Dikey Sıçrama Testi:

Foram realizadas determinações de Magnésio iônico(Mgi), Cálcio iônico(Cai), Uréia(U), pH, Magnésio Total(MgT), Fósforo(P) e Creatinina(Cr), em sangue de cordão umbilical, no 3o _{e no 7}o _{dias de vida, no Laboratório do} Instituto da Criança, Hospital das Clínicas, FMUSP.

O volume total de sangue obtido em cada coleta foi de 2 ml, que foi dividido em 2 alíquotas:

 1 ml em seringa heparinizada (S-Monovette para gasometria com 50UI de heparina de lítio/ml sangue, balanceada com Ca; SARSTEDT), para dosagem de Mgi, Cai, U e pH. Esta amostra foi encaminhada ao laboratório em recipiente térmico, resfriado com gelo e a análise foi realizada, em até 1 hora após essa coleta.

 1 ml em tubo seco com gel para dosagem de P, Cr e MgT. Após retração do coágulo, com o material em temperatura ambiente durante 1 hora, o soro foi separado por centrifugação durante 10 minutos, a 3000 rpm, sendo a seguir aliquotado em 2 tubos Eppendorfs com cerca de 500μl cada e armazenado em temperatura a – 20 o _{C .}

3.3.4.1 Técnica de coleta de sangue

 Sangue de cordão umbilical:

Realizada punção de vaso sanguíneo na face fetal da placenta, logo após sua extração, pela própria autora ou por outro profissional médico qualificado.

 3o _{dia de vida (48-72 horas de vida):}

Realizada coleta sangüínea pela própria autora, em vaso sanguíneo superficial de fácil acesso, programando-se a coleta para o momento em que era realizada punção venosa para dosagens laboratoriais de rotina nesses RN.

 7o _{dia de vida :}

A coleta sangüínea do 7o _{dia de vida era realizada de maneira igual à do} 3o _{dia de vida. Nos RN que já haviam obtido alta hospitalar, esta coleta era} realizada em consulta de rotina.

3.3.4.2 Determinações laboratoriais

3.3.4.2.1 Magnésio iônico / Cálcio iônico / pH / Uréia

Essas determinações foram feitas pela técnica do eletrodo íon-seletivo, através do equipamento NOVA Stat Profile M Analyzer - NOVA Biomedical Corporation, Waltham, Massachusetts (Nova Biomedical, Stat Profile M Reference Manual, 1998).

 Magnésio iônico e Cálcio iônico

A medida foi feita através da utilização de eletrodos, com membranas permeáveis seletivas a um único íon de interesse da amostra. Esta permeabilidade seletiva estabelece um potencial elétrico, à medida que o íon abandona seu local na solução. A magnitude deste potencial elétrico é determinada pela diferença de concentração entre os 2 lados da membrana (Nova Biomedical, Stat Profile M Reference Manual, 1998; Dollberg et al.,2001).

 pH

O pH foi medido, usando-se uma membrana de vidro seletiva ao íon hidrogênio. Um lado do vidro ficava em contato com uma solução com pH constante e o outro, em contato com a solução de pH desconhecido. Uma

variação no potencial era desenvolvida, proporcional à diferença de pH entre as soluções. Essa variação no potencial foi medida contra um eletrodo de referência de potencial constante. A magnitude da diferença de potencial era a medida do pH da solução (Nova Biomedical, Stat Profile M Reference Manual,1998; Dollberg et al.,2001).

 Uréia

O Analisador Stat Profile M utiliza a urease, que foi quimicamente ligada à membrana, para catalisar a conversão da uréia, presente na amostra à amônia e CO2 . No pH da amostra, a amônia se converte predominantemente no íon amônio, detectado por um eletrodo seletivo a este íon. A medida é, então, correlacionada à concentração de uréia, presente na amostra original via equação de Nernst (Nova Biomedical, Stat Profile M Reference Manual, 1998; Dollberg et al.,2001).

3.3.4.2.2 Magnésio Total / Fósforo / Creatinina

 Magnésio Total

Determinado pelo Método Colorimétrico de ponto de viragem no equipamento Cobas Mira-Roche Diagnostic System, Inc. Em solução alcalina, o Mg forma um complexo púrpura com o azul de xilidilo. A concentração de Mg foi medida fotometricamente, através da diminuição da

absorbância de azul de xilidilo (Roche Diagnostic Systems,2000; Farrell,1990b).

 Fósforo

Dosado pelo Método Colorimétrico Ultra-violeta, pelo Molibdato de amônia, no equipamento Cobas Integra. O fósforo inorgânico reage com o molibdato de amônia, na presença de ácido sulfúrico, formando o fosfomolibdato. A concentração de fosfomolibdato formada é diretamente proporcional á concentração de fósforo inorgânico. Este é medido através da determinação do aumento da absorbância a 340 nm (Farrell,1990a).

 Creatinina

A dosagem da creatinina sérica foi realizada pela reação cinética tamponada de Jaffé, sem desproteinização, através de automação do equipamento Cobas Integra (Jaffé,1886 APUD Murray,1990).

Este método é baseado na reação de Jaffé, que ocorre entre a creatinina e o íon picrato em meio alcalino, dando origem ao complexo amarelo-vermelho picrato-creatinina. A taxa de formação do corante é diretamente proporcional à concentração de creatinina da amostra, sendo medida pelo aumento da absorbância a um comprimento de onda de 512 nm (Murray,1990).

Para evitar superestimação da creatinina, pela presença de outros compostos plasmáticos, são realizadas modificações, através de substâncias que reduzem o efeito de cromógenos, com o objetivo de aumentar a especificidade para creatinina no plasma (Murray,1990).

3.3.5 Ultra-sonografia transfontanela

O exame foi realizado por médico radiologista, em todos os RN incluídos no estudo, no 2o _{ou 3}o _{dia de vida.}

Foram considerados como anormais, os achados de aumento difuso da ecogenicidade cerebral, secundário ao edema do cérebro infartado; presença de hemorragia intra ou periventricular além de possíveis lesões focais(Rivkin,1997).

3.3.6 Avaliação Neurológica

Foi realizada em todos os RN incluídos no estudo, no 2o _{ou 3}o _{dia de} vida, por Neurologista Pediátrico.

O quadro neurológico da encefalopatia hipóxico–isquêmica (hipotonia/hipertonia, crises convulsivas, alteração dos reflexos tendinosos profundos ou de Moro, coma ou estupor) foi considerado indicativo da presença de asfixia perinatal grave (Rivkin,1997).