SPERMANIN ALINMASISPERMANIN ALINMASISuni VaginaSuni VaginaElektro-ejakülatörElektro-ejakülatörAbdominal masajAbdominal masajPenis masajıPenis masajıAmpulla masajıAmpulla masajıDiğer yöntemler (cauda epididimis, Diğer yöntemler (cauda epididimis, pre

(1)

SPERMANIN ALINMASI SPERMANIN ALINMASI

 Suni Vagina Suni Vagina

 Elektro-ejakülatör Elektro-ejakülatör

 Abdominal masaj Abdominal masaj

 Penis masajı Penis masajı

 Ampulla masajı Ampulla masajı

 Diğer yöntemler (cauda epididimis, Diğer yöntemler (cauda epididimis, prezervatif vs.)

prezervatif vs.)

(2)

Suni vagina Suni vagina

 Sıcaklık Sıcaklık

 Basınç Basınç

 Kayganlık Kayganlık

(3)

(4)

(5)

(6)

(7)

(8)

(9)

(10)

(11)

(12)

(13)

(14)

Elektro-ejakülatör

(15)

Masaj

(16)

(17)

(18)

(19)

(20)

(21)

(22)

(23)

(24)

Spermanın muayenesi Spermanın muayenesi

 Makroskobik muayene Makroskobik muayene

 Miktar Miktar

 Renk Renk

 Koku Koku

 Kıvam Kıvam

(25)

 Mikroskobik muayeneMikroskobik muayene

 Kitle hareketiKitle hareketi

 MotiliteMotilite

 YoğunlukYoğunluk

 HemasitometrikHemasitometrik

 FotolometrikFotolometrik

 ElektronikElektronik

 Anormal spermatozoa oranıAnormal spermatozoa oranı

 Boyama yöntemi (karras, giemsa, eosin, nigrosin,metilen Boyama yöntemi (karras, giemsa, eosin, nigrosin,metilen blue,opal blue, fast green, brom fenol blue)

blue,opal blue, fast green, brom fenol blue)

 Sıvı fiksasyon yöntemiSıvı fiksasyon yöntemi

 Ölü spermatozoa oranı (viabilite)Ölü spermatozoa oranı (viabilite)

 Fluoresan boyama tekniğiFluoresan boyama tekniği

 Eosin, nigrosinEosin, nigrosin

 EosinEosin

(26)

 Fiziko-kimyasal muayeneFiziko-kimyasal muayene

 pHpH

 Dayanıklılık testleriDayanıklılık testleri

 TermorezistansTermorezistans

 Tuzlu suTuzlu su

 Soğuk şokuSoğuk şoku

 Metilen mavisi redüksiyon testiMetilen mavisi redüksiyon testi

 Fruktolisis testiFruktolisis testi

 Spermanın bileşimiSpermanın bileşimi

 Spermatozoon Spermatozoon

 Seminal plasmaSeminal plasma

(27)

Motilite

(28)

Kitle hareketi Kitle hareketi

(0-5 arasında değerlendirilir

(0-5 arasında değerlendirilir ) )

(29)

(30)

(31)

(32)

(33)

YOĞUNLUK YOĞUNLUK

 Hemositometrik Hemositometrik

 Fotolometrik Fotolometrik

 Elektronik sayaç Elektronik sayaç

(34)

YOĞUNLUK YOĞUNLUK

Yoğunluk (mm

Yoğunluk (mm³³)= Sayılan hücre )= Sayılan hücre

Sayılan büyük kare x büyük Sayılan büyük kare x büyük

kare hacmi x sulandırma oranıkare hacmi x sulandırma oranı Yoğunluk (mm

Yoğunluk (mm³³)= 60 =)= 60 = 0.3x10 0.3x10⁶⁶mmmm³³

10 x 1/250 x 1/20010 x 1/250 x 1/200

(35)

Anormal Spermatozoa Anormal Spermatozoa

 Boyama yöntemleri Boyama yöntemleri

 Giemsa, Karras, metilen blue, opal blue, çini Giemsa, Karras, metilen blue, opal blue, çini mürekkebi, eosin-nigrosin v.s.

mürekkebi, eosin-nigrosin v.s.

 Fiksasyon yöntemi Fiksasyon yöntemi

 Hancock fix. solusyonu Hancock fix. solusyonu

 CASA CASA

(36)

 Giemsa Giemsa

 Froti Froti

 10 dk metanolde tesbit 10 dk metanolde tesbit

 30 dk 1/10 luk giemsa ile boyama 30 dk 1/10 luk giemsa ile boyama

 Yıkama ve kurutma Yıkama ve kurutma

(37)

Anormal Spermatozoa

(38)

(39)

(40)

Ölü Spermatozoa Ölü Spermatozoa

 Fluoresan boyama tekniğiFluoresan boyama tekniği

 Spermatozoal viability was assessed by a dual staining method with Spermatozoal viability was assessed by a dual staining method with CAM/PI (calcein AM / propidium iodide)

CAM/PI (calcein AM / propidium iodide)

 10 µl of CAM (1 mg/mL in DMSO) and 500 µl of PI (0.02 mg/mL in BTS) 10 µl of CAM (1 mg/mL in DMSO) and 500 µl of PI (0.02 mg/mL in BTS) were mixed with 500µl of BTS.

were mixed with 500µl of BTS.

 For staining, 100 µl aliquots of semen were placed into 3 ml tubes, and For staining, 100 µl aliquots of semen were placed into 3 ml tubes, and 100 µl of CAM/PI solution was added. Each sample was further

100 µl of CAM/PI solution was added. Each sample was further incubated for 10 min in the dark at 35oC.

incubated for 10 min in the dark at 35oC.

 Subsamples of the stained suspension (5 µl) were placed on clean Subsamples of the stained suspension (5 µl) were placed on clean microscopic slides and overlaid carefully with coverslips. The smears microscopic slides and overlaid carefully with coverslips. The smears were evaluated under an epifluorescence microscope using 500 x were evaluated under an epifluorescence microscope using 500 x magnification.

magnification.

 For each semen sample, 200 spermatozoa were differentiated into For each semen sample, 200 spermatozoa were differentiated into green (live) and red (dead) cell categories.

green (live) and red (dead) cell categories.

 Eosin yada eosin nigrosinEosin yada eosin nigrosin

 %3 lük sodyum sitrat içinde %2 lik eosin%3 lük sodyum sitrat içinde %2 lik eosin

 CASACASA

(41)

Viabilite (Ölü sp)

(42)

(43)

Fiziko-kimyasal muayene Fiziko-kimyasal muayene

 pH (6.5-7.5)pH (6.5-7.5)

 Osmotik basınç (izoosmotik)Osmotik basınç (izoosmotik)

 Dayanıklılık testleriDayanıklılık testleri

 Termorezistans (40-42 derecede) Termorezistans (40-42 derecede)

 Tuzlu su (%1 lik tuzlu su da en az 30 dk)Tuzlu su (%1 lik tuzlu su da en az 30 dk)

 Soğuk şoku (0-37 derece)Soğuk şoku (0-37 derece)

 Metilen mavisi redüksiyon testiMetilen mavisi redüksiyon testi

 %3 lük sodyum sitrat içinde %0.1 lik metilen mavisi%3 lük sodyum sitrat içinde %0.1 lik metilen mavisi

 1 kısım sperma, 2 kısım boya1 kısım sperma, 2 kısım boya

 Anaerobik ortam da 40 derecede 3-6 dakikaAnaerobik ortam da 40 derecede 3-6 dakika

 Fruktolisis testiFruktolisis testi

 1 milyar spermatozoonun 37 derecede 1 saatte tükettiği fruktoz 1 milyar spermatozoonun 37 derecede 1 saatte tükettiği fruktoz miktarı (boğa için 2 mg)

miktarı (boğa için 2 mg)

(44)

SPERMANIN BİLEŞİMİ

(45)

(46)

(47)

(48)

(49)