine göre kuyruk yoğunluğu (%), kuyruk momenti (µm) ve kuyruk uzunluğu (µm) ortalamalarında bir artış gözlendiği ve doz artışına bağlı olarak DNA hasarında artış gözlendiği, genotoksik etkinin arttığı, Paired Samples T Testine göre P<0,05 gibi bir değer çıktığı tespit edildiğinden ferrolaktat’ ın 0.025 (g/ml) derişiminin kontrol grubu ile aralarında istatistiksel açıdan anlamlı bir fark olduğu, DNA hasarının artış gösterdiği tespit ediliştir.
Ferrolaktat’ ın tüm derişimlerine ait sonuçlar incelendiğinde, ferrolaktatın doz artışına bağlı olarak DNA hasarında artışa neden olduğu ve 0.025 (g/ml) derişim uygulamasında anlamlı sonuçlar elde edildiği, bu sebeple genotoksik risk oluşturabileceği tespit edilmiştir. SPSS programı yardımıyla Paired Samples T Testi sonuçlarına göre 0.025 (g/ml)’ lik konsantrasyonun kontrol grubu ile karşılaştırıldığında genotoksik etkinin önemli ölçüde arttığı tespit edilmiştir.
98
Tablo 4.2 . Ferrolaktat ,Distile su ve EMS uygulamalarının Drosophila melanogaster Comet Assay yöntemi ile kuyruk uzunluğu, kuyruk yoğunluğu, kuyruk momenti ortalamalarına ait istatistiki veriler
Distile suya göre P < 0.05 düzeyinde anlamlı (Paired-Samples T Testi), Aritmetik Ortalama ± standart hata
Konsantrasyon Kuyruk Yoğunluğu (%) Kuyruk Momenti (µm) Kuyruk Uzunluğu (µm) Negatif Kontrol Distile Su 1.17 ± 0.49 0.16 ± 0.07 22.76 ± 0.93 Pozitif Kontrol 4 mM EMS (EMS: Etil Metan Sülfonat)
4.66 ± 1.49* ( P ₌ 0.033 ) 0.77 ± 0.35 ( P ₌ 0.092) 29.30 ± 1.01* ( P ₌ 0.000 )
Ferrola
kt
at
(
E
5
85)
0.005 1.70 ± 0.83 ( P ₌ 0.589 ) 0.39 ± 0.27 ( P ₌ 0.0398 ) 21.60 ± 1.45 ( P ₌ 0.506 ) 0.015 5.85 ± 2.33 ( P ₌ 0.054 ) 1.07 ± 0.52 ( P ₌ 0.087 ) 24.00 ± 1.37 ( P ₌ 0.445 ) 0.025 6.35 ± 1.79* ( P ₌ 0.005 ) 1.25 ± 0.57 ( P ₌ 0.063 ) 26.86 ± 1.54* ( P ₌ 0.037 )99
Şekil 4.4 Ferrolaktat, Distile su ve EMS uygulamalarının Drosophila melanogaster Hemositlerinde Comet Assay yöntemi kuyruk yoğunluğu ortalamalarına ait verilerinin karşılaştırılması
100
Şekil 4.5. Ferrolaktat, Distile su ve EMS uygulamalarının Drosophila melanogaster Hemositlerinde Comet Assay yöntemi ile kuyruk momenti ortalamalarına ait verilerinin karşılaştırılması
101
Şekil 4.6. Ferrolaktat, Distile su ve EMS uygulamalarının Drosophila melanogaster Hemositlerinde Comet Assay yöntemi ile kuyruk uzunluğu ortalamalarına ait verilerinin karşılaştırılması
102
Şekil 4.7. Ferrolaktat, Distile su ve EMS uygulamalarının Drosophila melanogaster Hemositlerinde Comet Assay yöntemi ile kuyruk momenti, kuyruk uzunluğu, kuyruk yoğunluğu ortalamalarına ait verilerinin karşılaştırılması
103