Besiyerleri
Besiyerleri genel olarak mikroorganizmaların üremeleri için hazırlanan katı, yarı katı ve sıvı tipleri bulunan ortamlardır.
Farklı tipte besiyerleri bulunmaktadır.
Besiyerleri:
Mikroorganizmaların laboratuvarda büyütmek için tasarlanmış,
Mikroorganizmaların besinsel gereksinimlerini karşılayan, Uygun pH değerine sahip,
Besleyici ortamlardır.
Besiyerlerinin kullanım amaçları Mikroorganizma üretimi, geliştirilmesi, Antibiyotik duyarlılık, sterilizasyon testleri,
Saf kültür eldesi, Tanımlama,
Sayım,
Biyoteknolojik ürün eldesi, Vb.
Katı ve Sıvı Besiyerleri Katı besiyerleri
Çoğunlukla %1.5 ve üzeri agar içeren besiyerleridir. Bu besiyerleri oda sıcaklığında katı haldedir ve ısıtılınca
sıvılaşırlar. Bu besiyerleri sıvı halde iken steril petri
kaplarına ya da steril deney tüplerine dökülerek katılaşmaları beklenir.
Katı besiyerleri sayım, izolasyon ve saklama gibi amaçlarla kullanılırlar.
Not: Pek çok hazır besiyerinin tarifi besiyeri kabının üzerinde yazmaktadır!!!
Katı ve Sıvı Besiyerleri Sıvı besiyerleri
Agar içermeyen ve hem oda sıcaklığında hem de ısıtılınca sıvı formda olan besiyerleridir. Sıvı besiyerleri Erlen-Meyer
şişelerde, deney tüplerinde yada mikroplakalarda kullanılabilir.
Sıvı besiyerleri optik yoğunluk, zenginleştirme,
biyoteknolojik ürün eldesi gibi farklı amaçlarla kullanılırlar.
Not: Pek çok hazır besiyerinin tarifi besiyeri kabının üzerinde yazmaktadır!!!
Deney: Besiyerlerinin Sterilizasyonu ve Hazırlanması
• Malzemeler
• Nutrient agar, nutrient broth,
• Steril petri kapları, steril cam pipet yada tek kullanımlık steril cam pipetler deney tüpleri
• Otoklav
• Su banyosu
• Bunzen beki veya steril kabin
Deney: Besiyerlerinin Sterilizasyonu ve Hazırlanması Nutrient Broth (NB) ve Nutrient Agar Besiyerlerinin
Hazırlanışı.
NB Besiyeri: 8 gram nutrient broth 1000 mL suda çözünür, çözelti vidalı kapaklı, ısıya dayanıklı cam şişeye
konulur, şişenin ağzı tam kapatılmaz ve üzerine alüminyum folyo kapatılır. Otoklav bandı şişeye
yapıştırılır, şişe etiketlenir.
121 ºC’de 15 dakika sterilize edilir.
Deney: Besiyerlerinin Sterilizasyonu ve Hazırlanması Nutrient Broth (NB) ve Nutrient Agar Besiyerlerinin
Hazırlanışı.
NA Besiyeri: 8 gram nutrient broth ve 15 gram agar tartılır. Çözeltinin hacmi 1000 mL’ye tamamlanır. Çözelti vidalı kapaklı, ısıya dayanıklı cam şişeye veya Erlen-Meyer
şişeye konulur, şişenin ağzı tam kapatılmaz ve üzerine alüminyum folyo kapatılır. Otoklav bandı şişeye yapıştırılır,
şişe etiketlenir.
121 ºC’de 15 dakika sterilize edilir.
Deney: Besiyerlerinin Sterilizasyonu ve Hazırlanması
Hazırlanan NA ve NB besiyerlerinin otoklavdan çıkması ve soğuması beklenir.
1)Su banyosu 60 ºC’ye ayarlanır. Belirli bir dereceye soğuyan besiyerleri tam olarak soğumamaları için su banyosuna alınır.
2) NA besiyeri steril koşullarda (bunzen bekinin 10 cm3’lük alanı içerisinde ya da steril kabin içerisinde petri kaplarına steril cam pipetler ile 20 mL olacak şekilde dökülür. Aynı besiyeri
cam deney tüplerine aynı şekilde 10 mL olacak şekilde transfer edilir. Deney tüpleri bir yükseltinin üzerine konularak yan yatmaları sağlanır. Besiyerlerinin donması beklenir.
3) NB besiyeri Steril Erlen-Meyer şişelere ve cam deney tüplerine 10 mL olacak şekilde transfer edilir.
4) Her grup 1 adet petri kabını ve 1 adet deney tüpünün ağzını 2 gün boyunca açık bırakarak, açık bırakılan ve bırakılmayan ortamlar arasındaki farkları gözler.
• Hazırlanan besiyerleri ilerleyen deneylerde kullanılır.
