Amorf Silisyum Güneş Pilleri

3.2.2.1 Efeito tocolítico do RL-OE sobre as contrações tônicas induzidas por KCl ou por ocitocina

Como descrito por Revuelta, Cantabrana e Hidalgo (1997), as ratas eram tratadas 24 h antes do início dos experimentos com dietilestilbestrol (1 mg/kg) por via subcutânea, para indução do estro, o qual era confirmado pela hiperplasia dos cornos uterinos observados no momento da dissecação do útero. Decorrido este tempo, as ratas eram eutanasiadas por decapitação em guilhotina. Após abertura da cavidade abdominal, era feita a dissecação do útero, colocando-o em uma placa de Petri contendo solução nutritiva de Locke-Ringer a 32 °C sob aeração com carbogênio.

Após cuidadosa dissecação, os dois cornos uterinos eram separados por meio de uma incisão, abertos longitudinalmente e suspensos verticalmente em cubas de banho para órgão isolado (6 mL) e deixados em repouso sob tensão de 1 g durante 40 minutos, tempo necessário para perfeita estabilização da

preparação. Durante esse tempo, a solução nutritiva era trocada a cada 15 minutos para prevenir a interferência de metabólitos.

Após o período de estabilização, uma contração submáxima era obtida com 60 mM de KCl para verificar a funcionalidade do órgão e durante a fase tônica sustentada de uma segunda contração induzida por 60 mM de KCl ou por 10-2 _{UI/mL de ocitocina, o RL-OE era adicionado à cuba de maneira}

cumulativa em preparações diferentes.

O relaxamento produzido pelo óleo essencial foi expresso como a percentagem reversa da contração inicial produzida pelos agentes contráteis. Os valores de Emax e CE50 foram expressos como a média e o erro padrão da

média (e.p.m.) e calculados pelo uso de regressão não linear.

3.2.2.2 Caracterização do bloqueio da contração induzida por ocitocina

O útero era montado como descrito no item 3.2.2.1. A preparação era lavada e após 15 minutos eram induzidas duas curvas concentrações-resposta cumulativas à ocitocina (10-6–10-1 _{UI/mL) de amplitudes similares. Em seguida,}

na ausência da ocitocina, o RL-OE era incubado por 15 minutos em diferentes concentrações e em experimentos independentes. Após este período, na presença do óleo essencial, uma nova curva concentração-resposta cumulativa à ocitocina era obtida.

Os resultados foram avaliados comparando-se a percentagem da resposta contrátil na presença do óleo essencial com aquela obtida pela média das amplitudes máximas das curvas-controle. O efeito inibitório do óleo essencial foi avaliado com base na análise dos valores de CE50 (concentração

molar de uma substância que promove 50% do seu efeito máximo) e do Emax

da ocitocina calculados a partir das curvas concentrações resposta, na ausência e na presença do RL-OE.

3.2.2.3 Avaliação do envolvimento dos receptores adrenérgicos no efeito tocolítico promovido pelo RL-OE

O útero era montado como descrito no item 3.2.2.1. A preparação era lavada e após 15 minutos, era induzida uma contração com ocitocinae sobre o

componente tônico dessa contração o RL-OE era adicionado de forma cumulativa (curva-controle). Em outros experimentos, era adicionado à cuba 300 nM de fentolamina, antagonista dos receptores α adrenérgicos ou 300 nM de propranolol, antagonista dos receptores β adrenérgicos e após 20 minutos uma contração era induzida com ocitocina e sobre o componente tônico dessa contração o óleo era adicionado de forma cumulativa (SHY et al., 2012).

O relaxamento produzido pelo RL-OE foi expresso como a percentagem reversa da contração inicial induzida por ocitocina. Os valores de CE50 foram

calculados a partir das curvas de relaxamento e a potência tocolítica do óleo essencial foi comparada na ausência (controle) e na presença dos antagonistas.

3.2.2.4 Avaliação do envolvimento da via do óxido nítrico no efeito tocolítico promovido pelo RL-OE

O útero era montado como descrito no item 3.2.2.1. A preparação era lavada e após 15 minutos, era induzida uma contração com ocitocinae sobre o componente tônico dessa contração o RL-OE era adicionado de forma cumulativa (curva-controle). Em outros experimentos, era adicionado à cuba 100 μM de L-NAME, inibidor da sintase do óxido nítrico, e após 20 minutos na presença do inibidor uma contração era induzida com ocitocina e sobre o componente tônico dessa contração o RL-OE era adicionado de forma cumulativa (SHY et al., 2012).

O relaxamento produzido pelo RL-OE foi expresso como a percentagem reversa da contração inicial induzida por ocitocina. Os valores de CE50 foram

calculados a partir das curvas de relaxamento e a potência tocolítica do óleo essencial foi comparada na ausência (controle) e na presença do inibidor.

3.2.2.5 Avaliação do envolvimento da via da ciclo-oxigenase no efeito tocolítico promovido pelo RL-OE

O útero era montado como descrito no item 3.2.2.1. A preparação era lavada e após 15 minutos, era induzida uma contração com ocitocinae sobre o componente tônico dessa contração o RL-OE era adicionado de forma

cumulativa (curva-controle). Em outros experimentos, era adicionado à cuba 10 μM de indometacina, um inibidor da ciclo-oxigenase, e após 20 minutos uma contração era induzida com ocitocina e sobre o componente tônico dessa contração o óleo era adicionado de forma cumulativa (SHY et al., 2012).

O relaxamento produzido pelo RL-OE foi expresso como a percentagem reversa da contração inicial induzida por ocitocina. Os valores de CE50 foram

calculados a partir das curvas de relaxamento e a potência tocolítica do óleo essencial foi comparada na ausência (controle) e na presença do inibidor

3.2.2.6 Avaliação do envolvimento dos canais de potássio no efeito tocolítico promovido pelo RL-OE

O útero era retirado e montado segundo o descrito no item 3.2.2.1. A preparação era lavada e após 15 minutos, era induzida uma contração com ocitocina e sobre o componente tônico dessa contração o RL-OE era adicionado de forma cumulativa (curva-controle). Em outros experimentos, era adicionado à cuba 5 mM de CsCl, um bloqueador não seletivo dos canais de K+ (CECCHI et al., 1987; KNOT; BRAYDEN; NELSON, 1996), e após 20 minutos uma contração era induzida com ocitocina e sobre o componente tônico dessa contração o óleo era adicionado de forma cumulativa

O relaxamento produzido pelo RL-OE foi expresso como a percentagem reversa da contração inicial induzida pelo agonista. Os valores de CE50 do

RL-OE foram calculados a partir das curvas concentrações-resposta na presença do bloqueador e comparados com os valores de CE50 do RL-OE na

ausência do bloqueador.

3.2.2.6.1 Efeito do RL-OE sobre às contrações tônicas induzidas por ocitocina, na ausência e na presença de TEA+, apamina, glibenclamida e 4-aminopiridina

O útero era retirado e montado segundo o descrito no item 4.2.2.1. Após este período era induzida uma contração por adição de 10-2 UI/mL de ocitocina e sob o componente tônico da contração era adicionado o RL-OE de forma cumulativa (curva controle). Em outro experimento, era adicionado 1 mM de

tetraetilamônio (TEA+), que nessa concentração é um bloqueador seletivo dos BKCa (HUANG, 1998; MURRAY et al., 1991), 100 nM de apamina, um

bloqueador seletivo dos SKCa (TSAI et al., 1998), 10-5 M de glibenclamida, um

bloqueador dos KATP (HUGHEST; HOLLINGSWORTH, 1997) e, 3 mM de

4-aminopiridina (AARONSON, 2006), por 20 minutos em preparações diferentes. Decorrido esse tempo, uma nova contração pela adição do agonista era induzida na presença do bloqueador. Durante a fase tônica da segunda contração, o RL-OE era adicionado cumulativamente à cuba, em preparações diferentes. O relaxamento produzido pelo RL-OE foi expresso como a percentagem reversa da contração inicial induzida pelo agonista. Os valores de CE50 e do Emax do RL-OE foram calculados a partir das curvas concentrações-

resposta, na ausência e na presença do bloqueador.